全 文 ：高效液相色谱法测定华细辛中马兜铃酸 A含量
高钧 , 李伟 ,魏峰 (天津天士力集团有限公司 ,天津 3吩扣2
摘要 : 目的 测 定华细辛中马兜铃酸 A 的含量 。 方法 建立 高效液相色谱方法 , 采用峪 lent oZ d祖 x sB 一 1C 8色谱柱 ( 4 . 6 mln x
25 0 mln
,
5 脚 ) , 以 乙睛一 1% 冰醋酸水溶液 ( 39 : 61 )为流动相 ,流速为 0 . s mL ·而 n 一 ` ,检测波长为 3 17 nl , 分别测定 20 个华细辛样
品中马兜铃酸 A 的含量 。 结果 高效液相色谱法的回收率为 98 . 9% , Rs l) 为 2 . 1% , 标准曲线回归方程为 y 二 .2 40 x 十 0 . 267 ,
在 5 . 2 一 68 ng 内呈良好线性关 系。 结论 华细辛中马兜铃酸 A 含量在 6 . 8 一 45 . 4 滩 · g 一 ` 。
关键词 :华细辛 ; 马兜铃酸 ; 高效液相色谱法
中图分类号 :咫斜 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1 一公均4 ( 2X() 5 ) 20 一 1579 一 02
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. 〕, 汉城 细辛 ( A . s icb o ha i iM q . v ar . , eo 诚sen
Nak ia )或华细辛 ( A . s ic bo记 11 M iq . )的干燥全草 [` l 。
对于细辛中是否含有马兜铃酸 , 曾采用灵敏度较低
的薄层色谱等方法 , 得出了北细辛中不含马兜铃酸
A 的结论图 。 采用更灵敏的高效液相色谱方法检测
细辛中马兜铃酸 A 的研究结果表明 , 细辛中含有微
量的肾毒性成分马兜铃酸 A〔’ 〕。 我国已经批准的处
方中含有细辛的中药有 176 种 [’] 。 因此 ,有必要研
究细辛中马兜铃酸 A 的含量 , 为含细辛中药的安全
性问题提供基础资料 。
1 仪器与试药
1
.
1 仪器
A igl
e in H o 高效液相色谱仪 , 配置四元泵 、 二
极管阵列检测器 、 自动进样器 、 在线真空脱气机 、柱
温箱 , 配置 HP Che ms at it on 色谱工作站 ; iH act hi U -
3 01 0 紫外一可见光谱仪 ; M e ul e r olT e d o AG 135 电子天
平 。
1
.
2 药品与试剂
马兜铃酸 A 对照品 (中国药品生物制品检定
作者简介 :高钧 , 男 ,博士 ,高级工程师 e1T / axF : 〔胆 2 ) 267 3 65 3
蔽噩砰骊孺酒元下而万靡丽福湃而丽
所 , 批号 : 07 46 ~ 2X() 103 。 纯度为 98 . 7% , 31 7 ln 检
测 ,归一化法 ) 。 乙睛 (色谱纯 ) , 冰醋酸 (分析纯 ) ,水
(纯化水 ) 。
华细辛 ,产于陕西省商洛市 , 经天津天士力集团
有限公司现代中药研究所高钧博士鉴定为 击a ~
s众bo 诚1 M i q . 。
2 色谱条件
色谱柱为 场 len t 而ht ax sB 一 1C 8柱 (4 . 6 ~ x 250
~
,
5脚 ) ;以乙睛一1% 冰醋酸水溶液 ( 39 : 61 )为流动
相 ;流速为 0 . s mL ·而 n 一 ’ ;检测波长为 3 17 ln 。 马兜
铃酸 A 的保留时间约为 36 色谱图见图 1。lcn
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图 1 马兜铃酸 A 对照 品 (A )和华细辛药材样品色谱图 ( B )
l 一 马兜铃酸 A
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.
9 %
,
B S D 为 2 . 1% 。 回收率实验结果见表 1。
表 1 回收率实验结果
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取样量 原有量 加人量 回收率 平均回收率 咫 D
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.3 8 样品含量测定
分别取各华细辛样品粉末制备供试品溶液 ,取
20 匹 注人高效液相色谱仪分析 , 以外标法计算马兜
铃酸 A 含量 ,结果见表 2 。
表 2 华细辛药材中马兜铃酸 A 含量测定结果
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3 方 法
3
.
1 检测波长的确定
配制马兜铃酸 A 对照品甲醇溶液 ,在 20 一 4X()
mn 波长范围内扫描 。 扫描结果表明 ,在 2 5 0 , 31 7 和
38 8 lun 有最大吸收 。 高效液相色谱实验结果表明 ,
在 250 lun 处有较高吸收强度 , 但有较强 干扰 。 在
31 7 和 38 ln 处干扰均较弱 , 3 17 ln 灵敏度较高 ,决
定选择 3 17 ln 为检测波长 。
.3 2 溶液的制备
.3 2
.
1 对照品溶液的制备 取马兜铃酸 A 对照品
适量 ,精密称定 , 用 甲醇溶解并定容 ,制成质量浓度
为 0 . 05 25 g’ L 一 ’ 的对照品溶液
。
3
.
2
.
2 供试品溶液的制备 取华细辛药材粉末约
1
.
5 9 ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加人甲醇 20
mL
,精密称定 ,超声提取 30 而 n ,放置至室温 ,补足损
失的甲醇量 。 取上清液 , 0 . 45 脚微孔滤膜过滤 , 取
续滤液 , 即得 。
.3 3 检出限的确定
取马兜铃酸 A 对照品溶液适量 , 注人高效液相
色谱仪分析 ,使马兜铃酸 A 对照品峰高约为噪音的
2 倍 , 以此计算检出限为 1 . 7 gn 。
.3 4 标准曲线的绘制
分别精密吸取质量浓度为 0 . 05 25 9
·
L 一 `的马
兜铃酸 A 对照品溶液 1 . 0 , 3 . 0 , 5 . 0 , 7 . 0 , 9 . 0 , n . 0 ,
13
.
0 沙 ,注人高效液相色谱仪分析 。 以进样量为横
坐标 , 以峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 。 马兜铃酸
A 在 5 . 2 一 68 gn 内 , 峰面积与进样量呈 良好线性关
系 ,相关系数为 0 . 卯9 9 ,标准曲线回归方程为 y 二
2
.
4()
劣 + 0
.
2 6 7
。
.3 5 仪器精密度实验
精密吸取质量浓度为 0 . 的5 25 9 · L 一 ’ 的马兜铃
酸 A 对照 品溶液 20 . 0 拜L ,注人高效液相色谱仪分
析 ,连续分析 6 次 ,计算峰面积的 R另D 为 1 . 1% 。
.3 6 方法精密度实验
按 “ 3 . 2 . 2 ”方法平行制备供试品溶液 6 份 , 进样
分析 ,计算含量的 Rs D 为 2 . 0 % 。
.3 7 回收率实验
分别精密吸取质量浓度为 0 . 05 25 9
·
L
一 ’的马
兜铃酸 A 对照品溶液 2 . 0 mL 6 份 、 3 . 0 mL 3 份 ,各置
于锥形瓶中 , 挥干溶剂 。 分别精密称取华细辛药材
粉末 0 . 81 , 0 . 65 , o . 82 mg 各 3 份 ,加人相应锥形瓶
中 ,按照 “ 3 . 2 . 2 ” 方法操作 ,并进样分析 。 加人量分
别相当于华细辛药材中马兜铃酸 A 含量的约 80 % ,
10 % 和 120 % 。 9 个加样回收样品的平均回收率为
·
1 5 80
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批号
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含量石
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细辛药材中只含有微量马兜铃酸 A , 必须采用
灵敏度高的方法才能检测到 。 文献川中曾采用薄层
色谱法 ,没有检测到马兜铃酸 A ,可能是由于灵敏度
较低的缘故 。 为了提高灵敏度 , 采用 吸光度较高的
波长是有利的 , 马兜铃酸 A 在紫外区的 3个吸收峰 ,
以 25 0 ln 为最灵敏 , 但是却存在较大的干扰 , 本实
验兼顾灵敏度和专属性 ,选用 31 7 ln 为检测波长 。
检测微量成分 , 以使用合适的前处理方法富集
目标成分比较有利 。 本实验试图使用普通液液萃取
方法 、 固相萃取方法 ,但效果都不理想 。 最后采用 甲
醇提取后 ,直接进样分析的方法 , 马兜铃酸 A 与相
邻杂质实现了较好的分离 。
参考文献
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的含量〔J〕. 中南药学 , 2印 3 , 1 ( 3) : 165 .
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志 , 2仪Q ,刀 ( 10) 沼田 .
(收稿 日期 : 人刃5一03 一 )
中国药学杂志 么力 5 年 10 月第 40 卷第 20 期