全 文 ：第 1 期
1 9 7 5年 3 月
南 京 农 业 大 学 学 报
Jo u a r nlo f N a nj ing Ag r iu el tu a rl U n iv ers ity
摊 .1
Ma r e h1 9 87
芜著花叶病毒非蚜传株系的鉴定
胡稳奇’ 许志 刚
(南京农业大学
渡祖芹 方 中达
植物病理教研组 )
提要 1 9 83年从 南京蚕豆 苗上采得斑驳症状 的标样 , 分离到病 毒标样 B 一 9 8。
用汁液摩擦接种在 10 科 50 种植物上 , 有 7 科 20 种植物表现不 同类型的症状 。 在觅色
黎上产生大块的褪 色枯斑 , 在油 菜、 青菜上产生 系统花叶症状 。 热钝化温度 为5 一
60 ℃ , 稀释限点 为 1 -0 3一 1 0 一 4 , 体外存活期 为 n 天 ( 8 ℃ ) 。 不能经 蚜 虫传播 , 也不能
经种子传毒。 病叶 的汁 液及粗提纯样品在 电镜下均可 见到 大小 为 68 0一 8 50 X ]. 2一
1 5n m 的线状病毒粒体 。 兔 疫电 镜和 S D S 一琼脂 免疫双扩散试验表明 , 病毒分 离物
B 一98 与芜等花叶病毒有十分密切的血清学关 系。 B一98 为芜哥花叶病毒的一个 非蚜
传株系 , 定名 为 T u M V 一N A T 株 系。
关键词 芜昔花叶病毒 ; 非蚜 虫传播株系
芜著花 叶病毒 ( T u M V )是在 国内分布十分广泛 、 为害又很严重的十字花科的病毒病的病
原物 , 国内外有关该病毒的研究很多 。 许志刚和 C co k b ia n 首次报道了在蚕豆上有 T u M V 侵染
为害 〔 ` ’ , P r o vi d e n it 等则报道在豌豆和花生上也有 T u M V发生 “ ’ 。 T u M V是 马铃薯Y病毒
组的成员 , 通常由蚜虫以非持久性的方式传播 「’ 。 ’ 。 但是 , 某些本来是 由蚜传的病毒 , 如菜
豆黄花叶病毒 、 花生斑驳病毒 、 西瓜花叶病毒 、 黄瓜花叶病毒和花榔菜花叶病毒等 , 在自然
界也存在着一些蚜虫不能传播的情况 ” , ` , ” 。
本文首次报道从蚕豆上分离到芜普花叶病毒非蚜虫传毒株系的鉴定结果 。
卜-
材 料 与 方 法
1
. 病毒来源 1 9 8 3年 3月至 1 9 8 5年 5月 , 在南京 、 常州 、 杭州 、 成都采集到蚕豆病毒标
样 1 20 余份 。 经初步筛选 , 得到六个症状表现基本一致的病毒分离 物 ( B一 98 , B一 48 , B 一 1 1 9 ,
B一1 2 3 , B一1 0 7和 B一 1 2 1) 。 标样 B一 9 8是 1 9 8 3年 5 月在南京采到 , 重点对 B一 9 8作试验和鉴定 。
2
. 抗血清来源 芜著花叶病毒的抗血清 S 一84 由上海农科院袁贤榕提供 , E一 1 9 由许志刚
在英 国制备 。
3
. 寄主范 围和体外抗性反应 按常规的汁液摩擦接种方法测定 。 一个月内观察记载结
果 , 并用芡色黎检索有无病株 .
4
. 蚜虫传毒试验 蚜虫的非持久性和半持久性传播试验均按常规方法进行 . 蚜虫经饥
饿处理 2小时后放在病叶上饲毒 5分钟 (非持久性试验 )或 30 分钟 (半持久性试验 ) , 然后挑移
至健株上 , 每株接蚜 5 一 10 头 , 接毒 2 4小时后杀蚜 , 放在温室中培养观察 。
工作中得到陈永营老师协助 , 上海农科院袁贤榕同志提供抗血清 , 顾苏同志协助摄影 , 特致 谢意 .
水 本校硕士研究生 。 本文于 1 9 8 6年 5 月 8 日收到 。
4 2南 京 农 业 大 学 学 报 1 期
5
. 种子传毒试验 从人工接种发病的蚕豆病株上收获种子 , 播种于防虫网室内 , 出苗
一个月后观察有无病株 , 并用芡色黎检索 .
6
. 病毒的粗提纯 按朱培坤的方法 ` ” 进行 。 粗提纯样品用于病毒粒体的电镜 观察 .
7
. 血清学试验
( 1 ) 兔疫吸附 电镜 ( I S E M )试验 采用 V a n R e g e n m o r t e l描述的方法 「” ’ 。 抗原是 i , 1
(W / V) 的病叶汁液 , 抗 血清用 0 . 85 肠的生理盐水稀释至 1 / 1 0 。 先将铜网的有膜面置于 约
30 川的抗血清液滴 (稀释至 1/ 1 0 0 )上 , 20 ℃下吸附 1小时 , 清洗 ; 然后置抗原液滴上 , 20 ℃下
孵育 2 小时 , 清洗 ; 再用 ] . 滴 2 % (p H 6 . 7 )磷钨酸 ( P T A )负染 2 分钟 , 晾千后置电镜下观察 。
( z) 杭体修饰 ( d e o or at i n g ) 试验 按上述方法 制样在负染以前的铜网 , 放在抗血清液
滴上 ( 1 , 1 0 0) 孵育 1小时 , 清洗后再用 P T A 负染 。
以上试验均以正常兔血清为对照血清 , 以标准的菜豆花叶病毒 ( B C M V和 B Y M V) 为抗
原对照 。
( 3 ) S D S 琼脂 元疫双扩散试验 用含 0 . 8 肠琼脂糖 、 0 . 2肠 S D S 和 N a N 3 的琼脂板 进 行
双扩散试验 。 打孔后 , 每孔加 3 0醉样液 , 中心孔为抗血清 。
试 验 结 果
(一 )寄主范 围与抗性反应
B一 9 8病株汁液接种在 10 科 50 种不同的供试植物上 , 可以在 7 科 20 种植物上表 现 症 状 ,
寄主范围及反应列于表 1 。 许多蚕豆品种 (如启豆 2 号 , 三 白蚕豆等 )接种后 , 接种叶上出现
红褐色的坏死斑 , 上部表现系统的灰 白色斑驳症状 . 在油菜 、 青菜上为系统花叶症状 。
B一 98 的钝化温度为 5 一60 ℃ , 稀释限点为 1 0 ’ 3一 1 0 “ 4 , 体外存活期为 n 天 ( 8 ℃ ) 。
一夕
表 1 1
寄 主 植 物 主要症状 }!
寄 主 植 物 主要症状
1
. 豆科 L e o u叨 `” o s a e
蚕豆夕 ` e i a f a b a
绿豆 p h a s e o l : ` s , , a d ` a 才u s
紫云英A s t , a 夕0 1“ 5 5 ` ” i c u s
葫卢 巴 T r 匆 o ” e l l a f o e件 u饥 g r a ` C u饥
2
.茄科 s o l a ” a C召 a 。
心叶烟 N ` c o t ` 。 a 夕 l “ t `” O s a
克氏烟N . e l e v e l a ” d ` i -
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注 : 接种叶症状 /系统症状 。
S M— 系统花叶 ; S t— 矮缩 ;
L N / C h l
/ C h l
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萝 卜R a 夕h a u s s a t i ` u s
油莱 ( B .再 a p “ l la ) 品种 :皿。 ” “ “
芥莱 B . j娜 “ “ a
芜著甘兰 B . 、 a p 。厉 a s “ `ca
6
. 番杏科 A i o a a e e a l
番杏丁 e t t a 夕。 。 ` a e即 e ” s a
7
. 菊科 C o , 夕 0 5` t a e
百 日菊 Z `。 a ` a e l e夕 a ” S
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芜色黎 c h e O O刀O d `“ 哪
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L N— 接种叶坏死斑 ; S N一一系统坏死斑 ; W M 。 一一 白色斑驳症状 ;C h l— 褪绿斑 ; Y S— 黄斑 ; R S— 环斑 。
l 期 胡稳奇等
(二 )蚜虫传播试验
芜普花叶病毒非蚜传株系的鉴定
不同蚜虫种类对 B一 98 的传毒试验表明 ,
性方式从蚕豆病株传至蚕豆 (表 2 ) 。
B 一98 不能通过桃蚜 、 豆蚜等七种蚜虫以非持 久
不 同 蚜 虫 种 、 类 对 B 一98 的 传 播
蚜 虫 发病株 /接种株 蚜 虫 种 !发病株 /接种株
豆蚜 ( A 夕h i “
` . 1 . r漏’ 、 . ” ” r .勺
l夕 c i ” e “ )
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0 / 。。
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萝 卜蚜 (兀 `… “ `一 `仍 · )一“ / 6 “ {{豌豆蚜 ( A “ 夕 r ` “ O 吕 ` , , ” o九 刀乙夕“ 爪 )“ / 3 7 …麦二叉蚜 (名 口h ` “ a ” h ` “ “ ” a , `” “ “ ’“ / 6 6 {}
0 / 5 3
0 / 3 0
0 /2 4
B一 98 也不能藉桃蚜以非持久方式从蚕豆病株传给青菜 (。 / 1 5) 、 矮牵牛 (。 / 1 9 ) 、 菠 菜
(。 / 1 7 )和百 日菊 (0 / 1 3) ; 同样 , 也不能从上述这些植物上传给蚕豆 。 此外 , B 一 98 也不能通 过半
持久方式由桃蚜 ( o / 4 9) 或豆蚜 (0 / 7 0) 传播 .
(三 )种子传毒试脸
用苗期接种的病株种子 , 播种后育苗 168 株 , 用花期接种的病株种子育 苗 2 38 株 , 经 观
察 , 均未发现有病毒病的症状 , 用觅色蔡检索也未发现带毒植株 , 表明 B一 98 不能经 蚕 豆 种
子传毒 。
(四 )病毒粒体的电镜观察
电镜下 , 病叶汁液和提纯样品中均可见到均一的线状粒体 . 测定粗提纯样品 中 的1 0 个
病毒粒体 , 长度在 6 80 一 8 5 o n m 之间 , 平均长度为7 26n m , 宽度为 12 一1 5n m 。
(五 )血清学试验
1
. 免疫吸附 电镜 (I S E M )试验 在 I S E M试验中 , 吸附过芜著花叶病毒抗血清的铜网
能吸附到大量的 B一98 病毒粒体 ,但不能吸附 B Y M V和 B C M V 的病毒粒体 , 正常血清对照 中也
只能吸附到极少量的 B一98 病毒粒体 (表 3 ) 。
表3 I S E M试验结果
电镜下平均每视野 ( 10 x 10 。 m Z )的粒体数
抗血清
】B 一 98
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E ` ” ”
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` ” · 7 5
5 一8 4 { 3 9
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0 9
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” Y M V
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“ C M V …正常血 ,青对照
{
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}… / } O }
芜蔷花叶病 毒 的 抗 血 清 ( S一 84 和 E 1 9 9 )对
B一 9 8粒体均有很强的修饰 作 用 (照片 ) , 但
对 BY M V 粒体无修饰作用 。
2
.
S D S 一琼脂 免疫双扩散试验 B 一98
与芜普花叶病毒抗血清之间可形成专一的乳 照 片 芜著花叶病毒抗血清对
白色沉淀线。 B 一98 粒体的修饰作用
以上血清学试验表明 , B一98 与芜著花叶病毒有十分密切的血清学关系 。
4 4南 京 农 业 大 学 学 报 1期
讨 论
B 一9 8的寄主范围十分广 泛 , 可侵 染 7 科 20 种不 同的植物 , 在芜色蔡 、 青菜 、 芥菜上产
生典型的由 T u M V 引起的症状 , 还可以侵染千 日红 、 菠菜 、 番杏和心叶 烟等 , 这些均 与文献
报道的相同 ` ’ 。 ’ 。 从蚕豆上分离到的该病毒株的粒体长度较通常的长些 「` ’ , 但它 与 T u M V
的抗 血清能发生特异性很强的免疫反应 , 如琼脂上的双扩散反应 , 免疫 电镜试验和免疫修饰
电镜试验等 , 表明它与芜著花叶病毒有着十分密切的血清学关系 , 故 B一 98 被鉴定 为 T u M V
的一个分离物。 鉴于它 不 能 由蚜虫传播的特点 , 因此称之为芜著花叶病毒的非 蚜 传 株 系
( T
u
M V 一 N A T株 ) .
国内外关于 T u M V 的株系研究报道很多 。 吉井甫 (Y os hi i) 将 1 9 6 3 年 以 前 报 道 的59 个
T u M V分离物划分为两个株系 . B一98 与之比较 ,’ 在甘蓝 、 心叶烟及其它一些寄主上 的 反 应
均有一定差异 , 与花生和豌豆上的分离物比较 “ , “ ’ , 在寄主范围方面也有一定差 异 . 更 为
重要的是 B一 98 不能由蚜虫传播 , 这与文献报道的模式株差异更大些 。 G ar d n e r指 出 , 花 椰
菜花叶病毒的蚜传株系与非蚜传株系之间 , 在核酸的碱基排列 循 序 上 有 一 定 差 异 { ” 。
K as
s a in s 等则认为在蚜虫不传株系侵染的植株中不能产生蚜虫传毒所 必 需 的 辅 助 性 物
质 ” ’ , 而这种辅助性物质有两个专化性的作用位点, 一个作用于病毒 , 另一个作用于 蚜 虫
的 口针 。
关于 自然界存在的非蚜传株系的研究 , 目前还不能作出满意的结论来解释其产 生 的 原
因 . 究竟是丧失了某种性能 , 还是植物中缺少某种物质 , 这是一个十分重要的问题 . 无论是
在理论方面 , 还是在病毒病的防治实践方面 , 均有待进一步研究。
参 考 文 献
〔 1 〕 许志刚等 , 1 9 8 5 , 侵染蚕豆的芜普花叶病毒和大豆花叶病毒的鉴定 。 南京农业大学学 报 ,
( 1 )
:
9 6
.
( 2 〕 朱培坤 , 1 9 8 1 , 芜蔷花叶病毒抗血清制备及其应用 . 上海农业科技 , ( 1 ) : 8 。
( 3 ) 周益军 、 埃祖芹 , 1 986 , 非蚜虫传播的黄瓜花叶病毒菜豆株系的鉴定 。 江 苏农学 报 (待发表 ) 。
〔4 〕 E v a n s , I . R . a n d W . Z 。 t t e r , 1 9 7 0 , A p h i d a n d m e e h a n i e a l t r a n s m i s s i o n p r o p e r t i e s
0 f b e a n y e l l o w m o s a i e v i r u s i s o l a t e s
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P h y t o P a t h
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6 0 : 1 1 7 0
.
〔5 〕 G a r d n e r , R . C . e t 寻1 . , 2 9 5 1 , T h e e o m p l e t e n u e l e o t i d e s e q u n e e o f a n i n f e e t i o u s
e l o n e o f e a u l i f l o w e r m o s a i e v i r u s b y M l 3 m p 7 s h o t g
u n s e q u e n e i n g
.
N u e l
.
A e
.
R e s
. ,
9 ( 1 2 )
,
2 2 7 2一 2 2 5 7 .
〔 6 〕 I n o u y e , T . a n d N . I n o u y e , 1 9 6 4 , A v i r u s d i s e a s e o f p 。 a n u t e a u s e d b y a s t r a i n o f
t u r n i P m o s a i e v i r u s
.
N o g a k u K e n k y u
,
5 0
:
5 1一 6 0 .
自
〔 7 〕 K a 5 s a n i s , B . K . a n d D . A . G o v i e r , 1 9 7 1 , T h e r o l e o f h e l p e r v i r u s S i n
t r a n s m i s s i o n o f p o t a t o a u e u b a m o s a i e v i r u s e s a n d p o t a t o v i r u s C
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m a l f o r m a t i o n s p r o d u e e d
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m o s a i e o n B r a s s艺c a c h i ” e n s i s . T h e t h e m e l i n a e t i v a t i o n p o i n t w a s 5 5 一 6 0℃ ,
t h e d i l u t i o n e n d p o i n t w a s 1 0
一 3一 1 0 一 4 , a n d t h e l o n g i v i t y P e r i o d i n v i t r o
w a s 1 1 d a y s a t s℃ .
1 t w a s 介 o t t r a n s m i s s i b l e b y a p h i d s i n n o n p e r s i s t e n t m a n n e r , n o r
s e m i二 p e r s i s t e n t m a n n e r
.
I t w a s n o t s e e d 一 t r a n s m i t t e d i n V i c i a f a 乙a L .
V i r u s p a r t i e l e s w e r e f l u e x i o u s r o d s w i t h 7 2 6 n m i n l e n g t h
.
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