全 文 ：贾晓梅，周 悦，曹柳青，等． 不同外植体及激素组合对贴梗海棠愈伤组织诱导的影响［J］． 江苏农业科学，2016，44(2):54 － 56．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2016． 02． 014
不同外植体及激素组合
对贴梗海棠愈伤组织诱导的影响
贾晓梅，周 悦，曹柳青，黄璞璐
(保定学院生化系，河北保定 071051)
摘要:以当年生幼嫩枝条、2 ～ 3 年生枝条的叶片为试验材料，分别采用 0． 1%HgCl2 溶液、2%NaClO溶液进行消毒
处理，运用对比试验的方法进行贴梗海棠愈伤组织的诱导研究，结果表明，诱导愈伤组织的最适外植体为叶片，最适培
养基为 MS + 0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 3 mg /L NAA。
关键词:贴梗海棠;外植体;激素组合;愈伤组织;诱导
中图分类号:S685． 990． 4 + 3 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2016)02 － 0054 － 02
收稿日期:2015 － 03 － 31
基金项目:河北省高等学校科学技术研究项目(编号:Z2013008);保
定学院本科教学工程建设项目(编号:20120205、Xk20130601);保
定学院科研基金(编号:2012Z08);保定学院科研团队(编号:
KYTD2013001);河北省科技计划(编号:15227527)。
作者简介:贾晓梅(1978—)，女，硕士，副教授，主要从事植物生理和
生物技术研究。E － mail:jxmqiang@ aliyun． com。
贴梗海棠［Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai］是蔷薇科
木瓜属植物，为落叶灌木，耐旱、喜光、耐寒，抗逆性极强。其
花色艳丽，气味芳香，被广泛应用于城乡绿化、庭院美化;其果
实别称皱皮木瓜，富含多种营养成分［1］，为常用中药，可舒筋
活络、驱风止痛［2］;其叶片具有抗氧化和保肝功效［3］。可见，
贴梗海棠是一种具有多用途的优良园林绿化植物。
贴梗海棠的繁殖多采用传统的种子繁殖和无性繁殖(扦
插、嫁接、压条等)［4］。为提高贴梗海棠的品质，部分学者已
对其育苗［5］、花期调控［6］、嫁接技术［7］、栽培管理［8］等方面进
行了研究;为突破繁殖材料的数量限制、加快推广速度，部分
学者已将组织培养技术应用于贴梗海棠的快速繁殖［9 － 10］，初
步建立了快繁体系，但关于贴梗海棠愈伤组织培养的研究鲜
有报道。通过研究不同外植体和激素组合对其愈伤组织诱导
的影响，以期为贴梗海棠的遗传转化育种开辟一条有效途径，
为该品种的开发和推广奠定技术基础。
1 材料与方法
1． 1 试验材料
试验材料由三禾苗圃提供，取贴梗海棠当年生幼嫩枝条、
2 ～ 3 年生枝条的叶片为外植体。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 材料消毒 将新生幼嫩枝条用加入少量皂粉的自来
水浸泡 30 min，再用自来水冲洗 1． 0 ～ 1． 5 h，去除肉眼可见的
灰尘及其他杂质。在无菌操作台内，将试验材料用 75%乙醇
消毒 30 s后分为两半，一半转入 0． 1% HgCl2 溶液中浸泡 7 ～
8 min，再用无菌水冲洗 3 ～ 4 次;另一半转入 2% NaClO 溶液
中浸泡 15 min，再用无菌水冲洗 3 ～ 4 次。将消毒后的材料置
于无菌滤纸上，吸干接种材料表面的多余水分。将叶片切成
0． 5 cm2 的小块，或在完整叶片上划出网格状伤口，嫩茎、幼
芽的长度均为 0． 5 ～ 1． 0 cm，分别接种于诱导愈伤培养基上。
每种外植体分别在各体积分数梯度激素的培养基上接种 10
瓶，叶片每瓶接种 4 块，茎段每瓶接种 4 段，幼芽每瓶接种
3 个。
1． 2． 2 培养基 以 MS为基本培养基，附加不同种类激素体
积分数配比组成的 9 种培养基(表 1)。培养基均附加蔗糖
30 g /L、琼脂 8 g /L，pH值为 5． 8，培养温度为(25 ± 2)℃，光
照度为 2 000 lx，每天光照 8 h。
表 1 培养基类型
序号 外植体 培养基类型
1 叶片、茎段、幼芽 MS +0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 1 mg /L NAA
2 叶片、茎段、幼芽 MS +0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 2 mg /L NAA
3 叶片、茎段、幼芽 MS +0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 3 mg /L NAA
4 叶片、茎段、幼芽 MS +1． 0 mg /L 6 － BA + 0． 1 mg /L NAA
5 叶片、茎段、幼芽 MS +1． 0 mg /L 6 － BA + 0． 2 mg /L NAA
6 叶片、茎段、幼芽 MS +1． 0 mg /L 6 － BA + 0． 3 mg /L NAA
7 叶片、茎段、幼芽 MS +2． 0 mg /L 6 － BA + 0． 1 mg /L NAA
8 叶片、茎段、幼芽 MS +2． 0 mg /L 6 － BA + 0． 2 mg /L NAA
9 叶片、茎段、幼芽 MS +2． 0 mg /L 6 － BA + 0． 3 mg /L NAA
2 结果与分析
2． 1 不同消毒方法对污染率的影响
在对外植体的消毒过程中，分别选用 2% NaClO 溶液、
0． 1% HgCl2 溶液进行消毒处理。由表 2 可知，选用 0． 1%
HgCl2 溶液进行浸泡消毒的外植体污染率远远低于选用 2%
NaClO溶液消毒的外植体，2% NaClO 溶液处理后污染率均
在 10%及以上，而 0． 1% HgCl2 溶液处理后消毒效果明显改
善，叶片、茎段、幼芽污染率分别为 2． 5%、2． 5%、0。
2． 2 不同处理方式对诱愈结果的影响
由表 3 可知，在诱愈培养基上接种 20 d 后，通过诱导过
程发现划有网格状伤口的全叶外植体出愈率(22%)远远低
于切成小块的叶片外植体(67%)，故将经过处理的全叶外植
—45— 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 2 期
表 2 不同消毒剂处理对污染率的影响
材料 消毒剂
接种数
(块)
污染数
(块)
污染率
(%)
叶片 2% NaClO 40 5 12． 5
0． 1% HgCl2 40 1 2． 5
茎段 2% NaClO 40 4 10． 0
0． 1% HgCl2 40 1 2． 5
幼芽 2% NaClO 30 3 10． 0
0． 1% HgCl2 30 0 0
表 3 叶片不同处理方式对诱愈结果的影响
叶片处理方式
接种数量
(块)
培养时间
(d)
出愈数
(块)
出愈率
(%)
完整叶片上划出网格状伤口 45 20 10 22
切成 0． 5 cm2 的小块 45 20 30 67
体切成 0． 5 cm2 的小块，转接至相应培养基中。
2． 3 不同激素组合对茎段愈伤组织的影响
茎段愈伤组织产生于两端切面处，诱导初期质地松软、呈
半透明乳白色。在诱愈培养基上接种 20 d后，有 84%茎段均
诱导出愈伤组织，与叶片、嫩芽等外植体相比，茎段愈伤组织
出现最早。将茎段产生的愈伤组织继代转接，均能增殖。培
养 20 d发现大部分培养基中增殖的愈伤组织与诱导初期一
样质地松软、没有光泽，并随培养时期的延长而褐变死亡，仅
3、5、9 号培养基上的愈伤组织出现生长，其中 9 号培养基上
的愈伤组织状态最好，出现质地松脆的绿色愈伤组织(表 4)。
表 4 茎段产生愈伤组织结果
培养
基
接种数
量(瓶)
培养时
间(d)
出愈率
(%)
褐化率
(%) 质地 继代培养结果
1 10 20 63 35 软松 褐变死亡
2 10 20 90 30 松软 褐变死亡
3 10 20 80 40 松脆 乳白色愈伤组织
4 10 20 95 42 松软 褐变死亡
5 10 20 80 30 松脆 乳白色愈伤组织
6 10 20 90 45 松软 褐变死亡
7 10 20 90 50 松软 褐变死亡
8 10 20 83 52 松软 褐变死亡
9 10 20 100 40 松脆 绿色愈伤组织
2． 4 不同激素组合对叶片愈伤组织的影响
叶片愈伤组织多发生于切面，少数愈伤组织由叶片表层
细胞产生，多数呈乳白色，少数呈绿色。由表 5 可知，接种
20 d 后约 80%叶片能诱导出愈伤组织，但 4、5、7 号培养基出
愈率较低，仅为 60%。在转接愈伤组织继代培养的过程中，
2、3、6 号培养基中愈伤组织的增殖能力远远高于其他培养
基;其他培养基上的愈伤组织虽能增殖，但表现松、软、过于散
碎，并随培养时间的延长陆续褐变死亡。在 3 号培养基上诱
导出的绿色愈伤组织与茎段、幼芽等外植体诱导出的状态良
好的愈伤组织相比质地更松脆。
2． 5 不同激素组合对幼芽诱导的影响
在诱愈培养基上接种 10 d左右，幼芽开始伸长生长;20 d
后部分培养基中的幼芽平均可长至 3． 3 cm。在诱导过程中
幼芽基部长出丛芽，而幼芽所诱导的愈伤组织多在丛芽部位，
表 5 叶片产生愈伤组织结果
培养
基
接种数
量(瓶)
培养时
间(d)
出愈率
(%)
褐化率
(%) 质地 继代培养结果
1 10 20 82 30 松软 褐变死亡
2 10 20 100 30 松脆 乳白色
3 10 20 100 20 松脆 绿色愈伤组织
4 10 20 60 50 松软 褐变死亡
5 10 20 60 40 松软 褐变死亡
6 10 20 100 30 松脆 乳白色愈伤组织
7 10 20 60 50 松软 褐变死亡
8 10 20 75 40 松软 褐变死亡
9 10 20 90 45 松软 褐变死亡
其质地松软，转接后增殖培养，褐化率高达 97%，短时期内均
褐变死亡。由表 6 可知，在幼芽诱导与继代增殖的过程中，接
种于 8 号培养基的幼芽生长速度最为迅速，且形成的丛芽数
量也多于其他培养基，与接种于其他培养基的幼芽相比具有
明显优势。
表 6 不同激素组合对幼芽诱导的影响
培养
基
接种数
量(瓶)
培养时
间(d)
出愈率
(%)
褐化率
(%)
幼芽平均
高度(cm)
平均每株形
成丛芽量(个)
1 10 20 10 100 3． 0 2
2 10 20 12 100 3． 5 2
3 10 20 18 90 2． 0 1
4 10 20 15 95 2． 5 1
5 10 20 9 97 3． 0 2
6 10 20 13 100 2． 5 1
7 10 20 10 95 4． 2 3
8 10 20 8 95 5． 5 4
9 10 20 3 100 3． 5 2
3 结论
本试验选择贴梗海棠的叶片、茎段、幼芽作为外植体，研
究不同外植体及激素组合对贴梗海棠愈伤组织诱导的影响。
结果表明，在选择消毒剂时，0． 1% HgCl2 溶液处理远远好于
2% NaClO溶液处理;叶片进行 0． 5 cm2 的分割处理出愈率高
于划有网格状伤口的全叶。在所有外植体愈伤组织的诱导和
继代增殖过程中，茎段、叶片、幼芽的愈伤组织出愈率分别为
84%、80%、11%，而幼芽的褐化率最高(97%)、叶片最低
(37%)，且由叶片产生的绿色愈伤组织质地更为松脆，增殖
能力比茎段和幼芽产生的更强。由此确定诱导愈伤组织的最
适外植体为叶片，最适培养基为 MS + 0． 5 mg /L 6 － BA +
0． 3 mg /L NAA。
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林夏斌，黄华达，黄怀妹，等． 白花拟万代兰(Vandopsis undulata)组培苗的增殖、生根与炼苗［J］． 江苏农业科学，2016，44(2):56 － 59．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2016． 02． 015
白花拟万代兰(Vandopsis undulata)组培苗
的增殖、生根与炼苗
林夏斌，黄华达，黄怀妹，彭东辉，翟俊文，吴沙沙
(福建农林大学园林学院，福建福州 350002)
摘要:白花拟万代兰(Vandopsis undulata)花大素雅，具芳香，有很高的观赏价值，并有很大的市场前景。为缩短白
花拟万代兰从无菌播种到成苗的时间并保证组培苗移栽成活率，以无菌播种获得的白花拟万代兰小苗为材料，合并其
增殖和生根阶段最适培养基的筛选，继而对最适移栽基质进行了筛选研究。结果表明，丛生芽增殖的最佳培养基为
MS + 1． 0 mg /L 6 － BA + 0． 2 mg /L IAA + 250 mL /L 椰子汁，平均增殖系数达 3． 57;丛生芽生根培养的最佳培养基为
MS + 2． 0 mg /L 6 － BA + 0． 5 mg /L IAA + 50 mL /L椰子汁;所用移栽基质中，泥炭土和木屑对白花拟万代兰栽培成活率
有显著影响，最优的基质体积配比为:苔藓 ∶ 泥炭土 ∶ 珍珠岩 ∶ 木屑 = 1 ∶ 3 ∶ 2 ∶ 2。
关键词:白花拟万代兰;组织培养;移栽基质;6 － BA;NAA
中图分类号:S682． 310． 4 + 3 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2016)02 － 0056 － 04
收稿日期:2015 － 09 － 08
基金项目:福建省特色花卉品种创新与种苗设施繁育产业(编号:
2014S1477 － 7)。
作者简介:林夏斌(1990—)，男，硕士研究生，主要从事园林植物应用
研究。E － mail:xiabinlin1916@ 126． com。
通信作者:吴沙沙，博士，讲师，从事园林植物资源与应用研究。
E － mail:shashawu1984@ 126． com。
白花拟万代兰(Vandopsis undulata)为兰科(Orchidaceae)
拟万代兰属典型的热带附生兰，产中国云南南部至西北部
(勐海、腾冲和怒江河谷)、西藏东南部(墨脱、背崩)，生于海
拔 1 800 ～ 2 200 m的林中树干上，尼泊尔、锡金、不丹和印度
东北部也有分布［1］。在兰科植物中，拟万代兰属约 5 种，目
前，均未实现工厂化生产供应市场，野外资源急需保护和人工
扩繁［2］。白花拟万代兰花大素雅，具芳香，有很高的观赏价
值，具有很大的市场前景。拟万代兰属约有 5 种，中国仅有拟
万代兰(V． gigantea)和白花拟万代兰 2 个种。兰科植物单个
果实种子量大是其显著优势，利用种子进行大规模繁殖是对
保护兰科植物的重要手段［3］。兰花种子又称种胚，其细如粉
尘，只有在显微镜下才能看清，没有胚乳，处于原胚阶段，缺乏
营养［4 － 5］，多数兰科植物依靠其自身营养则难于萌发，因此外
源营养对兰花种子的萌发显得尤其重要［6］。传统的繁殖方
式，繁殖系数低、速度慢［7］，不能满足日益增长的市场需要。
找到一个快速繁殖种苗的方法对其种质资源的保护和开发利
用将具有重要的现实和理论意义。
本试验采用不同培养基配方、栽培基质，对白花拟万代兰
增殖、生根及组培苗移栽成活率进行了研究，探讨在无菌培
养、移栽过程中不同因素对其成活、生长发育的影响，以期获
得最适宜的无菌培养配方和移栽条件，为提高白花拟万代兰
的繁殖系数，获得大量优质组培苗提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
2013 年 9 月，对购自云南腾冲的白花拟万代兰植株上未
开裂果荚内的种子进行无菌播种，所用培养基为:MS +
0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 2 mg /L NAA + 8 g /L 琼脂 + 30g /L 蔗
糖 + 2 g /L活性炭。丛生芽的增殖与生根培养材料来源于无
菌播种 90 d的无根种胚苗。炼苗所用植物材料为生根培养
90 d的组培苗。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 丛生芽的增殖与生根 以无菌播种 90 d 后，芽长为
0． 5 ～ 1． 0 cm 尚未生根的白花拟万代兰小苗为材料，采用
L9(3
4)正交试验研究不同基本培养基、6 － BA、IAA、椰子汁
(新鲜椰子汁)对丛生芽增殖和生根的影响(表 1)［8］。每瓶
接种 7 株(图 1 － A)，每个处理 30 瓶，3 次重复。培养条件
为:温度(25 ± 2)℃，相对湿度 70% ～ 80%，光照度 1 000 ～
1 500 lx，光照时间 12 h /d。培养 30 d 后统计增殖数、生根
数、叶片数，测量根长，并对每个处理中随机选择的 10 株植物
进行生长状况评分，以 1 ～ 4 分计:1 表示植株长势差，增殖数
—65— 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 2 期