全 文 ：第 19卷
1 9 8 9年
第 1期
2月
植 物 病 理 学 报
A C T A PH Y T O PA TH O L O G ICA S IN IC A
V o l
F e b
19 N o
1 9 8 9
大白菜孤丁病主要病原芜普花叶病毒的研究
朱海英 裘维蕃
(北京农业大学植 物病毒室 )
提要 从北京地区大 白莱病株上分离到芜苦花叶病毒一个分离物 ( T uM V B) , 这个分离物侵染 大白菜 、 油青
菜 、 甘蓝 , 产生 花叶症状 , 在 心叶烟上表现系 统枯斑 , 三生烟和千 日红上产生局部枯斑 .
该分离物为线条 状病毒 , 粒休大小为 70 。一 7 6 On m x 13 一 15” m , P E G沉淀后经二 次差速离心 得到的病毒纯化制
荆 , 对萦外线呈典型的核蛋 白吸收 , 人2 6 。 / A 28 。为 1 . 2 1 ; 分析超离心 获得病毒的沉 降系 数为 1 4 5 . S D S 一聚丙烯
跳胶 报胶 电泳测得 : 外壳蛋白亚基 由单一组分组成 , 分子童为 27 , 0 。道尔顿 , 病毒制荆在冰箱内存放 2个月后 电
泳 , 产生两条蛋 白带 , 分子童分别为 27 , 0 0 和 25 . 0 0 道尔顿 。 聚丙烯陇胺凝胶 电泳侧得 : T u M V B一R N A的分子
量为 3 . 2 x 1 .0 道尔顿 . 电镜下病组织超薄切片中存在风轮状内含体 , 还有环状体和带状体 . 以纯化病毒制剂为抗
原制备了 T u M V B的抗 血沽 , 效 价为 l : 10 24 . 用醉联免疫 吸附技术 E L IS A检侧了田 间大白莱上芜普花叶病 毒 的
带毒率为 7 5 . 4 帕 .
芜蓄花叶病毒 ( T盯 in p M o s a ic V i r o s ) 是大 白菜孤丁病的主要病原 , 国内关于芜警花
叶病毒的研究主要是根据生物学性状 、 寄主范围 、 传播方式和物理性状 .1 2 1 , 在 血 清学试
验和 电镜观察方面也做 了一些工作 t” 一 “ I 而对 T u M N的外壳蛋白亚墓 、 沉降系数和核酸等理化
性质却研究甚少 。 本文报道北京地区大白菜病株上分离到的 T u M V B的生物学 反 应 、 血清血
试验 、 电镜观察 、 病毒的沉降系数 、 外壳蛋白亚墓的分子量和核酸分子量的测定结果 。
材料和方法
(一 ) 生物测定 : 田间病叶汁液磨擦接种于大白菜 ( B r a s s i c a p e k i ne ns is ) 上 , 经分离纯化 的 T u -
M V B分离物和烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的抗血清均不发生反应。 电镜下看到线条状病毒粒子分离物 ,
在温室内作常规汁液磨擦接种 . 观察症状反应 。
(二 ) 病毒提纯 : 毒源繁殖在芥菜 ( B r as s ic a J u n o e a) 上 , 提纯的程度参照日本崔璋京 19 77年的方
法 〔7 、 s 〕 , 接种后 3一 4周采收叶片 , 提取缓冲液为o . S M磷酸缓冲液 ( P H 7 . s ) , 4 % P E G ( MW 6 0 0 0 ) 、
。 . I M N a C I 、 2 % t r it o n x 一 1 0 沉淀病毒后 , 两次差速离心得到病毒的纯化制剂。 纯化的病毒在紫外分光光
度计上测定 2 0一 3 2On m波长下的吸收值。
(三 ) 病毒粒体的电镜观察: 新鲜病组织叶片的浸渍汁和纯化病毒制剂 , 用 2%的 P T A染色 , 电镜下观
察病毒粒体的形态和大小 。
(四 ) 沉降系数的测定 : 悬浮在。 . 01 M硼酸缓冲液中的纯化病毒 ,在 U C A 一 I A分析超离心机上超离心 ,
转速为30 , 00 0印 m , 达速后拍照 。
(五 ) 内含体的电镜观察: 病组织叶片经戊二醛和蛾酸固定 , 丙酮系列脱水 , E p o n 一 8 12 包 埋 后用醋
酸双氧铀和柠檬酸铅染色后 , 作电镜观察。
(六 ) T 让 M V B外壳蛋白亚基分子量 : 采用 S D S 一聚丙烯酸胺凝胶电泳测定外壳蛋白亚基的 分 子量 。
分离胶为 10 % , 隔离胶为 3% , 以磷酸化酶 B ( 94 , 0 00) ,牛血清白蛋白 ( 67 , 0 0) , 胞动蛋白 ( 43 , 0 0) ,
, 该作者现在夭津农亚科学院 中心实拉室工作 ,
DOI : 10. 13926 /j . cnki . apps . 1989. 01. 001
绝 植 物 病 理 学 报1 9 卷
磷酸醉酶( 3 0 , 。。0) 和烟草花叶病毒的外壳蛋白 (2 。 , 。。。) 为标准参照物 。
(七 ) T u M V B 一 RN A的分子量 : 核磷的抽提采用文献 [` J 的方法 , 核酸的抽提液在紫外分光 光度计
下测定 2 30 一 3 2On m波长下的吸收值 。
T u M V B
一
R N A分子量的测定采用 2%聚丙烯酸胺 一。 . 5%琼脂搪的垂直圆盘凝胶 电泳 , 以鼠肝 r 一 R N A
( 18 5
: 0
.
68 x 10 ` , 25 5 : 1
.
7魂x 10 ` ) 和烟草花叶病毒核酸 ( 2 . 0 x i o ` ) 为参照 , 电泳后0 . 0 5%甲苯胺蓝
染色 。
() 、 ) 抗血清的制备和血清反应 : 以纯化病毒为抗原 , 免疫家提 , 注射三次 , 每次间隔一 周 , 第三次
注射后一周采血 。
抗血清效价的测定采用微量沉淀反应和凉脂双扩散 , 用酶联免疫吸附技术 E L sI A检测田间病株上芜普
花叶病毒的带毒率。
结果
(一 ) 寄主反应
结果表明 : T t M V B在温室 中可停染女自英 ( B r a s s i e a o e k i n e n s i s ) ` 汕杳苹 ( B r a s s i e a ;
c n l n e n s 1 s ) 介 来 LU r a s s l c a J u n c e a ) 、 萝 卜 体 a P h a n a s s a t i v a s ) 、 甘蓝 ( U r a s s i c a n a 一
p u s )
、 雪里红 ( B r a s s i e a j u n e e a v a r e r i s p i f o l i a ) 等+ 字花科植物产生系统花叶 , 在大白
菜的内部叶片上为皱缩花叶 , 外部的老叶上为黄斑症状 , 在三生烟上产生局部枯斑 , 心叶烟
表现为系统枯斑或轮纹状枯斑 , 在昆诺阿蔡 ( C h a 。叩。 d iu m q iu on a ) 、 觅色 蔡 ( C h e on p -
d i u m a m a r 。 n t i。 。 z。 r ) 和千 日红 ( G 。 m p h r a n a g lu b o s a ) 上产生局部枯斑 ,并能在蚕豆 ( y -
。 ia fa b a ) 产生枯斑 。 在曼陀萝和黄瓜上不表现症状 .
(二 ) 提纯病毒
经一次 P E G沉淀 、 二次差速离心获得的病毒制剂 , 产量为 3一 4 m g / 10 0 9叶片 . 纯化病毒
制剂呈典型的核蛋白吸收曲线 , 最大吸收在 2 5 6n m , 最小吸收 在 2 4 3 n m , A , 。 。 /A : : 。 = 1 . 2 1 ,
在 Z g o n m处有一个吸收肩 (图 l)
浦
叨^.l0a7叮叱
拓飞( ”耐
图 1 提纯病毒的萦外吸 收曲线 图 2 病组织摊出液内病毒较子
(三 ) 病毒拉休的电镜现察
在电镜下看到 , 在病组织叶片的浸渍汁 (图 2 ) 和纯化病毒制剂中都存在大量线 条状病
1期 朱海英 、 裘维蕃 :大白菜孤丁 病主要 病原芜著花叶病毒的研究 匆
毒粒子 , 该粒子的大小集中分布在 7 0 一 7 6 x0 13 一 1 s n m 之间 。
(四 ) 沉降系数
纯化病毒制剂经分析超离心 , 形成一个对称的吸收峰 , 沉降系数 S : 。W 为 ! 4 5 5 。
(五 ) 内含休的 电镜现察
在电镜下 , 病组织超薄切片的细胞质内有风轮状 ( iP n e w h e O I ) 内含体 , 还有环状体和
带状体 ( B a n d ) (图 3 ) .
图 3 感染 T u M V B大白菜叶片超薄切片 : 细胞质内风轮状内含体 、 环状休 。 和带状 体
(六 ) T u MV B外壳蛋 白亚基分子盘
经 S D S一聚丙烯酞胺凝胶电泳 , 病毒形成一条带 , 分子量为 2 7 , 0 0 道尔顿 , 而纯 化 病毒
在冰箱内放置 2个月后电泳 , 形成二条带 , 分子量分别为 27 , 0 0和 2 5 , 0 0道尔顿 (图约 。
(七 ) T u M V B一 RN A的分子量
T u M V B一R NA 的抽提液呈典型的核酸吸收 , 最大吸收在 2 6 O n m , 最 低 吸 收 在 2 3勃 m ,
A
: 。。
A/
: 。 。为 2 . 2 。 (图 5 ) 。
飞
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一T 一r 川犷沛一下一了一衬仁脚 书。 之扣 鸽。 ;匀. 习。 留 . 巾 脚 3口。 -入( , 锐 )
困 4 外先盈白亚羞迁移率一分子及对数曲线
T u M V B艰 N A经电泳后形成一条带
分子量为 3 , 2 x l o 6道尔顿?
植 物 病 理 学 报1 9 卷
微量沉淀反应测得抗血清的效价为l :12 04 , 琼脂双扩散试验测得血清效价为 l , 16 , 酶
联免疫技术E L is A检测出田间病株上芜著花叶病毒的带毒率为 7 5 . 4肠 。
讨论
根据生物学测定 , 分离物B和 1 9 57 年裘维蕃 处’ ] 从大白菜上分离的孤丁一号相似 , 结合电
镜观察和血清血试验 , 认为分离物B为芜著花叶病毒的一个分离物 。
国外对 T u M V外壳蛋白亚基的组成和分子量有不同的报道 , H il 和 S h eP h e r dt 的 认为 T u -
M V外壳蛋白亚基 由单组分组成 , 分子量为 Z e , 0 0 0 道尔顿 , 2 9 7 6年 E r e n s t H i e b e t和M e d o -
n a ld [
` 。 l 则认为 T u M V外壳蛋白亚基由三种组分组成 , 分子量分别为 2 7 , 0 0 0 , 2 9 , 0 0 0和 3 6 ,
0 。道尔顿 . 本试验得到 , T u M V外壳蛋白亚基单组分组成 , 分子量为 27 , Q0 道尔顿 , 和 H -
1 1和 S h eP h e dr 的结果相近 。 纯化病毒制剂存放两个月 以后 , 电泳形成的二条带 , 可 能 是在
贮存过程中蛋白水解使得外壳蛋白亚基降解造成的。 L’ ` ]
芜著花叶病毒过去虽有研究 , 但不够详细本文对 T u M V B病组织作了超薄切片 , 细 胞质
中存在的三种内含体 , 带状体可能是环状体的侧面观 , . 环状体由致密的带组成的环或圈 ; 带
状体为紧密排列的病毒粒子组成的病毒粒子束 。 [ ” ” 2 ’ ` 3 ” 弓1
( 1 9 8 8年 6月 1 5日收稿 )
1
. 裘维移 、
2
. 裘维蕃 、
3
. 胡吉成等
4
_ 朱培坤 _
王楷析 。 1 9 5 7 · 植物病 理学报
梁训生 . 1 9 6 3 · 植物病理学报
. 19 6 2
。 植物保护学报 l ( l )
今考文做
3 ( x )
1 3 1一 4 3 .
e ( 2 )
: l e。一 27 7
: 2 5一 3 4
1 9 8 1
. 上 海农业科技
5
. 李彦勇 . 1 9 84 。 植物病理学报
6
. 马德芳 等 。 19 8 3 。 徽 生物学报
14 4 : 8一 9 。
一4 ( ` ) , Z r 。一 2 2 4 .
2 6 ( l )
, ` 5一 4一
7
.
Sh e p il e r d
,
J
.
e t a l一 , 6 o . Pil y t o P a t h o lo g y 50 : 7 07一 5 0 3 .
5
.
Ja n g K y u n g C h o i e f a l一 。了7 . A n n . Ph y t o P a t h o l . S o c . Ja P a n 4 3 : 4 4 0一弓4 8
。 . J o il n , H . e t a l一 盯 2 . V i r o lo g了 4 7 : 5 0 7一 5 1 6 .
10
.
E r n e s t
,
H i e b e r t a n d M e d o n a l d
,
J
.
G一 , 7 6 . V i r o l o gy 7 0 : 1 4 5一 1 5 0 .
l一 J a n g K y u n g Ch o i e t a l一 。 7 7 . A n n . P hy t o P a til o l . S o e . j a P a n 4 5 : 32一 3 9 .
1 2
.
H a y a s h i
,
T
.
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.
1 9 6 5
.
P五y t o p a t il o l o g了 . 5 5 : 5 8一 6 1 .
1 3
.
E dw a r d s o n a n d P u r e i f u ll
.
l o 6 o
.
P五y t o P a t h o l o g y 6 0 : 8 5一 8 8 .
14
.
M e d o n a ld
,
J
.
G
.
e t a l一 。7 5 . V i r o l o g y 6 3 : 2 9 5一 5 0 5 .
F U R T HE R
C A U S IN G
ST U D I ES O N T HE T U RN IP M O SA IC V ! R U S
K U T ! NG D ! SE AS E O F C H IN E S E C A B B AG E
Z h u H a i y i n y . C h i u W
e i f a n
( L a b
o r a t o r y o f P la n t V i r o l o g y
,
B e i j i n g A g r i
.
T h e p r e o e n t p a p e r d e a l o w i t h t h e f u r t h e r : t u d i
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U n i v e r s i t y )
T u r n i P m o o a i e
j u n
e e a o h o w e d
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.
T h e P u r i f i e d v i r u ; f r o m i n f e e t e d
o f t h e i ` o l a t e 3 o f
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e a v e ` o f B r a , 夕 i c a魄。 f。 l l o w i n g 。 h a r a t e r i ; t i e : ; A : 。。 / : 。 。一 , , : ; , 。 。 i n g l。 。: m m e t r i e a l
1期 朱海英 , 裘维番 : 大白莱孤丁 病主要病原芜著花叶病毒的研究
a b : o r b e n t p e a k a p p e a r e d a n a n a l了 t i e a l u l t r a e e n t r i f u g a t i o n , : : o = z续5 5 , p o ly a e r一
y l a m id e g e l e l e e t r o p h o r e : i: i n t h e p r e : e n e e o f S D S
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.
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.
2 X l o
6
D a l t o n
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d i n g p i n w h e e l。 , r i n g s a n d d e n s e b a n d s . A n t i s e r u m p r e p a r e d f r o m p u r i f i e d T u M -
V B r e : u l t e d i n a t i t r e o f z / 2 0 2 4
.
D o r i a g t h e C h i n e : e e a b b a g e g r o w i n g s e a : o n i n
1 , 8 6
, 。 a m p l e : o f C h i n e : e e a b b a g e p l a n t s w e r e e o l l e e t e d f r o m f i e l d o a n d d e t e e t e d
w i t il E L I S A
.
I t w a s 占h o w n th a t 7 5
.
4肠 o f t h e ; a m p l e : t e : t e d e o n t a i n i n g T u M V 。 .
.
N
o w a f a e u l t y
o f T i a n j i n A e a d e m y o f A g r i e
.
S e i e n e e
.
护份白翻白水白梢白鳃釜论文摘要李熟. 冷 . 件侧冷侧琳礴
我国 1 3个小安品种的抗杆锈性基因
胡长程
(中国农科院植保所 )
利用 北美 23 个小麦杆锈菌系对 中国 13 个当前生产小麦品种的抚杆锈性基因进行 了测定 . 冬协 3号和冬协 4号具 有 Ssr 和
S r l l
. 丰抗 2号 、 丰抗 8号 、 京单 106 、 冀78 一 4 07 8 、 鲁麦 l号和烟 7 7。一 4可能具有S r 3 1 . 丰抗 13 具有 S sr 和另一 个 未 鉴定 出
的基因 . 辐 63 、 晋麦 1 1 . 延安比和百农 32 1 7可 能具有一个未定名的基 因 , 它只对少数菌系 有抗性 。
品 种 名 称
口. . ` 丰抗 13号
冬协 3号
冬 协 4号
冀 7 8一 4 07 8
烟 7 7 7 0一 4
丰抗 2号
丰抗 8号
鲁麦 1号
京单 1 0 6
辐 6 3
晋麦 1 号
延安 15 号
百农 3 2 1了
S r g e n e
S r s
、 十
S r s
,
S r 3 1
S
r s
,
S r 3 1
S
r 3 1
S
r 3 1
S r 3 1
S r 3 1?
S
r 3 1?
S
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+
+
十