全 文 : 收稿日期:2016-02-05
基金项目:厦门市科技计划项目(3502Z20133045、3502Z20131004、3502Z20151245)
作者简介:林国清,副教授,从事中医与中药学研究。E-mail: 120587200@qq.com
注:张亚楠为通讯作者。E-mail: ynzhang1215@sina.com.cn
枇杷花茶水提物的镇咳、抗炎与抗氧化作用研究
林国清 1,2,3,何恩铭 4,王雅英 1,2,3,杨伟琪 1,2,3,张亚楠 1,2,3
(1.厦门医学院,福建 厦门 361008;2.福建省道地药材生物工程重点实验室,福建 厦门 361008;3.厦门市道地药材生
物工程重点实验室,福建 厦门 361008;4.福建省亚热带植物研究所,福建省亚热带植物生理生化重点实验室,福建
厦门 361006)
摘 要:采用小鼠氨水致咳法研究枇杷花茶水提物镇咳效果,以二甲苯致小鼠耳肿胀法研究其抗炎效果,并从
枇杷花茶的还原能力及对超氧阴离子和羟自由基的清除作用分析枇杷花茶水提物的抗氧化效果。结果表明,枇
杷花茶的水提物高剂量组(3000 mg·kg-1)、低剂量组(700 mg·kg-1)均有镇咳抗炎效果,水提物的浓度越高,效果
越好。各浓度枇杷花茶水提物均表现出一定的还原能力,对于羟基自由基和超氧阴离子都有一定的清除效果。
其中,20 mg·mL-1水提物还原效果最好(吸光值 0.903),超过 0.2 mg·mL-1抗坏血酸(吸光值 0.814);10 mg·mL-1的
水提物对超氧阴离子的清除率为 47.32%;20 mg·mL-1 水提物对于羟基自由基的清除效果非常明显,清除率为
91.62%。枇杷花茶水提物镇咳、抗炎、抗氧化效果明显。
关键词:枇杷花茶;镇咳;抗炎;抗氧化
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2016.02.002
中图分类号:R962 文献标识码:A 文章编号:1009-7791(2016)02-0107-05
Study on Antitussive, Anti-inflammatory and Antioxidant Effects of
Aqueous Extracts of Loquat Flower Tea
LIN Guo-qing1,2,3, HE En-ming4, WANG Ya-ying1,2,3, YANG Wei-qi1,2,3, ZHANG Ya-nan1,2,3
(1.Xiamen Medical College, Xiamen 361008, Fujian China; 2.Fujian Provincial Key Laboratory of Genuine Regional Drug
Bio-Engineering, Xiamen 361008, Fujian China; 3.Xiamen Key Laboratory of Biotechnology of Chinese Traditional
Medicine, Xiamen 361008, Fujian China; 4.Fujian Key Laboratory of Subtropical Plant Physiology and Biochemistry, Fujian
Institute of Subtropical Botany, Xiamen 361006, Fujian China )
Abstract: The antitussive, anti-inflammatory and antioxidant function of loquat flower tea were
studied by the methods of cough of mice stimulated by ammonia, xylene-induced ear acute
inflammatory and scavenging capability of superoxide anion free radical and hydroxyl free radical,
total antioxidant capability. The results showed that both high dose group (3000 mg·kg-1) and low
dose group (700 mg·kg-1) of loquat flower tea had antitussive and anti-inflammatory effect, with high
doses more effective. All concentrations of water extract showed certain reduction capacities, and had
scavenging effects on hydroxyl free radical and superoxide anion. The water extract (20 mg·mL-1)
had the best effect (absorbance value 0.903), better than 0.2 mg·mL-1 VC (absorbance value 0.814).
The scavenging rate to superoxide anion of the 10 mg·mL -1 water extract was 47.32%, and the
scavenging effect on hydroxyl radical of 20 mg·mL-1 water extract was obvious, which was 91.62%.
The water extract of loquat tea had strong antitussive and anti-inflammatory, antioxidant effect.
Key words: loquat flower tea; antitussive function; anti-inflammatory function; antioxidant function
枇杷 Eriobotrya japonica 是蔷薇科枇杷属植物,具有较高的药用价值。枇杷花为圆锥花絮,表面覆
2016,45(2): 107~111.
Subtropical Plant Science
第 45 卷 ﹒108﹒
盖褐色绒毛[1],香味独特,具有和胃降气、止咳化痰等功效[2]。在枇杷栽培管理中,为提高其果实质量,
常在开花期采取疏花措施[3],摘除的花朵大部分作为废弃物被浪费,仅有少量用作保健茶和饮品的主
原料。目前,对于枇杷花的研究主要集中在有效成分的提取和鉴定上,对其功效性研究相对较少[4]。
研究表明,高剂量的枇杷花水提物具有较好的镇痰、止咳和抗炎作用,而高剂量的枇杷花醇提物也有
较好的祛痰和抗炎效果[5]。枇杷花的提取物对于格兰氏阴性菌有一定的抑制作用,对于格兰氏阳性菌、
真菌的抑制作用则相对较好[6]。周春华[7]对枇杷花提取物做了抗氧化功效研究,发现枇杷花表现出较强
的抗氧化能力。枇杷花在制成枇杷花茶的过程中,需经过清洗、去绒毛、烘干、炒制等过程,对于制
成后的枇杷花茶是否依然具有上述功效有待研究。本文选用市售枇杷花茶产品,研究其镇咳、抗炎、
抗氧化功能。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
枇杷花茶(厦门四向贸易有限公司提供),二甲苯(化学纯),复方气管炎片,咳必清,酚红、氨水、
三氯化铁、抗坏血酸(Vitamin C, VC)、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、Tris 盐酸、硫酸亚铁、三氯乙酸、30%
H2O2、铁氰化钾、水杨酸、邻苯三酚等试剂均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 样品制备
1.2.1.1 抗炎、镇咳功效实验药液制备 称取枇杷花茶粉末 6 g,加适量水浸泡 15 min 后,煎煮 20 min,
收集滤液Ⅰ;将溶液滤渣加适量水煎煮 20 min 后,收集滤液Ⅱ。合并滤液Ⅰ和Ⅱ,直火浓缩至 50 mL,
即为枇杷花茶水提物浓缩液 A(浓度 120 mg·mL-1),冷藏密闭备用,用时以蒸馏水稀释成所需浓度。
1.2.1.2 抗氧化功效实验药液制备 按 1.2.1.1 收集滤液Ⅰ和Ⅱ,合并滤液Ⅰ和Ⅱ,直火浓缩至 100 mL,
即为枇杷花茶水提物高剂量溶液 B(浓度 60 mg·mL-1),密闭冷藏备用,检测时蒸馏水稀释成浓度为 1、
5、10、15、20 mg·mL-1。
1.2.2 抗炎功效实验 小鼠 24 只雌雄各半,随机分为 4 组,每组 6 只,分别为空白对照组(生理盐水)、
枇杷花茶水煎液高剂量组(3000 mg·kg-1)与低剂量组(750 mg·kg-1)、消炎痛阳性对照组(25 mg·kg-1)。每组
设计 3 次平行,重复 3 次。每鼠按 25 mL·kg-1 药液或生理盐水灌胃,每天 1 次连续 3 d。末次给药 30 min
后,于小鼠右耳两面涂二甲苯 0.5 mL·kg-1致肿,左耳不涂为正常耳。1 h 后脱颈椎处死小鼠,用 9 mm
打孔器冲下左耳和右耳同一部位的圆形耳片,于分析天平上称重。右耳重量减去左耳重量为肿胀度,
作为比较抗炎作用的指标[8—10]。
肿胀度(g) =右耳重 - 左耳重
肿胀抑制率(%)=(对照组肿胀度 - 给药组肿胀度) / 对照组肿胀度 × 100%
1.2.3 镇咳功效研究 小鼠24只雌雄各半,随机分为4组,每组6只。枇杷花茶水煎液的高剂量组
(3000 mg·kg-1)与低剂量组(750 mg·kg-1)、咳必清阳性对照组(25 mg·kg-1)及生理盐水对照组,每组设计3
次平行,重复3次。每鼠按25 mL·kg-1药液或生理盐水灌胃,每天1次,连续3 d。末次给药后1 h,分别
将小鼠放入倒置的1 L烧杯中,内放入含有0.02 mL氨水的小棉球。观察小鼠咳嗽的动作(腹肌收缩,张
大嘴,有时可有咳嗽声),记录小鼠3 min内的咳嗽次数[9—12]。
1.2.4 抗氧化功效研究
1.2.4.1 还原能力检测 取1 mL不同浓度的样品溶液,加入0.2 mL 磷酸缓冲液(pH 6.6)和0.5 mL
K3[Fe( CN)6],并于50 ℃水浴20 min,取出后流水冷却,加入1 mL三氯乙酸,以3000 r·min-1 离心10 min,
取1.5 mL上清液,加0.2 mL FeCl3和3 mL蒸馏水摇匀,放置5 min,以蒸馏水作为对照调零,700 nm处
测定吸光值。预实验显示,VC浓度为0.2 mg·mL-1时吸光值与各浓度枇杷花茶水提物的最高吸光值接近,
故以此浓度VC作为阳性对照[12—15]。每组设计3次平行,重复3次。
1.2.4.2 羟基自由基清除能力 在试管中依次加入1 mL 9.0 mmol·L-1 FeSO4溶液、1 mL 9.0 mmol·L-1水杨
第 2 期 林国清,等:枇杷花茶水提物的镇咳、抗炎与抗氧化作用研究 ﹒109﹒
酸溶液和1 mL蒸馏水、1 mL 0.003% H2O2,在(37 ± 0.1) ℃恒温水中反应30 min后流水冷却,转入离心
管中2000 r·min-1 离心10 min,然后在510 nm波长下测其吸光值(A0)。预实验显示VC浓度为0.4 mg·mL-1
对羟基自由基的清除力与枇杷花茶水提物各浓度清除率的最高值接近,故用0.4 mg·mL-1 VC作对照品溶
液和1 mL不同浓度枇杷花茶水提物代替1 mL蒸馏水测吸光值A1;用1 mL蒸馏水代替1 mL水杨酸测吸光
值A2。每组设计3次平行,重复3次。计算公式如下[16—19]:
·OH清除率(%)= [A0-(A1-A2)] / A0 × 100%
1.2.4.3 超氧阴离子清除实验 在试管中加入2 mL Tris-HCl 缓冲液,25 ℃恒温水浴20 min,加入1 mL
蒸馏水,25 ℃水浴20 min,再加入0.1 mL邻苯三酚溶液,立即混匀于25 ℃水浴中反应4 min,立即加入
1.0 mL 1 mol·L-1 HCl终止反应,测定420 nm 吸光值A0。预实验显示0.4 mg·mL-1 VC对超氧阴离子自由基
的清除力与枇杷花茶水提物各浓度清除率的最高值接近,故用0.4 mg·mL-1 VC作对照品溶液和1 mL不同
浓度枇杷花茶水提物代替1 mL蒸馏水测吸光值A1,不加邻苯三酚溶液测吸光值A2。每组设计3次平行,
重复3次。计算清除率[20—22]:
O2
-·清除率(%)= [A0-(A1-A2)] / A0 × 100%
2 结果与分析
2.1 抗炎功效
实验表明,枇杷花茶水提物对于二甲苯引起的小鼠耳肿胀有一定的抑制作用,其中低剂量水提物
肿胀度抑制率为 3.52%,高剂量水提物肿胀度抑制率为 11.28%,两种剂量的抑制效果显著。阳性对照
组对小鼠耳肿胀的抑制率为 43.35%,抑制作用极显著(表 1)。
2.2 镇咳功效
由表 2 可见,枇杷花茶水提物对于氨水引起的小鼠咳嗽有一定的抑制作用,与阴性对照组相比,
低剂量给药组的咳嗽次数平均减少了 15.47 次,高剂量组平均减少 34.97 次,阳性对照组平均减少了
50.05 次,其对咳嗽的抑制率分别为 11.22%、25.37%、36.32%(表 2)。无论是枇杷花茶水提物的高剂量
组还是低剂量组,对于氨水引起的小鼠咳嗽都有极显著的抑制作用。
2.3 抗氧化功效
2.3.1 还原能力 如图1: A所示,700 nm波长下分别检测样品的吸光值,随着枇杷花茶水提物浓度的升
高,吸光值由0.14升至0.903,呈上升趋势,说明水提物还原能力逐渐增强。枇杷花茶水提物20 mg·mL-1
的还原能力明显高于0.2 mg·mL-1 VC。
2.3.2 羟基自由基(·OH)清除力 枇杷花茶水提物对羟基自由基有明显的清除效果,5 mg·mL-1枇杷花茶
水提物的羟基自由基清除率为37.43%,随着水提物浓度增大,其清除能力显著增大,20 mg·mL-1水提
表1 枇杷花茶水提物抗二甲苯致小鼠耳肿胀作用
Table 1 The effect of aqueous extracts of loquat flower tea on anti ear swelling in mice induced by xylene
组别 剂量/mg·kg-1 肿胀度/g 抑制率/%
空白 — 0.65 ± 0.17 —
低剂量组 750 0.62 ± 0.22* 3.52
高剂量组 3000 0.57 ± 0.29* 11.28
阳性对照组 25 0.43 ± 0.26** 43.35
注:*、**分别表示差异显著 (P<0.05)、极显著(P<0.01),表 2 同。
表2 枇杷花茶水提物的镇咳作用
Table 2 Antitussive effect of water extract of loquat flower tea
组别 剂量/mg·kg-1 咳嗽次数/次 抑制率/%
阴性对照组 — 137.80 ± 26.90 —
低剂量组 750 122.33 ± 9.27** 11.22
高剂量组 3000 102.83 ± 35.41** 25.37
阳性对照组 25 87.75 ± 35.86** 36.32
第 45 卷 ﹒110﹒
物清除率达到91.62%,略低于0.4 mg·mL-1抗坏血酸(VC)的99.71%(图1: B)。
2.3.3 超氧阴离子自由基(O2-·)清除力 如图 1: C 所示,枇杷花茶水提物清除超氧阴离子自由基的能力
并不随着水提物的浓度增高而升高,而是呈现出先增后减的变化趋势。其中,以浓度 10 mg·mL-1 的清
除效果最好,为 47.32%,显著高于枇杷花茶水提物其他浓度,接近 0.4 mg·mL-1 抗坏血酸的清除率。
图1 枇杷花水提物抗氧化能力测定
Fig. 1 The antioxidant capacity of different concentrations of the extract of loquat flower tea
A.还原能力测定;B.羟基自由基清除率;C.超氧阴离子自由基清除率
注:柱上方英文字母表示差异显著性(P<0.05)。
3 讨论
三萜类和黄酮类化合物是枇杷花的主要功效成分。三萜类化合物不仅具有抗氧化、保肝、降脂、
抗肿瘤等方面的作用[23],也具有很好的止咳平喘、祛痰抗炎效果[9,24]。枇杷花的三萜类化合物主要包括
齐墩果酸和熊果酸[25]。黄酮类化合物也普遍具有止咳、祛痰、抗炎、镇痛等功效[26—28]。本研究对枇杷
花茶水提物的抗炎、镇咳、抗氧化活性进行研究,结果表明,高剂量的枇杷花茶水提物对于由二甲苯
所引起的小鼠耳肿胀有一定的抑制作用,这与邓晶晶等[5]的报道相一致,说明枇杷花茶的水提物有一
定的抗炎效果。不同剂量的枇杷花茶水提物均能减少小鼠 3 min 内的咳嗽次数,浓度越高,镇咳作用
越强,这与孙苏逖等[29]对枇杷花镇咳效果的研究相一致。枇杷花水提物的还原能力以及对于羟基自由
基清除作用都随着枇杷花茶水提物浓度的升高而增强,而超氧阴离子自由基的清除作用则呈现先增大
后减弱的趋势,枇杷花茶水提取物 10 mg·mL-1 超氧阴离子自由基清除能力最强。
实验表明,枇杷花虽然经过清洗、烘焙、脱毛等诸多流程制成茶品,但仍具有较好的抗炎、镇咳
及抗氧化效果,可进一步开发成保健功能用茶。
参考文献:
[1] 兰志琼,邓晶晶,卢先明,唐声武,顾迎寒. 枇杷花的生药学研究[J]. 时珍国医国药, 2007,18(6): 1475.
[2] 全国中草药汇编编写组. 全国中草药汇编[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1996: 504.
[3] 黄福山,袁卫明,俞文生. 枇杷大棚栽培疏花疏果技术[J]. 江西园艺, 2003(6): 10.
[4] 闫永芳,孙钧,孟天真,叶兴乾. 枇杷花研究及开发进展[J]. 食品工业科技, 2011(12): 544—546.
[5] 邓晶晶,卢先明,蒋桂华,兰志琼,顾迎寒,李丹. 枇杷花镇咳祛痰和抗炎的药效学研究[J]. 时珍国医国药, 2006,17(12):
2469—2470.
[6] 何莲,张宏,李琪,杨必坤,张晓喻,严伟. 枇杷花系统溶剂提取物抑菌作用研究[J]. 食品科学, 2007,28(12): 109-111.
[7] 周春华. 枇杷花、果主要生物活性组分与抗氧化活性研究[D]. 杭州: 浙江大学博士学位论文, 2007.
[8] 李仪奎. 中药药理实验方法学[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1991: 423.
[9] 王立为,刘新民,余世春,肖培根,杨峻山. 枇杷叶抗炎和止咳作用研究[J]. 中草药, 2001,35 (2): 174—176.
[10] 黄林芳,万德光. 西南民间苦丁茶的抗炎作用研究[J]. 中国民族民间医药杂志, 2004,6(8): 180—182.
第 2 期 林国清,等:枇杷花茶水提物的镇咳、抗炎与抗氧化作用研究 ﹒111﹒
[11] 张勇慧,阮汉利,曾凡波,皮慧芳,赵薇,吴继洲. 湖北贝母镇咳、祛痰、平喘药效部位的筛选[J]. 中草药,2003,43(11):
1016—1068.
[12] 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学(第二版)[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1991: 228—229.
[13] 魏行,程明,冯睿,陈国政,杨芹芹,陈浩,吴谋成. 碱溶性菜籽多糖的提取条件优化及体外抗氧化活性研究[J].食品科学,
2007,28( 8): 195—198.
[14] 秦海燕,杨勇. 黄芩醇提物的体外抗氧化活性[J]. 中国新技术新产品, 2009,19: 14.
[15] 秦海燕,王永胜,索志荣. 川芎醇提物的体外抗氧化活性[J]. 西南科技大学学报, 2010,25(3): 19-21.
[16] Kosar M, Dorman D, Hiltunen R. Effect of an acid treatment on the phytochemical and anti-oxidant characteristics from
selected Lamiaceae species[J]. Food Chemistry, 2005,91: 525—533.
[17] 韩洁, Branford-White C J,朱利民,翁新楚. 紫草提取物抗氧化作用研究[J]. 精细化工, 2008,25(7): 636—638.
[18] 孙涛,金亚旭,陈万喜,张欣欣,陈卫祥,徐铸德. 水溶性 C60-β 丙氨酸衍生物清除超氧阴离子自由基 O2-·及对小鼠胸腺细
胞生长影响的研究[J]. 高等学校化学学报, 2002,23(8): 1598—1600.
[19] Gulcin I, Oktay M, Kırecci E, Kufrevioglu O I. Screening of antioxidant and anti-microbial activities of anise (Pimpinella
anisum L.) seed extracts[J]. Food Chemistry, 2003,83: 371—382.
[20] 关炳峰,谭军,周志娣. 金银花提取物的抗氧化作用与其绿原酸含量的相关性研究[J]. 食品工业科技, 2007,28(10):
127—129.
[21] 王标诗,王文青,麦洁明,江敏,金蓓,杜建中,李汴生. 火龙果果皮色素的提取及其抗氧化性的研究[J]. 食品工业科技,
2013(5): 234—238.
[22] Li X L, Zhou A G, Han Y. Anti-oxidation and anti-microorganism activities of purification po1ysaccharide from Lygodium
japonicum in vitro[J]. Carbohydrate Polymers, 2006,66(1): 34—42.
[23] 殷晓东,赵浩如. 熊果酸研究进展[J]. 中华实用中西医杂志, 2004,17(4): 3830—3832.
[24] 鞠建华,周亮,林耕,刘东,王立为,杨峻山. 枇杷叶中抗炎成分及其抗炎、镇咳活性研究[J]. 中国药学杂志, 2003,38(10):
752—757.
[25] 成丽,刘燕,陈凌亚,罗娟. 枇杷花三萜皂苷成分的研究[J]. 华西医科大学学报, 2001,32(2): 283—285.
[26] 林玉霖,林文津,林力强. 枇杷叶的研究现状与开发前景[J]. 中药材, 2006,29(10): 1111—1114.
[27] 郭宇,吴松吉,朴惠善. 枇杷叶的化学成分及药理活性研究进展[J]. 时珍国医国药, 2006,17(6): 928—930.
[28] 朱丹,袁芳,孟坤,宋雅娟. 黄酮类化合物的研究进展[J]. 中华中医药杂志, 2007,22(6): 387—389.
[29] 孙苏逖,王张,孟宪丽,张宏,欧苏,杨利娟,朱丽娜,李冬琪. 枇杷花提取物镇咳作用有效剂量的筛选研究[J]. 中药药理与
临床, 2010,26(5): 94—96.