全 文 :收稿日期: 2010-06-11
基金项目:福建省教育厅科技资助项目(JK2009031)
作者简介:陈建琴(1978-),女,福建莆田人,讲师,硕士。
枇杷花(flowers of the Eriobotrya japonica)
味淡、性温和,能疏风止咳,通鼻窍,主治感冒咳
嗽,鼻流清涕,虚劳久咳,痰中带血。 民间常用于治
疗小儿肺热咳嗽,和老年人久咳不愈患者[1]。 临床
则常用于治疗急、慢性呼吸道疾病[2]。近年来发现,
枇杷花中含有活性的三萜酸类物质,如熊果酸、齐
墩果酸等物质。 这些物质在食品和化妆品加工中
可以作为添加剂 [3],还具有降血糖、止咳、抗菌、抗
炎、抗肝炎、抗氧化等显著的免疫作用和抗癌等多
种药理活性作用[4-5],将来有希望成为低毒、有效的
抗癌和抗艾滋病毒的新型药物。 本文将对枇杷花
中三萜类化合物的提取工艺进行研究。
1 实验部分
1.1 实验仪器与试剂
仪器:UV-2550紫外可见分光光度计,MODEL
第 17 卷 第 5 期 莆 田 学 院 学 报 Vol.17 No.5
2010 年 10 月 Journal of Put ian University Oct. 2010
文章编号:1672-4143(2010)05-0025-03 中图分类号:R284.2;O657.32 文献标识码:A
枇杷花中三萜类化合物的提取工艺研究
陈建琴
(莆田学院 环境与生命科学系,福建 莆田 351100)
摘 要:采用索氏提取和超声波提取对枇杷花中的三萜类化合物的提取工艺进行研究。应用紫外可见分光光
度法对枇杷花样品的测定波长、显色剂用量、显色时间和显色温度等进行选择,确定最佳的提取工艺条件为:测
定波长 504nm,显色时间 10—90min,显色剂用量 0.60—1.00mL,5%香草醛 -冰醋酸溶液用量 0.70mL,显色温
度 30—80℃。结果表明,采用索氏提取对枇杷花中的三萜类化合物的提取更彻底,晚钟枇杷花中三萜类化合物
含量比早钟要高。
关键词:枇杷花;三萜类化合物;紫外可见分光光度法;提取工艺
The Study of Extracted Technology of
Triterpenoids in the Loquat Flowers
CHEN Jian-qin
( Environment & Life Sciences Department, Putian University, Putian Fujian 351100, China )
Abstract: The article studies the extracted technology of triterpenoids in loquat flowers by using Soxhlet
extractor and Ulteasonic extraction. UV spectrophotometer is used to select the wavelength, coloration time,
developer dosage, perchloric dosage and water bath temperature for the standard sample and determine the
best condition for extracted technology. The best extracted technology : the measured wavelength is 504nm, the
coloration time is 10—90 min, the developer dosage is 0.60—1.00 mL, 5 % of Vanilla aldehyde-ice acetum
dosage is 0.70 mL, the water bath temperature is 30—80℃ . The result shows that triterpenoids in loquat
flowers is extracted more completely by using Soxhlet extractor and the contents of triterpenoids in Wan
Zhong loquat flowers is higher than Zao Zhong loquat flowers.
Key words:loquat flowers;triterpenoids;UV spectrophotometer;extracted technology
莆 田 学 院 学 报 2010 年 10 月
HH1006超声波清洗器 ,RE52CS-2 旋转蒸发仪 ,
DHG-9246电热恒鼓风干燥箱,BS224S电子天平,
HH-1 恒温水浴锅;药品与试剂:熊果酸对照品(中
国药品生物制品检定所,批号 110709 -200304),无
水乙醇、冰醋酸、香草醛、高氯酸、乙酸乙酯均为分
析纯。
1.2 实验材料
枇杷花早钟、 晚钟两种样品, 产于中国福建
省,实验部位是花瓣,保存于密封罐,避光,防潮。
1.3 样品溶液的制备
1.3.1 超声波提取
取早钟和晚钟两种枇杷花样品烘干至恒重后
碎成粉末,经过 60目过筛备用。各准确称取 5.000
g,分别置于锥形瓶中,加 80.00mL 浓度为 95%的
乙醇,置于超声器提取 2.5 h,趁热抽滤;滤渣再次
加入相应浓度和体积的乙醇,置超声器中提取;超
声提取 3 次,合并 3 次滤液。 样品浓缩后,加无水
乙醇(约 15.00mL)超声溶解,过滤,加无水乙醇至
100.00mL容量瓶定容,摇匀,供试液备用。
1.3.2 索氏提取
分别准确称取两种样品粉未各 5.000g, 置于
索氏提取器内,加入 80.00mL无水乙醇,并加入几
颗沸石,按索氏提取方法提取,一直进行到虹吸管
里的溶剂颜色呈无色时,大约耗时 8h,停止加热。
待提取液冷却后,过滤,转移至 100.00mL 容量瓶
定容,作为试液备用。
1.4 对照品溶液的制备
准确称取熊果酸对照品 0.0250g,加入无水乙
醇 25.00mL, 即得到 1.00mg/mL的熊果酸对照品
标准溶液,放在-4℃的冰箱中低温保存,备用。
2 结果与讨论
2.1 条件的选择
2.1.1 测量波长的选择
准确吸取 1.00 mg/mL 的熊果酸对照品 2.40
mL,置于具塞试管中加热挥去溶剂。 冷却后,加入
0.60mL的 5%香草醛 -冰醋酸和 1.40mL高氯酸,
放入 60℃的恒温水浴锅中加热 10—15min。 取出
冷却,转移至 10.00mL的比色管中,加入乙酸乙酯
定容至刻度,振荡摇匀,并及时放出气泡。
本实验采用紫外可见分光光度计在 190—700
nm 的范围对熊果酸对照品溶液进行波长扫描,以
乙酸乙酯空白溶液作为参比溶液,实验结果(如图
1)表明,在波长 504 和 632nm 处出现了两个吸收
峰。 为了提高测定结果的灵敏度,应选择有最大的
吸光度的吸收峰值,即波长为 504nm。
图 1 熊果酸对照品的吸收曲线
2.1.2 显色时间的选择
准确吸取枇杷花的样品溶液 100μL,按 2.1.1
的方法测定其吸光度,实验结果如图 2,在 10—90
min 范围内,曲线呈现平直,吸光度没有发生太大
的波动,说明显色反应较快,在 10min 之前就反应
完成了。 在 10—90min 之间,显色稳定,实验应选
在此范围内进行。 90min 之后,曲线明显下滑,吸
光度下降,说明溶液在空气中被氧化了。
图 2 显色时间与吸光度的关系曲线
2.1.3 香草醛 -冰醋酸用量的选择
准确吸取 9 份 100μL 枇杷花的样品溶液,置
于具塞试管中加热挥去溶剂。 冷却后, 分别加入
0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、1.00 mL
的 5%香草醛 - 冰醋酸, 按 2.1.1 的方法测定其吸
光度。实验结果如图 3,5%香草醛 -冰醋酸溶液用
量在 0—0.60mL范围内时,吸光度呈上升均势,显
色剂用量不足,灵敏度不高;在 0.60—1.00mL 范
围内,曲线平直,吸光度出现稳定值,且灵敏度也
吸
光
度
A
显色时间 /min
波长 /nm
吸
光
度
A
1 . 0
0 . 8
0 . 6
0 . 4
0 . 2
0
400 500 600 700
26
第 5期 陈建琴:枇杷花中三萜类化合物的提取工艺研究
较高。 因此,可在 0.60—1.00mL间选择显色剂用
量, 故选择 5%香草醛 - 冰醋酸溶液用量为 0.70
mL,比较稳定。
图 3 香草醛 -冰醋酸用量对显色体系的影响
2.1.4 高氯酸用量的选择
准确吸取 11份 100μL枇杷花的样品溶液,置
于具塞试管中加热挥去溶剂。 冷却后, 分别加入
0.70 mL 的 5 %香草醛 - 冰醋酸以及 1.00、1.20、
1.40、1.60、1.80、2.00、2.20、2.40、2.60、2.80、3.00 mL
的高氯酸,按 2.1.1 项下测定其吸光度。 实验结果
如图 4,高氯酸用量在 2.40mL时,吸光度最大,继
续增加高氯酸用量,吸光度有所下降,故选择高氯
酸用量为 2.40mL。
图 4 高氯酸用量对显色体系的影响
2.1.5 加热温度的选择
准确吸取 8 份 100μL 枇杷花的样品溶液,置
于具塞试管中加热挥去溶剂。冷却后,各加入 0.70
mL 的 5%香草醛 - 冰醋酸以及 2.40mL 高氯酸,
分别放入 30、40、50、60、70、80、90、100℃的恒温
水浴锅中加热 15min。 按 2.1.1的方法测定其吸光
度。 结果表明,温度在 30 到 80℃ 范围内,随温度
升高吸光度增加,但水浴温度超过 80℃ 时, 吸光
度开始降低,因此选择水浴温度为 80℃。
2.2 标准曲线的绘制
按 2.1 中的“条件的选择”做出的最佳实验条
件进行实验:准确吸取熊果酸对照品 30.00、50.00、
70.00、90.00、110.00、130.00、150.00μL, 在最优的
实验条件,按 2.1.1的方法测定其吸光度。
实验表明, 熊果酸溶液在 3.00—15.00μg/mL
的范围内呈现出良好的线性关系,回归方程为:y=
0.0423x+0.195,相关系数 R2=0.9994。
2.3 方法的相对标准偏差的测定
取枇杷花早钟样品, 精密称取 5 份, 每份
5.000g,按样品提取法提取,把 5 份样品溶液全部
转移到 5个 100.00mL的容量瓶中定容,分别准确
吸取 5 份枇杷花样品溶液各 100μL, 在最优的实
验条件下,按 2.1.1 的方法测定其吸光度。 实验表
明,测得枇杷花中三萜类化合物含量的 RSD=1.5%
(n=5),表明了采用该方法具有良好的精密度。
2.4 加标回收率的测定
取已准确测定三萜类化合物含量为 17.2mg/g
的枇杷花早钟样品,精密称取 5 份,每份 2.500 g,
按样品提取法提取,把 5份样品溶液全部转移到 5
个 100.00mL的容量瓶中,分别准确吸取 5 份枇杷
花提取稀释液各 100μL,置于具塞试管中,然后各
加入 1.00mg/mL熊果酸对照品 40.00μL, 在最优
的实验条件下,按 2.1.1 的方法测定其吸光度。 测
量结果见表 1。
表 1 加标回收率测定
2.5 枇杷花中三萜类化合物的含量测定
按 1.3样品溶液的制备方法制得样品溶液,按
样品测定法测定, 按上述最佳条件测定枇杷花中
的三萜类化合物的含量,测量结果见表 2。
3 结论
由实验可知, 索氏提取所得三萜类化合物含
量比超声波提取所得含量略高。 枇杷花晚钟样品
(下转第 36页)
编号
样品中
三萜类
含量 /μg
熊果酸
加入量 /
μg
测得含
量 /μg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 43.00 40.00 83.9 102.0
100.6 1.1
2 43.00 40.00 82.3 98.3
3 43.00 40.00 82.5 98.8
4 43.00 40.00 83.5 101.0
5 43.00 40.00 84.3 103.0
吸
光
度
A
香草醛 -冰醋酸用量 /mL
吸
光
度
A
高氯酸用量 /mL
27
莆 田 学 院 学 报 2010 年 10 月
参考文献:
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[责任编辑 林 锋 ]
敏
心
-------------------
比早钟样品三萜类化合物含量略高。 结果表明,
熊果酸溶液在 3.00—15.00μg/mL范围内呈现出良
好的线性关系,回归方程为:y =0.0423x + 0.195,
相关系数 R2=0.9994,平均回收率为 100.6%,RSD
=1.1%。 该提取工艺简便、快速、准确,可用于实际
样品的测量。
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[责任编辑 林 锋 ]
测定
次数
样品
量 /g
索氏提取 超声波提取
晚钟
含量 /
(mg·g-1)
早钟
含量 /
(mg·g-1)
晚钟
含量 /
(mg·g-1)
早钟
含量 /
(mg·g-1)
1 5.000 23.5 21.8 22.3 16.8
2 5.000 24.5 21.1 21.2 17.3
3 5.000 24.1 21.3 22.1 16.7
4 5.000 23.8 20.9 21.6 17.1
5 5.000 24.6 21.6 22.3 17.4
平均含量 24.1 21.3 21.9 17.1
RSD/% 1.3 1.5 1.0 1.7
(上接第 27页)
表 2 索氏提取和超声波提取枇杷花晚钟和
早钟样品中三萜类化合物的含量
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