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沙漠嘎不同部位总黄酮和艾纳香素含量比较



全 文 :第 33 卷 第 1 期
2 0 1 5 年 1 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 33 No. 1
Jan. 2 0 1 5





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DOI:10. 13193 / j. issn. 1673-7717. 2015. 01. 059
沙漠嘎不同部位总黄酮和艾纳香素含量比较
王林燕,马群,白洁,冯欣,石航,乔延江
(北京中医药大学,北京 100102)
摘 要:目的:测定蒙药沙漠嘎不同部位总黄酮和艾纳香素的含量,为合理开发沙漠嘎资源提供依据。方法:
采用紫外—可见分光光度法,以橙皮素为对照品,测定总黄酮含量;采用高效液相色谱法,测定艾纳香素含量。结
果:沙漠嘎不同部位的总黄酮和艾纳香素含量不同,有较大差异:其中叶的总黄酮和艾纳香素含量较高,而以 6 月
份采收的叶含量最高;茎的总黄酮和艾纳香素含量较低。结论:沙漠嘎不同部位总黄酮和艾纳香素含量存在差
异,为传统用药习惯嫩枝叶入药提供实验依据。
关键词:沙漠嘎;总黄酮;艾纳香素;含量测定
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2015)01-0196-03
Comparison of Contents of Total Flavonoids and Blumeatin in Various
Medicinal Parts of Artemisia Halodendron
WANG Linyan,MA qun,BAI Jie,FENG Xin,SHI Hang,QIAO Yanjiang
(Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China)
Abstract:Objective:The contents of total flavonoids and blumeatin in various medicinal parts of Artemisia Haloden-
dron were determined directly to provide scientific bases for reasonably developing and utilizing resources of Artemisia
Halodendron. Method:The ultraviolet - visible spectrophotometry was employed to detect the content of the total fla-
vonoids and the high - performance liquid chromatography was employed to detect the content of blumeatin. Results:The
content of the total flavonoids and blumeatin in the leaves of Artemisia Halodendron was the highest while in the stem the
lowest. Conclusion:The difference of total flavonoids and blumeatin content in various different parts of Amomi Fructus is
significant. It can provide an experimental basis for the traditional preparation method.
Key words:Artemisia Halodendron.;total flavonoids;blumeatin;content determination
收稿日期:2014 - 08 - 20
基金项目:北京市教育委员会共建项目(521 /0101196)
作者简介:王林燕(1990 -) ,女,浙江温州人,硕士研究生,研究方
向:中药新药研发。
通讯作者:乔延江(1956 -) ,男,山东威海人,教授,博士,研究方
向:中药过程分析、中药信息工程研究。E-mail:yjqiao@
263. net。
沙漠嘎,又名沙蒿、盐蒿[1],为菊科(Compositae)蒿属
(Artemisia)植物差把嘎蒿 Artemisia halodendron Turcz. ex
Bess.的嫩枝叶。沙漠嘎,味辛性温,具有止咳,祛痰,平喘,
解表,祛湿的功效。主治慢性气管炎、哮喘;风湿性关节炎;
感冒,斑疹伤寒[2]。在陕西榆林、山西吕梁、内蒙古科尔
沁、赤峰等地民间使用较多,多以种子入药,单味药使
用[3],曾被地方医院开发成注射剂应用于临床哮喘治疗,
疗效显著[4]。课题组前期对沙漠嘎种子进行了化学成
分[5 - 9]和抗炎、平喘[10 - 11]等药效学方面的研究,确立总黄
酮为其有效部位;对地上部分进行细胞实验,表明其有效成
分艾纳香素具有抑制肥大细胞脱颗粒作用[12]。综合文献
所述,沙漠嘎种子与地上部分均能治疗哮喘,为合理利用沙
漠嘎资源,本研究对叶、茎、枝条以及种子进行总黄酮和艾
纳香素含量测定。
1 材料、仪器与试剂
1. 1 药材
采自内蒙古通辽市,经北京中医药大学刘春生教授鉴
定为菊科蒿属植物沙漠嘎的地上部分和种子。地上部分采
收季节分别为 2013 年 6 月份和 2013 年 9 月份,种子采收
季节为 2012 年 12 月份。
1. 2 仪器
HH - 4 数显恒温水浴锅,国华电器有限公司;
2862HUV/VIS SPETRO photometer,日本岛津公司;LC -
20AT岛津高效液相色谱仪,日本岛津公司;电子天平 BS -
124S,北京赛多利斯仪器系统有限公司。
1. 3 试剂
橙皮素对照品(购自中国药品生物制品检定所);艾纳
香素对照品(为实验室制备,纯度 > 98%)。屈臣氏蒸馏
水,广州屈臣氏食品饮料有限公司;甲醇,色谱纯,fisher sci-
entific;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 供试药的制备
2. 1. 1 对照品溶液的制备 (1)精密称取橙皮素对照品
3. 96 mg,用甲醇溶解并定容于 50 mL 容量瓶中,得 0. 0792
mg /mL的橙皮素标准溶液。(2)精密称取艾纳香素对照品
4. 13 mg,加甲醇溶液定容至 25 mL,得 0. 1652 mg /mL的艾
第 33 卷 第 1 期
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中 华 中 医 药 学 刊
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纳香素标准溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 精密称取样品粉末(过 40 目
筛)1 g,置平底烧瓶中,加甲醇 40 mL,冷浸 30 min后,水浴
加热回流 60 min,分取滤液,药渣加 40 mL 甲醇,继续水浴
加热回流 60 min,过滤,药渣用 10 mL甲醇洗涤,合并滤液,
滤液置 100 mL量瓶中,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,作供试
品溶液,待用[13]。
2. 2 紫外—可见分光光度法测定总黄酮
2. 2. 1 测定波长的确定 取橙皮素标准溶液 1 mL,置于 25
mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,以相应试剂为空白,在
190 ~800 nm的波长范围内进行全波长扫描,测定橙皮素对
照品的吸光度。取“2. 1. 2”项下供试品溶液进行适当稀释,
同法对供试品进行全波长扫描。经比较确定测定波长为
288 nm。对照品与样品的紫外吸收如图 1 ~图 2所示。
图 1 橙皮素光谱图
图 2 样品光谱图
2. 2. 2 方法学考察 (1)标准曲线的制备:精密量取橙皮
素对照品溶液 0、2. 0、2. 5、3. 0、4. 0、5. 0、5. 5 mL,分别置于
50 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,在 288 nm 波长处测
定吸光度,以橙皮素溶液浓度(X)为横坐标,测得的吸光度
(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y = 73. 131X -
0. 004(r = 0. 999 9)。结果表明,橙皮素浓度在 0 ~ 0. 008 7
mg /mL范围内线性关系良好。
(2)精密度试验:取 2 mL对照品溶液于 25 mL 容量瓶
中,加甲醇定容至刻度,依标准曲线法连续测定 6 次,计算
对照品吸光度的平均值为 0. 458,RSD = 0. 14%,表明本法
精密度良好。
(3)重复性试验:取同一批样品适量,按照“2. 1. 2”项
下方法平行制备 6 份供试品溶液,测定吸光度,计算样品吸
光度平均值为 0. 291,RSD = 1. 60%,表明本法重现性良好。
(4)稳定性试验:取同一供试品溶液,分别于配置后 0、
2、4、6、8、10、12、24 h后,测定吸光度,计算样品吸光度平均
值为 0. 382,RSD = 1. 74%,表明供试品在 24 h 内基本稳
定。
(5)回收率试验:采用加样回收方法,取同一批已知含
量的样品 6份,精密加入一定量的橙皮素对照品溶液(浓度
为 1. 0671 mg /mL),按照“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液,
测定吸光度,计算回收率。结果平均回收率为 99. 14%,RSD
= 2. 21%,表明本法回收率较好。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
试验
序号
供试品
取样量
(g)
供试品
含量
(mg)
对照品
加入量
(mg)
测得
总量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率
(%)
RSD
(%)
1 0. 201 3 1. 127 3 1. 067 1 2. 121 1 0. 966 6
2 0. 201 2 1. 126 5 1. 067 1 2. 130 8 0. 971 4
3 0. 196 3 1. 099 2 1. 067 1 2. 179 2 1. 006 0
4 0. 199 6 1. 117 9 1. 067 1 2. 160 0 0. 988 6
5 0. 201 8 1. 129 9 1. 067 1 2. 162 7 0. 984 4
6 0. 201 4 1. 128 0 1. 067 1 2. 263 7 1. 031 3
99. 14 2. 21
2. 2. 3 含量测定 取不同部位沙漠嘎药材,制备供试品溶
液,根据其含量不同,取不同体积溶液,置 25 mL量瓶中,按
标准曲线绘制项下操作,于 288 nm 波长处测定吸收值,代
入回归方程,计算总黄酮的含量。结果见图 3 所示。
图 3 沙漠嘎不同部位总黄酮含量比较
从样品总黄酮测定的最终结果发现,不同部位相同采
收时期的总黄酮存在差异性,含量高低顺序为:叶 >枝条 >
茎,且叶中总黄酮含量远远高于其余部位;相同部位不同采
收时期的总黄酮存在差异性,06 -叶 > 09 -叶,06 -枝 < 09
-枝,06 -茎 < 09 -茎;叶 > 09 -枝 >种子 > 06 -枝 >茎。
2. 3 高效液相色谱法测定艾纳香素含量
2. 3. 1 色谱条件 Anglient—C18色谱柱(150 mm ×46 mm,
5 μm) ;流动相为甲醇—0. 4%磷酸水(50 ∶ 50) ;柱温:30
℃;流速 0. 8 mL /min;检测波长 288 nm;进样量 20 μL。
2. 3. 2 方法学考察 (1)线性关系考察:精密吸取对照品
溶液 0. 2、0. 4、0. 5、0. 6、0. 8、1 mL,置于 10 mL量瓶中,甲醇
定容至刻度,摇匀。分别进样 20 μL,以艾纳香素含量为横
坐标,峰面积为纵坐标,进行分析,得回归方程 Y =
86 887 260. 358 7X - 68 807. 714 3,r = 0. 999 9,表明:艾纳
香素浓度(X)在 0. 003 3 ~ 0. 016 5 mg /mL范围内与峰面积
(Y)呈良好线性关系。
(2)精密度试验:将艾纳香素对照品溶液在上述色谱
条件下连续进样 6 次,测定峰面积,艾纳香素峰面积的 RSD
值为 0. 35%,表明仪器精密度良好。
(3)重现性试验:取同一批药材 6 份,按“2. 1. 2”项下
方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行分析,测定艾纳
香素含量,RSD值为 1. 45%,表明该方法重复性良好。
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(4)稳定性试验:取同一供试品溶液,分别在配制后 0、
2、4、6、8、10 h 进样分析,艾纳香素峰面积的 RSD 值为
0. 59%,说明供试品溶液在 10 h内稳定。
(5)回收率试验:采用加样回收方法,精密称取同一批
已知含量的样品 6 份,精密加入一定量的对照品溶液,制备
供试品溶液,测定艾纳香素含量,计算回收率。结果平均回
收率为 100. 52%,RSD = 1. 19%,表明本法回收率较好。
结果见表 2。
表 2 加样回收率试验结果
试验
序号
供试品
取样量
(mg)
供试品
含量
(mg)
对照品
加入量
(mg)
测得
总量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率
(%)
RSD
(%)
1 250. 9 0. 116 7 0. 156 0. 272 10 99. 647 4
2 250. 3 0. 116 4 0. 156 0. 272 20 99. 890 4
3 253. 5 0. 117 9 0. 156 0. 275 01 100. 737 9
4 255. 7 0. 118 9 0. 156 0. 278 44 102. 281 0
5 249. 5 0. 116 0 0. 156 0. 274 29 101. 468 5
6 248. 7 0. 115 6 0. 156 0. 270 22 99. 098 0
100. 52 1. 19
2. 3. 3 样品含量测定 取样品溶液,按上述 HPLC色谱测
定条件测定,计算艾纳香素含量。色谱图见图 4 ~图 5,艾
纳香素含量结果见图 6 所示。
图 4 艾纳香素对照品
图 5 沙漠嘎样品
图 6 沙漠嘎不同部位艾纳香素含量比较
从样品艾纳香素含量测定的最终结果发现,相同时期
不同部位的艾纳香素存在差异性,含量高低顺序为:叶 >枝
条 >种子 >茎。并且叶中艾纳香素含量远远高于其余部
位。不同采收时期相同部位的艾纳香素含量存在差异性,6
月份采收的各部位艾纳香素含量均大于 9 月份。
3 讨论
3. 1 提取方法选择
总黄酮提取时,本实验曾采用超声提取药材中的总黄
酮和回流提取总黄酮进行比较,结果表明回流提取的效果
优于超声提取,因此本实验选用回流提取。
3. 2 对照品选择
选择总黄酮含量测定的对照品时,本实验对芦丁和橙
皮素对照品与供试品溶液进行了比较,结果表明橙皮素的
最大吸收波长更接近于供试品。分析其原因可能芦丁为黄
酮醇苷,橙皮素为二氢黄酮类化合物,而前期实验研究表
明,沙漠嘎中的黄酮类化合物主要为二氢黄酮类,因此本实
验选用橙皮素作为总黄酮测定的对照品。
3. 3 结果讨论
黄酮类化合物大多在植物的叶中合成,分析结果提示
我们在叶中形成的黄酮类成分随着植株生长,出现转移,这
可能是导致 9 月份采收的沙漠嘎叶中总黄酮含量降低,而
相应枝条和茎中的总黄酮含量增加[14]。结合总黄酮的结
果分析,艾纳香素可能在叶中合成,但是在运至根茎及根的
过程中可能得到重新改造,或者仅在叶中形成黄酮类成分
的基本骨架,随后在叶和根茎中分别由不同的酶群给予不
同的修饰[14]。但要进一步探究总黄酮的变化规律需要进
行总黄酮动态积累等方面的实验研究。
结合文献记载[2],将沙漠嘎嫩枝叶作为入药部位存在
科学依据。而民间用药多以种子作为入药部位,其总黄酮
和艾纳香素含量远远小于叶子,但是不能只凭借有效成分
判断其治疗效果,我们应当结合药理作用进行进一步深入
研究。本实验对不同部位的有效成分进行研究,为后期的
药理研究和临床试验提供参考。
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