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金银木不同部位绿原酸的含量测定



全 文 :2016年第 29卷第 3期
中国科技 核心期刊
方 药·质量分析
金银木[Lonicer maakii (Rupr.)Maxim.],别
名金银忍冬、木忍冬、鸡骨头,是忍冬科忍冬属的
落叶灌木,分布于全国各地,生于林缘、沟谷地带、
山坡阴湿处或杂木林中。金银木全株可入药,具有
祛风解毒、消肿止痛的作用。金银忍冬含有绿原
酸,绿原酸(chlorogenic acid)是植物体在有氧
呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化
合物,为众多药材(如金银花、茵陈、杜仲)中的主
要有效成分,现代药理研究表明,其除有抗菌抗病
毒作用外,还有抗艾滋病毒、抗过敏、抗肿瘤等功
能,具有保肝利胆、止血、抗氧化、抗生育等作用,
由于其所具有的药理和药效作用而日益引起人们
的重视[1]。为此,本实验对金银木茎、叶、花及花蕾
中绿原酸进行提取及含量分析,并比较不同时期
茎叶中绿原酸的含量变化,旨在为金银木的开发
和综合利用提供理论依据。
1 材料
1.1 药材金银木茎、叶、花蕾和全开花,采于山
东中医药大学长清校区校园内,经鉴定为金银木
的茎、叶、花蕾及花,经阴干、低温烘干处理为干
品,粉碎。
1.2 仪器电子分析天平[AL204 型,梅特勒 -
托利多仪器(上海)有限公司];XD-6型热风循环
烘箱(WMZK-02型,上海医用仪表厂);四两装高速
万能粉碎机(武义县屹立工具有限公司);KQ-250E
型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);紫
外分光光度计(UV1100,上海天美科学仪器有限公
司);电子天平(上海精密科学仪器有限公司,天平
仪器厂制造)。
1.3 试剂绿原酸标准品,购自天津一方科技有
金银木不同部位绿原酸的含量测定
朱成姣 1,陈 飞 1,姚梅悦 1,周祉延 2,周长征 1△
1 山东中医药大学药学院,山东 济南 250355;2 吉林大学口腔医学院
[摘 要]目的:提取并测定金银木茎、叶、花及花蕾中绿原酸的含量,比较不同时期茎、叶、花及花蕾中绿
原酸含量的变化。方法:以金银木为材料,采用超声波提取法提取金银木茎、叶、花及花蕾中的绿原酸,用紫外
分光光度法测定提取物中绿原酸含量。结果:金银木幼叶中绿原酸含量为3.366%,茎1(与幼叶同时期)中为
1.016%,花蕾中为6.175%,全开花中为7.471%,茎2(与花蕾同时期)中为2.416%,叶2(与花蕾同时期)中
为10.735%。结论:茎、叶不同生长期中的绿原酸含量不同,并且随着生长呈现增加的趋势,故金银木的茎、
叶、花及花蕾均具有较高的开发利用价值。
[关键词]金银木;超声提取法;绿原酸;紫外分光光度法
[中图分类号]R284.1[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2016)03-0035-03
Content Determination of Chlorogenic Acid Contained
in Different Parts of Amur Honeysuckle
ZHU Chengjiao1, CHEN Fei1, YAO Meiyue1, ZHOU Zhiyan2, ZHOU Changzheng1△
1 Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China;
2 College of Oral Medicine of Jilin University
Abstract Objective: To compare the contents of chlorogenic acid in the stems, leaves, flowers and buds in
different periods by extracting and determining chlorogenic acid contained in amur honeysuckle [Lonicera maackii
(Rupr.) Maxim.]. Methods: By taking amur honeysuckle as the material, chlorogenic acid in the stems, leaves,
flowers and buds of amur honeysuckle could be extracted by ultrasound extraction method, and the contents of
chlorogenic acid were determined by ultraviolet spectrophotometry. Results: The contents of chlorogenic acid in the
young leaves held 3.366%, it was 1.016% in the stem No. one (in the same period of young leaves), 6.175% in the
buds, 7.471% in the whole flowers, 2.416% in the stem No. two (in the same period of the buds), and 10.735% in the
leaves No. two(in the same period of the buds). Conclusion: The contents of chlorogenic acid in the stems and leaves
in different periods are different, they increased as they grew up, therefore, the stems, leaves, flowers and buds of
amur honeysuckle possess a high value of development and utilization.
Keywords amur honeysuckle; ultrasound extraction; chlorogenic acid; ultraviolet spectrophotometry
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Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2016 Vol.29 No.3
中国科技 核心期刊
限公司;甲醇(分析纯),购自天津市广成化学试剂
有限公司;蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 标准品溶液的制备准确称取5.0mg绿原
酸标准品,用浓度50%的甲醇溶液在超声条件下
使其完全溶解[2],并定容至 25 mL,得到浓度为
0.200mg/mL的标准品溶液。
2.2 标准曲线的制备分别取 0.5、1.0、1.5、
2.0和2.5mL标准品溶液置于25mL棕色容量瓶
中,用50%甲醇溶液定容至刻度,在吸收波长为327nm
的紫外分光光度计中测定标准品溶液的吸光度,
以浓度为横坐标 x,吸光度为纵坐标 y,作绿原酸
标准曲线,见表1。
表1 标准曲线数据
所取毫升数/mL 浓度/(mg·mL-1) 吸光度
0.5 0.004 0.201
1.0 0.008 0.438
1.5 0.012 0.688
2.0 0.016 0.958
2.5 0.020 1.234
2.3 精密度实验取同一浓度的标准品溶液,在
紫外分光光度计中测定其吸光度,平行测定5次,
考察吸光度的变化情况,相对标准偏差 RSD 为
0.144%,精密度良好。
2.4 供试品溶液制备金银木幼叶中绿原酸提
取。从山东中医药大学长清校区摘取一定数量的
金银木幼叶,经烘干后粉粹,取粉末0.5g,精密称
定,置具塞锥形瓶中,加 50%甲醇 50 mL,称定质
量,50℃下超声处理30分钟,放冷,再称定质量,
用50%甲醇补足质量,摇匀,滤过[3],滤液另存于
250mL具塞容量瓶中,滤渣加50%甲醇 50 mL,称
定质量,超声处理30分钟,放冷,再称定质量,用
50%甲醇补足质量,摇匀,滤过,合并滤液,精密量
取1.25mL置于25mL棕色容量瓶中,用浓度50%
的甲醇溶液定容,放于冰箱内待用,平行制备3次。
金银木茎1(与幼叶同时期)、茎2(与花蕾同
时期)、叶2(与花蕾同时期)、全开花及花蕾中绿
原酸提取操作同“2.4.1”项,最后茎取 5 mL 定容
至25mL,全开花及花蕾取2mL定容至25mL。
2.5 绿原酸含量测定根据文献[3]选定吸收波
长为327nm,以50%甲醇溶液为空白对照,在紫外
分光光度计中测定各供试品溶液的吸光度,平行
进样3次,然后根据标准曲线计算绿原酸的含量。
取3份金银木茎1(与幼叶同时期)的粉末各0.5g,
精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50mL,称
定质量,于50℃下分别超声提取1、2、3次,放冷,
再称定质量,用50%甲醇补足质量,摇匀,滤过,分
别精密量取3种滤液各5mL,置25mL棕色容量
瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得,于327nm波
长处分别测定其吸光度。幼叶、全开花及花蕾分别
超声提取1、2、3次,操作如茎1(与幼叶同时期),
最后幼叶精密量取3种滤液各1.25mL,置25mL
棕色容量瓶中,全开花及花蕾精密量取3种滤液
各2mL,均用50%甲醇定容至刻度,摇匀,即得,于
327nm波长处分别测定其吸光度,见表2—4。
表2 各供试品溶液绿原酸含量测定
样品 1 2 3 平均含量 RSD/%
幼叶 3.383 3.354 3.361 3.366 0.37
茎1 1.0329 0.9968 1.0183 1.016 1.46
花蕾 6.208 6.070 6.247 6.175 1.23
全开花 7.578 7.381 7.453 7.471 1.08
茎2 2.472 2.413 2.360 2.416 1.82
叶2 10.789 10.604 10.811 10.735 0.86
表3 茎1(与幼叶同时期)不同提取次数绿原酸含量测定
提取次数/次 样品吸光度 绿原酸含量/%
1次 0.984 0.7677
2次 0.646 1.0329
3次 0.391 0.99547
表4 幼叶、全开花及花蕾不同提取次数绿原酸含量测定
提取次数/次 吸光度 绿原酸含量/%
1次 0.821 2.486
幼叶 2次 0.516 3.383
3次 0.298 3.297
1次 1.461 6.965
全开花 2次 0.780 7.578
3次 0.477 7.537
1次 1.211 5.830
花蕾 2次 0.597 6.208
3次 0.399 6.374
2.6 线性关系考察计算绘制出标准曲线为:
Y=64.65X-0.072,相关度R2=0.999(n=5),表明绿
原酸在4.0~20.0μg/mL浓度范围内线性关系良
好,见图1。
图1 绿原酸标准曲线
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中国科技 核心期刊
2.7 最佳提取次数的确定由表4—5可知,茎
1(与幼叶同时期)提取1次所得含量比提取2次
所得含量在数值上少0.2652,而提取2次比提取
3次少0.0374,可以认为提取2次就可将材料中
的绿原酸提取完全,并且可以节省能源。
3 讨论
3.1 超声提取法金银木中绿原酸的提取方法
主要有以下几种:浸渍法、渗漉法、热回流法、超声
波法、微波法和酶法[4],理论分析认为在绿原酸的
化学结构中含有不稳定的基团,因此不可采取热
提,另外从省时、操作简单易行,提取效率高方面
考虑,本实验采用了超声提取法[5-8]。
3.2 紫外分光光度检测法紫外分光光度法测
定绿原酸含量,方法简便易行,但准确度不高。因
为金银木中主要有效成分为绿原酸、异绿原酸,紫
外吸收图谱最大吸收波长均为(327±1)nm。因此紫
外分光度法所测数据为绿原酸、异绿原酸的总含
量。高效液相法可将两者分开,并能分别进行测
定[2]。
3.3 不同部位绿原酸含量本研究结果表明:金
银木各部位中都有一定的绿原酸,但含量高低不同,
同时期的含量依次为叶>花>花蕾>茎,且花、花
蕾及叶中的绿原酸含量较高,由此可推断金银木
的花和叶是一种可开发的新的药用植物资源。
目前金银木多为城市的绿化树种,其花和叶
目前都被废弃,我国金银木资源十分丰富。通过本
实验可为金银木的花和叶的药用开发提供理论依
据,使之得到合理应用。
参考文献
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优化[J].时珍国医国药,2008,19(12):2857-2858.
收稿日期:2015-02-17
作者简介:朱成姣(1990—),女,在读硕士研究生。研究方向:
药物新剂型与制药新技术。
△通讯作者:周长征(1966—),男,硕士学位,教授。研究方
向:药物新剂型与制药新技术。
方 药·质量分析
不同生长月份女贞子中特女贞苷含量的动态差异
田志祥,王 伟△,刘 艺,韩春超
山东中医药大学药学院,山东 济南 250300
[摘 要]目的:探讨不同月份女贞子中特女贞苷的含量差异。方法:采收10~12月份的女贞子,阴干后,
分别称取20g女贞子,先经石油醚脱脂2次,0.5h/次,然后以80%乙醇提取2次,3h/次,合并提取液并浓
缩,将浓缩后的提取液经D-101大孔树脂柱纯化,分离得到目标成分,进行含量测定。结果:11月份女贞子中
特女贞苷含量达到最高。
[关键词]女贞子;特女贞苷;含量差异
[中图分类号]R284.1[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2016)03-0037-04
Dynamic Differences of the Contents of Specnuezhenide in NvZhenZi
in Different Growth Months
TIAN Zhixiang, WANG Wei△, LIU Yi, HAN Chunchao
Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250300, China
Abstract Objective: To study the contents of specnuezhenide in NvZhenZi (Fructus Ligustri Lucidi) in differ-
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