全 文 ：河北职业技术师范学院学报　第 17卷第 1期 , 2003年 3月
Journa l o f Hebei Voca tion-Technical Teach ers Colleg e Vol. 17　 No. 1　 March 2003
金银木叶中黄酮类化合物的定性分析
李春华 , 楮丽敏* , 李　瑾*
(河北科技师范学院 食品工程系 ,河北 昌黎 , 066600)
摘要: 研究了浸提温度、时间、乙醇浓度、料液比等因素对金银木叶中黄酮类化合物提取效果的影响 ,确定了
最佳单因素水平。 正交实验确定了以乙醇为浸提剂的最佳提取工艺条件为:体积分数为 0. 60的乙醇 ,料液比
1∶ 30, 70℃ ,浸提 4 h。金银木叶中富含黄酮类化合物 ,颜色反应试验和紫外光谱分析初步表明 ,其主要成分为
黄酮类和黄酮醇类。
关键词: 金银木叶 ; 黄酮类化合物 ; 定性分析
中图分类号: TQ253. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1008-9519( 2003) 01-0023-04
金银木 (Lonicera maackii Maxim )是忍冬科金银木属的落叶灌木 [ 1] ,在我国种植十分广泛 ,金银木
全株可入药 ,具有祛风解毒、消肿止痛的作用 [ 2] ,经初步分析 ,金银木叶中含有大量黄酮类化合物 ,黄酮
类化合物具有很高的生物活性和生理活性 ,是药用植物中主要活性成分之一 [ 3] , 20世纪 80年代以来 ,
黄酮类化合物日益引起人们的重视 ,目前 ,有关金银木叶中的黄酮类化合物的研究尚未见报道。为此 ,笔
者对金银木叶中黄酮类化合物的提取及定性分析研究做一报道 ,旨在为金银木的开发和综合利用提供
科学依据。
1　材料与方法
1. 1　材料
金银木叶于 2002年 4月采自于河北科技师范学院西校区院内 20余年生金银木树上 ,洗净自然阴
干后于 45℃烘干 ,粉碎后过 50目筛密封备用。 主要试剂为:硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、氯化铝、氯化
铁、乙酸镁、硼酸、氨水、盐酸、锌粉、芦丁、乙醇、甲醇等均为分析纯。主要仪器与设备为: UV -2201型紫
外 可见分光光度计 , 723分光光度计 ,真空干燥箱 , DK-8D型电热恒温水槽 ,分析天平。
1. 2　方法
1. 2. 1　芦丁标准曲线绘制 [4, 5 ]　准确称取 120℃干燥恒重的芦丁 40 mg ,用微热的体积分数为 0. 60乙
醇溶解 ,冷却后定容到 100 mL容量瓶中 ,摇匀 ,配成质量浓度为 0. 4 g /L的芦丁标准液。分别吸取标准
液 0, 1, 2, 3, 4, 5 mL于 10 mL容量瓶中 ,分别加入体积分数为 0. 30的乙醇至 5 mL,加入质量浓度为 50
g /L的 NaNO2 0. 3 mL,摇匀 ,放置 5 min,加入 0. 3 mL质量浓度为 1 000 g /L的 Al( NO3 ) 3 ,摇匀 ; 6
min后再加入 2 mL 1 mol /L NaOH溶液 ,用体积分数为 0. 30的乙醇定容 ,摇匀 ,静置 10 min于波长
510 nm处测定吸光度 ,以试剂空白参比 ,以吸光度为横坐标 ,芦丁含量为纵坐标做标准曲线 ,求得标准
曲线方程为: Y= 0. 080 3 A+ 0. 000 1, r= 0. 999 658。 Y——芦丁质量浓度 ( g /L ) ; A——溶液的吸光度。
1. 2. 2　金银木叶中黄酮类化合物的提取　精确称取一定量的金银木叶粉 ,按一定的料液比加入浸提溶
剂乙醇 ,在一定的温度条件下浸提一定时间 ,趁热过滤 ,冷却至室温后定容至原浸提液体积。
1. 2. 3　金银木叶中黄酮类化合物测定　从浸提液中准确吸取 2 mL,用与提取时同浓度的乙醇溶液稀
释至 25 mL。 取 1 mL稀释液置于 10 m L容量瓶中 ,然后按与标准曲线相同的方法测定浸提液的吸光
度 ,计算提取率。
提取率= Y×稀释倍数× VW
V—— 原浸提液体积 ( mL) ; Y——根据所测定溶液的吸光度 ,用曲线方程计算出的黄酮类物质的质量浓
* : 河北科技师范学院食品工程系 98级学生。
收稿日期: 2003-03-03; 修改稿收到日期: 2003-04-10
度 ( mg /mL) ;W——提取用金银木干叶的质量 ( mg )。
1. 2. 4　金银木叶中黄酮类化合物的定性试验 [6, 7 ]　取金银木叶浸提液 ,在真空干燥箱中减压浓缩至干 ,
再用甲醇溶解 ,以无水甲醇作对照 ,光程 1 cm ,用紫外分光光度计在 200～ 500 nm范围扫描 ,绘出紫外
吸收光谱图 ;向甲醇溶解液中分别加入金属离子、还原试剂、显色剂等进行颜色反应试验 ,在紫外光和可
见光下观察。
2　结果与分析
2. 1　乙醇浓度的选择
精确称取 7份 ( 1. 000 g )金银木干叶于具塞试管中 ,分别加入体积分数为 0, 0. 15, 0. 30, 0. 45, 0. 60,
0. 75, 0. 90的乙醇各 20 mL,在 60℃恒温水浴中浸提 3 h,趁热过滤 ,冷却后用同浓度乙醇定容至 20
m L,然后按照 1. 2. 3试验步骤对黄酮类化合物进行测定 (平行取样 3次 ,提取率取平均值 ,以下同 )。 结
果表明:体积分数为 0. 60的乙醇浸提效果最好 (图 1)。
2. 2　浸提温度的选择
精确称取 6份 ( 1. 000 g)金银木干叶于具塞试管中 ,加入体积分数为 0. 60的乙醇分别在 30, 40, 50,
60, 70, 80℃的水浴中浸提 3 h,趁热过滤 ,冷却后用体积分数为 0. 60的乙醇定容至 20 mL,然后对黄酮
类化合物进行测定。结果表明: 随着温度的升高 ,黄酮的提取率呈上升的趋势 ,但温度高于 60℃后提取
率上升幅度不大 ,且当温度达到 80℃时提取率有所下降 (图 2)。这可能是温度超过溶剂沸点温度时 ,乙
醇挥发 ,使溶剂浓度降低 ,致使浸提效果下降。 故从经济角度考虑确定最佳温度为 60℃。
图 1　乙醇的体积分数对黄酮提取率的影响 图 2　浸体温度对黄酮提取率的影响
2. 3　浸提时间的选择
精确称取 4份 ( 1. 000 g )金银木干叶于具塞试管中 ,分别加入体积分数为 0. 60的乙醇各 20 mL,在
60℃恒温水浴中分别浸提 2, 4, 6, 8 h ,趁热过滤 ,冷却后用体积分数为 0. 60的乙醇定容至 20 mL,然后
对黄酮类化合物进行测定。结果表明:随着时间的延长 ,黄酮的提取率不断上升 ,当浸提 4 h时已基本达
到平衡 (图 3)。 故初步确定 4 h为最佳浸提时间。
2. 4　料液比的选择
精确称取 5份 ( 1. 000 g )金银木干叶 ,分别加入体积分数为 0. 60的乙醇 10, 20, 30, 40, 50 mL,在
60℃水浴中浸提 4 h ,趁热过滤 ,冷却后用体积分数为 0. 60的乙醇定容至 10, 20, 30, 40, 50 mL,然后对
黄酮类化合物进行测定。结果表明: 随着溶剂量的增加 ,提取率逐渐升高 ,但升高的幅度逐渐变小 (图
4)。从浸提效果和经济两方面综合考虑 ,确定最佳料液比为 1∶ 20。
2. 5　正交试验
选择 L9 ( 34 )正交表 ,进行试验设计。以乙醇的体积分数、浸提温度、浸提时间和料液比为 4因素 ,做
3水平的正交试验。结果表明 , 4因素对浸提效果影响的主次顺序为:料液比> 浸提温度> 乙醇浓度> 浸
提时间 ,最优水平组合是 A2 B3 C3D2。按此最佳提取条件进行试验 ,测得黄酮提取率为 12. 18% ,大于正交
试验中最高提取率 ( 11. 58% )。
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图 3　浸提时间对黄酮提取率的影响 图 4　料液比对黄酮提取率的影响
表 1　正交提取试验结果
试验号 时间 A /h 料液比 B /( g· mL- 1 ) 温度 C /℃ 乙醇的体积分数 D 提取率 X /%
1 3 1∶ 10 50 0. 50 8. 71
2 3 1∶ 20 60 0. 60 11. 20
3 3 1∶ 30 70 0. 70 11. 58
4 4 1∶ 10 60 0. 70 10. 64
5 4 1∶ 20 70 0. 50 11. 27
6 4 1∶ 30 50 0. 60 11. 16
7 5 1∶ 10 70 0. 60 10. 83
8 5 1∶ 20 50 0. 70 10. 51
9 5 1∶ 30 60 0. 50 11. 25
K 1 31. 49 30. 17 30. 38 31. 23
K 2 33. 06 32. 99 33. 09 33. 19
K 3 32. 59 33. 99 33. 67 32. 73
k1 10. 50 10. 06 10. 13 10. 41
k2 11. 02 11. 00 11. 03 11. 06
k3 10. 86 11. 33 11. 22 10. 91
R 0. 53 1. 27 1. 10 0. 65
2. 6　金银木叶中黄酮类化合物的定性分析
由紫外吸收光谱图 (图 5)可知 ,吸收光
谱图在 200～ 400 nm之间出现了 3个吸收
峰 ,波长分别为 227. 8, 285. 2, 331. 8 nm,具
有较典型黄酮类化合物的特征吸收峰。根据
颜色反应结果 (表 2)和紫外吸收光谱图 ,基
本上可以初步确定金银木叶黄酮主要为黄酮
类和黄酮醇类。
图 5　金银木叶提取物紫外吸收光谱图
3　结论与讨论
试验结果表明: 其最佳提取工艺条件为乙醇体积分数为 0. 60,料液比 1∶ 30, 70℃ ,浸提 4 h。金银木
叶中黄酮类化合物主要为黄酮类和黄酮醇类。
本次试验采用具塞试管提取方法 ,操作简单易行 ;采用回流提取方法 ,提取率效果可能会更好 ,有待
于进一步研究。
251期　　　　　　　　　　　　李春华等　金银木叶中黄酮类化合物的定性分析
表 2　金银木叶中黄酮类化合物定性试验的颜色反应结果
反应类型 加入试剂 现象 结论
络合反应 三氯化铝 呈黄绿色荧光 提取物中有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮
乙酸镁 呈橙黄色荧光 提取物中有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮
三氯化铁 墨绿色沉淀 提取物中有酚类化合物 (羟基取代 )
显色反应 硼酸 呈亮黄色荧光 提取物中有 5羟基黄酮、 2羟基查尔酮
氢氧化钠 溶液呈棕黄色 提取物中有黄酮、黄酮醇
氨水 呈黄绿色荧光 提取物中有黄酮、黄酮醇、查尔酮
还原反应 盐酸+ 锌粉 粉红色泡沫 提取物中有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇
致谢: 在试验过程中 ,李凤英、杨晓玲、杨越冬等老师给予了大力帮助 ,在此一并致谢。
参考文献:
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作者简介: 李春华 ( 1963-) ,女 ,实验师。
QUALIT ATIV E ANALYSIS O F FLAVONO IDS
IN THE LEAV ES O F LON ICERA MAACK I I M AXIM
LI Chun-hua, CHU Li-min
* , LI Jin
*
( Dept o f Food Engineering , HN US T, Changli Hebei , 066600, China )
Abstract: The best lev el o f each of the facto rs including ex t raction tempera ture, ex t raction time,
ethanol concentration and the ratio of weight o f the dry leaf pow der to vo lume of solv ent ( W /V ) w as
determined in ex t raction of f lav one f rom Lonicera maack ii Maxim. The optimal ex t racting techniques
found th rough o rthogonal experiment was tha t the dry leaf pow der w as soaked wi th 60% of ethano l at
1∶ 30 o f W /V fo r 4 hours at 70℃ . The main components of the f lav onoids w ere identified to be
f lav ones and f lav onols according to quali tativ e analy sis.
Key words: Lonicera maackii Maxim leaves; f lav onids; qualitativ e analy sis
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