全 文 ：第26卷第4期
2 0 0 5年 8月
西 安 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 )
Journal of Xian Jiaotong University(Medical Sciences)
Vol. 26 No. 4
Aug. 2005
土贝母皂甙对家兔单纯疱疹病毒性角膜炎的作用
王　峰 ,张晓辉 ,权彦龙 ,孙乃学
(西安交通大学第二医院眼科 ,陕西西安　710004)
摘要:目的　评价土贝母皂甙(tubeimoside , Tu)治疗家兔单纯疱疹病毒性角膜炎(he rpes sim plex ker atitis , H SK)的
效果。方法　在地鼠肾细胞 BHK-21 上进行单纯疱疹病毒 I 型(HSV-1 型)SM 44毒株复苏 ,制作兔 HSK 模型。家兔
分为 0. 2 g / L Tu 、无环鸟苷(ACV)和生理盐水(NS)3 组 , 采用裂隙灯显微镜 、扫描电镜和透射电镜观察眼部病变的变
化。结果　0. 2 g / L Tu 、无环鸟苷和生理盐水组第 6 ～ 8 天角膜病变分值分别为 3. 13 ～ 3. 5、1. 75 ～ 1. 88 和 3. 83 ～
3. 88 , 第 14 天时为 2. 07、1. 13 和 2. 77 , 3 组间比较 , 均有显著性差异(P<0. 01)。 0. 2 g /L Tu 可以显著缩小角膜病变
面积 ,促进角膜上皮细胞的修复 , 其作用优于生理盐水组 , 但不及 ACV 组。结论　Tu 点眼剂治疗实验性 H SK 有一
定的疗效 ,但尚不及 ACV 。
关键词:土贝母皂甙;单纯疱疹病毒;角膜炎
中图分类号:R772. 21　　　文献标识码:A　　　文章编号:1671-8259(2005)04-0330-03
Experimental research of tubeimoside against
herpes simplex keratitis in rabbits
Wang Feng , Zhang Xiaohui , Quan Yanlong , Sun Naixue
(Department of Ophthalmology , Second Hospital of Xian Jiaotong University , Xian 710004 , China)
ABSTRACT:Object ive　To appraise ther apeutic e ffe cts of tube imoside on herpes simplex ker atitis of rabbits.
Methods　HSV-1(SM44 str ain) is recovered on monolayers of BHK-21 cell cultur es , then r abbit model of HSK was
established a fter inoculation. Af ter 0. 2 g/ L Tu topically given , all eyes ar e examined by using slit-lamp-microscopy ,
and corneal samples were observed for ocular changes under tr ansmission and scanning electromicroscope.
Results　Diff er ences we re significant in the three groups of corneal involvement scores. 0. 2 g/ L Tu can obviously
reduce corneal involvement ar ea , and can also he lp to r ehabilita te aff ected corneal epithelial cells. Conclusion　Tu
agent is able to cure exper imental HSK to a cer tain degree , however , is less ef fective on HSK than acyclovir .
KEYWORDS:tubeimoside;herpes simplex virus;ker atitis
收稿日期:2005-01-10　　修回日期:2005-03-25
作者简介:王峰(1962-),男(汉族),硕士 ,副教授. E-mail:w foculi st@
126. com
　　单纯疱疹病毒(herpes simplex virus , HSV)对人体
感染具有潜伏 、好复发、感染率高等特点。单纯疱疹病
毒性角膜炎(herpes simplex keratitis , HSK)是一种感染
性角膜病 ,致盲率较高 ,常反复发病。目前药物是治疗
HSK原发和复发感染比较有效的方法。土贝母是葫芦
科假贝母属植物假贝母的块茎 ,土贝母皂甙(tubeimo-
side ,Tu)为其水溶性成分 ,具有抗肿瘤 、抗病毒等作用。
体外试验中 Tu 可以抑制 HSV-1[ 1] ,为此我们对 Tu 治
疗兔眼 HSK疗效进行了进一步研究。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　动物　健康长耳白兔 26 只 ,体质量 2. 5 ～
3. 5 kg ,雌雄不限 ,裂隙灯显微镜下检查双眼无疾病 。
由西安交通大学实验动物中心提供 。
1. 1. 2　药品　土贝母皂甙点眼液由西安交通大学第
二医院中药研究室提供 , 加生理盐水配制浓度为
0. 2 g /L。无环鸟苷眼药水 (acyclovi r , ACV , 1 g /L ,
武汉武警制药厂生产)。
1. 2　方法
1. 2. 1　病毒扩增　HSV-1 SM 44毒株接种在传代地
鼠肾细胞系单层细胞上 ,接种第 2天开始在倒置显微
镜下观察细胞病变效应。第 3 天吹打细胞与瓶壁脱
落 ,获得病毒原液 3 mL。TCID50(半数组织培养感染
量)为 10 - 7 ～ 10- 8 ,病毒原液冻存于 - 20 ℃备用 。
1. 2. 2　制作 HSK 动物模型　18只兔(36 只眼)用
4 g /L(0. 4%) Benoxil点眼 3次表面麻醉后 , 4. 5 号
针头上皮层井字划痕 , 长度 4. 5 ～ 5. 5 mm , 深度
0. 5 mm ,取 HSV-1 SM44毒株原液 30 μL 点入结膜
4 期 王　峰 ,张晓辉 , 权彦龙 ,等. 土贝母皂甙对家兔单纯疱疹病毒性角膜炎的作用
囊 ,闭眼轻揉 30 s。
1. 2. 3　分组 、给药　18 只兔随机分为 3组:0. 2 g /L
Tu 、无环鸟苷(ACV)阳性对照组和生理盐水(NS)阴
性对照组 ,每组 6只兔(12只眼)。接种病毒后 18 h
开始给药 ,每日点眼 5 次 ,每次 2滴(100μL),间隔
2 h ,双眼接受同样治疗 ,共 14 d。
1. 2. 4　裂隙灯显微镜观察　每天在裂隙灯下观察病
变程度 、评分 、拍片记录。角膜上皮病变评分标准采
用 T rousdale记分法[ 2] 。其他评价参数包括眼睑 、结
膜 、虹膜和房水 ,其中以角膜上皮病变分值(corneal
epithelial involvement score , CEIS)为主要指标 。
1. 2. 5　电镜观察　接种病毒后第 7天和第 14天 ,分
别从 Tu和 NS 组中各取一只兔角膜标本(取角膜病
变接近平均计分),电镜下观察并拍片记录。
1. 2. 6　统计学方法　采用双因素方差分析 ,多组间资
料比较采用 Student-Newman-Keuls方法(q检验)。
2　结　　果
2. 1　裂隙灯显微镜观察结果　接种病毒后 24 h ,所
有家兔角膜上皮均出现点状 、短棒状 、短树枝状病灶 ,
病变首先从划痕处角膜上皮缺损部位开始形成 。NS
组:角膜病变发展迅速 。接种后第 2天 ,出现典型树
枝状病灶 , 第 6 ～ 8 天形成大片密集地图状溃疡 ,
CEIS 为 3. 83 ～ 3. 88。此后上皮病变呈现好转趋势 ,
但向纵深发展 ,基质水肿较重。14 d CEIS 为 2. 77。
眼睑疱疹发病率为 50%, 结膜炎 、虹膜炎发病率
100%,前房积脓发病率 50%。ACV 组:病变以点状
病灶为主 ,基质水肿 、浸润轻微 。第 6 ～ 8天 CEIS 为
1. 75 ～ 1. 88 ,第 9 ～ 12 天上皮迅速愈合。14 d CEIS
为 1. 13 。实验过程中 ACV 组未见眼睑疱疹发生 ,结
膜炎发病率 62. 5%,虹膜炎发病率 50%,无前房积
脓。Tu组:接种第 2 天 ,角膜上皮出现棒状 、树枝状
病灶 。第 6 ～ 8 天时病变程度均达到高峰 , CEIS 为
3. 13 ～ 3. 5 ,形成树枝状或地图状溃疡 ,面积较 NS 组
小。第 14 d病变面积约 25%。14 d CEIS 为 2. 07。
眼睑疱疹 、结膜炎 、虹膜炎发病率分别为12. 5%～
25%、100%、87. 5%,无前房积脓。 Tu与 NS 组 、Tu
与 ACV组 CEIS比较 ,差异均有显著性(P <0. 01)。
2. 2　透射电镜观察结果　NS 组:病程第 7天 ,微绒
毛完全消失 ,细胞层次呈现均质化(图 1)。病程第
14天 ,上皮细胞增生愈合 ,微绒毛形成 ,细胞层次可
见3 、4层 ,染色质边集 ,线粒体扩张呈囊泡状 。ACV
组:感染第 14天 ,角膜上皮细胞表面微绒毛排列整齐
规则 、粗大 ,染色质部分边集 ,胞浆中较多微丝 、粗面
内质网和线粒体 ,细胞间桥粒连接紧密 ,细胞外胶原
纤维排列整齐。Tu 组:感染第 7 天 ,微绒毛减少 、部
分消失 ,细胞层次 2 、3层 ,染色质边集(图 2)。感染
第 14天 ,微绒毛恢复 ,排列不规则 ,细胞层次 7 、8层 。
线粒体轻度肿胀 ,粗面内质网扩张。细胞排列结构较
整齐。
2. 3　扫描电镜观察结果　NS组:感染第 7天 ,溃疡
区大量细胞碎片 、核质碎屑 ,微绒毛消失(图 3)。感
染第 14天 ,微绒毛基本恢复 。胞膜表面有大小不等
的孔洞或破裂 ,周围可见少数早期病变细胞。ACV
组:感染第 14天 ,角膜上皮细胞形态恢复正常 ,为典
型多边形 ,微绒毛排列整齐 ,分布均匀 ,细胞膜表面基
本完整 ,仅见极少裂解的核质碎屑 ,无圆化病变细胞 。
Tu组:感染第 7天 ,病变上皮细胞变圆 ,突出于表面 、
松解或脱落 。微绒毛较多 ,分布不均(图 4)。感染第
14天 ,上皮修复。上皮细胞形态较规则 ,微绒毛排列
整齐 ,胞膜表面孔洞较少。感染第 20天 ,上皮细胞尚
未完全恢复正常多边形形态。
3　讨　　论
单纯疱疹病毒的感染很普遍 , 经血清学调查 ,
90%成人血清单纯疱疹病毒抗体阳性 ,国内角膜病患
者 50%为单纯疱疹病毒感染引起[ 3] 。单纯疱疹病毒
与上皮细胞和神经组织具有亲和力 ,在皮肤 、黏膜 、角
膜等部位形成疱疹灶 ,在角膜 、三叉神经节 、颈上神经
节 、中枢神经系统潜伏 。目前研究认为潜伏相关性转
录子 、胸苷激酶 、DNA 聚合酶 3种基因是功能性潜伏
基因 ,与 HSV-1潜伏的建立和维持有关 。单纯疱疹
病毒性角膜炎主要是由单纯疱疹病毒 I 型引起的角
膜病 ,病毒的潜伏成为日后复发感染的根源。 HSK
反复发生后 ,形成大面积地图状角膜溃疡 、新生血管 、
炎性细胞浸润 、坏死性角膜基质炎 、角膜葡萄肿 ,最后
角膜穿孔或形成粘连性角膜白斑 。国内外报道中 ,
HSK 在角膜病致盲原因中占居首位。
由于手术效果不理想 ,诱导复发几率大 ,故目前
HSK 治疗以药物为主[ 4] 。药物局部点眼或结膜下注
射是重要的治疗手段。抗 HSV 药物以选择性核苷
类为主 ,结合其他药物为辅 ,如干扰素及其诱生剂 、胶
原酶抑制剂 、生长因子类 、激素等 。目前研究以基因
治疗 、疫苗研究和新药开发为主要方向。
土贝母是中国特有药用植物 ,据药典记载 ,古代
多用于治疗乳痈 、疮病肿毒 ,其化学成分包括脂溶性
和水溶性 2种。脂溶性成分有 3种:△7 , 16 , 25(26)-
豆甾三烯醇 、麦芽醇和棕榈酸。水溶性成分即土贝母
皂甙 、腺苷和麦芽糖。 Tu 药理作用主要是抗肿瘤
和抗病毒 。体外试验中对人肾颗粒细胞癌GRC-1 、
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　 西 安 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) 第 26 卷
图 1　病程第 7 天 ,透射电镜下 NS 组角膜上皮细胞呈均质化 ,微绒毛完全消失
Fig. 1 By transmission electromicro scope , at the seventh day of histor y co rneal epithelium of NS we re completed destr oyed , mi-
crovilli also w ho lly v anished(×8 000)
图 2　感染第 7 天 , Tu 组角膜上皮细胞 2、3 层 , 核染色质边集 ,微绒毛部分消失
Fig. 2 A t the seventh day o f infec tion , epithelium o f Tu were reduced to 2～ 3 layers , nucleus chromatin ga thered pe riphe rally ,
micro villi partia lly disappeared(×8 000).
图 3　感染第 7 天 ,扫描电镜下 NS 组溃疡区大量细胞碎片 ,核质碎屑 , 微绒毛消失
Fig. 3 By scanning electromicro scope , at the seventh day o f infec tion larg e amounts of epithelial fragments and kary opla sms
debris show ed up in ulcer ar eas o f NS g roup , microv illi made scarce(×2 000)
图 4　感染第 7 天 , Tu 组病变角膜上皮细胞肿胀 ,突出于表面 , 微绒毛多 ,分布不均
Fig. 4 A t the seventh day o f inoculation , epithe lium of Tu swelled , protr uded out of sur face. M ic rovilli made much more and
had uneven a rrangement (×2 000)
神经胶质母细胞瘤 、神经母细胞瘤 、结肠癌 、胰腺癌 、
宫颈癌 、胃癌瘤细胞 、鼻咽癌细胞的生长有明显抑制
作用[ 5] 。土贝母皂甙甲抗病毒谱主要包括乳头多瘤
空泡病毒中人疣病毒和痘病毒中传染性软疣病毒 。
在 Tu治疗兔眼 HSK的实验中 , Tu可以减轻角
膜病变程度 ,使 CEIS 评分下降[ 6] 。与 NS 对照组相
比 , Tu药物组使病变范围局限 ,细胞结构与细胞器
损害较轻 ,但与 ACV 药物对照组相比 ,效果略差 ,电
镜观察与裂隙灯下观察结果一致。感染第 14天上皮
修复后 ,从细胞层次 、细胞间连接和细胞器的病理损
害观察 ,与盐水对照组相比 , Tu 减轻了病理损害的
发生 、发展 ,抑制病毒向周围邻近细胞扩散 ,缩小病灶
范围 ,具有一定保护易感细胞的作用。从本实验结果
可知 ,Tu 治疗兔眼 HSK 有效 ,并通过结膜炎 、虹膜
炎 、眼睑疱疹 、前房积脓等眼部指标观察 ,说明 Tu 对
病情有一定改善作用 ,但效果不及 ACV 。
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(编辑　邱　芬)
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