全 文 ：
菌物学报
jwxt@im.ac.cn 22 November 2016, 35(11): 1281‐1302
Http://journals.im.ac.cn Mycosystema ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q
Tel: +86‐10‐64807521 Copyright © 2016 Institute of Microbiology, CAS. All rights reserved.
综述 Review DOI: 10.13346/j.mycosystema.160008
基金项目：国家自然科学基金（31572180）
Supported by the National Natural Science Foundation China (31572180).
*Corresponding author. E‐mail: xkxing2009@hotmail.com; sxguo@implad.ac.cn
Received: 2016‐01‐06, accepted: 2016‐02‐19
蜜环菌生物种及鉴定方法研究进展
门金鑫 邢晓科* 郭顺星*
中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所 北京 100193
摘 要：蜜环菌属真菌是一类重要的大型真菌，在全世界范围广泛分布。该属中有些种是重要的林木病原菌，有些种则
具有很高的食药用价值。由于蜜环菌属真菌形态差异并不明显，缺乏分类特征，该属的分类和鉴定一直是大型真菌的研
究热点。自从生物种的概念提出之后，蜜环菌的分类鉴定取得了突破性的进展，目前全球范围内已报道的蜜环菌生物种
近 40 种；而对蜜环菌生物种的鉴定方法则包括了最初的形态学鉴定以及近些年发展起来的分子生物学鉴定方法。本文对
当前世界范围内已经鉴定的蜜环菌生物种进行了梳理，并对蜜环菌生物种的鉴定方法的研究进展进行了综述，旨在为蜜
环菌的研究提供参考。
关键词：蜜环菌属，分类，交配实验，分子生物学
Biological species and identification methods of the genus Armillaria
(Agaricales, Basidiomycota): a review
MEN Jin‐Xin XING Xiao‐Ke* GUO Shun‐Xing*
Institute of Medicinal Plant Development, Peking Union Medical College, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100193, China
Abstract: The Armillaria species are one of the most important macrofungi with world widely distribution. Some species are
important root rot pathogens of forest, and some species are of high nutritional and medicinal value. For the lack of similar
morphological and classification characteristics, the classification and identification of Armillaria are always a research hotspot.
A significant progress on the classification and identification of Armillaria was achieved since the concept of biological species
was put forward. At present, there were around 40 biological species have been reported within global range; the identification
methods including the original morphological identification and molecular biology identification which developed in recent years.
The aim of this review is to summarize the identified Armillaria biological species and the identification methods, and to provide
a reference for the research of Armillaria.
Key words: Armillaria, classification, mating test, molecular biology
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 22, 2016 Vol. 35 No. 11
http://journals‐myco.im.ac.cn
1282
蜜环菌属 Armillaria (Fr.) Staude 是担子菌门
Basidiomycota，伞菌目 Agaricales，泡头菌科
Physalacriaceae 中一个非常重要的属，在欧洲、亚
洲、非洲、北美等地都广泛分布。该属真菌具有高
度分化的根状菌索，既能营寄生生活，又能营共生
和腐生生活；有些种是严重的林木病原菌（Sinclair
et al. 1987；戴玉成 2012），有些种可与天麻、猪
苓共生，有些种则具有重要的食药用价值（Dai et al.
2009）。由于蜜环菌属真菌的个体发育和担子果外
部形态变化多样，因而一直以来是大型真菌的研究
热点之一。
由于蜜环菌属的形态特殊性，该属的分类鉴定
一直是困扰真菌分类学家和植物病理学家的难题。
直到 20 世纪 70 年代，蜜环菌四极性的性别系统
（Hintikka 1973）发现后，可以采用交配实验研究
该属的互交不育性，来确定蜜环菌的互交不育群，
即生物种（biological species）。生物种概念的提
出，使得蜜环菌属的分类鉴定取得了长足的进展，
该属的分类鉴定已逐渐清晰。如以前将所有具有菌
环的种都归至模式种 Armillaria mellea (Vahl) P.
Kumm.，后来的研究就发现这些菌株中存在许多生
物种，A. mellea 实际上是一个复合种。之后，人
们采用生物种的概念对许多过去难以鉴定的蜜环
菌种类进行了鉴定梳理，世界各洲不断有蜜环菌的
生物种鉴定的报道。
无疑，性亲和性试验的成功运用在蜜环菌的分
类鉴定过程中具有里程碑式的意义，但该方法也有
其自身的局限性。随着分子生物学技术的发展，从
基因水平上对蜜环菌属进行分类鉴定业已显示出
其优越性。单基因序列的比对，如 ITS、IGS、EF‐1α
等，以及多序列结合 RFLP 等技术的应用，使得过
去仅通过性亲和性试验难以区分的近缘种类或未
知种的鉴定成为可能。
本文对当前已报道的明确的蜜环菌属的生物
种进行了梳理，并对蜜环菌从传统的形态学鉴定到
最近的分子生物学技术鉴定方法的研究进展进行
了综述，以期为从事蜜环菌属研究和开发的各位同
仁提供理论借鉴。
1 已鉴定的蜜环菌属生物种
目前全世界己鉴定的蜜环菌生物种近 40 种。
本文只对已有拉丁名称、进行过交配实验以及形态
描述的生物种进行了归纳，对还未有规范命名、形
态特征等具体描述，只是通过互交不育实验鉴定为
新生物种的种类并未包含。详细生物种的描述见
表 1。
除了表 1 中所列的生物种以外，还有一些文献
报道的生物种，如中国生物种 CBS C、CBS F、CBS G、
CBS H（秦国夫等 2000），CBS J、CBS L、CBS N、
CBS O（赵俊等 2005），日本生物种 Nag. E
（Nagasawa et al. 1991），伊朗的两个菌株 IISG 5、
IISG 6（Asef et al. 2003），非洲的两个生物种
Armillaria sp.（肯尼亚高原 5 个菌株）、Armillaria sp.
（肯尼亚一个菌株）（Otieno & Termorshuizen
2003；Mwenje et al. 2006；Mwangi et al. 1989）都
是只通过交配测验鉴定为新的生物种，但是并没有
命名和具体的形态特征描述。因此，本文未将其列
入表内。
在中国的这些生物种中，秦国夫（2002a）将
CBS C 鉴定为 A. luteopileata G.F. Qin & J. Zhao（黄
盖蜜环菌），之后孙立夫（2007）采用过该种名。
而 CBS G 是典型的同宗配合种，秦国夫（2002a）
鉴定为 A. korhonenii G.F. Qin & Y.C. Dai（科赫宁蜜
环菌），一直有报道认为 CBS G 可能是一个复合类
群（王汉臣 2010；Qin et al. 2007；秦国夫 2002b）。
以上这两个种名在 Index fungorum中还检索不到，
因此，关于它们准确的分类地位还有待进一步确证。
2 蜜环菌生物种鉴定方法的研究进展
2.1 形态学鉴定方法
在 20 世纪 70 年代之前，人们并不了解蜜环菌
的性及生活史（Raper 1966）。蜜环菌的生活周期
续
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19
94
门金鑫 等 /蜜环菌生物种及鉴定方法研究进展
菌物学报
1293
和生殖阶段是很复杂的，与其他高等担子菌不同的
是在营养菌丝中双核体阶段非常短暂，主要是以单
核的双倍体度过其营养阶段。所以在很长一段时间
内，用于鉴定真菌种的都是形态学特征包括大小、
形状、孢子颜色、菌丝或子实体的结构等（Gunnell
& Gubler 1992）。Staude（1857）首先建立了蜜环
菌属 Armillaria，之后通过形态学方法陆续鉴定了
很多个种，但后来大多数被证实不属于蜜环菌属。
由于蜜环菌具有复杂的生活周期和生殖阶段，
并且很多不同种类的菌株形态学上非常相近或者
种内个体形态特征变化多样，很多种类都被错误地
鉴定为蜜环菌属的一种，导致后来蜜环菌的形态鉴
定有很大的困难和局限性。然而，自从 Hintikka
（ 1973）发现蜜环菌的四极性交配系统后，
Korhonen（1978）和 Anderson & Ullrich（1979）鉴
定了欧洲和北美的生物种，此后，生物种的概念开
始被大家接受，基于交配型的鉴定方法也开始成为
鉴定蜜环菌生物种的通用方法。生物种的鉴定方法
也发生了质的变化，由过去依赖形态学的经典分
类，变成以生物种为基础的分类。
2.2 性亲和性交配的鉴定方法
Hintikka 在 1973 年研究蜜环菌极性时发现，
单孢产生的菌落为白色棉毛状，而从子实体、菌索
及病腐木上分离的菌落为褐色扁平壳状，不交配的
菌株及大多数交配菌株都产生棉毛状菌落，另一些
交配菌株则产生扁平壳状菌落，于是认为产生壳状
菌落的交配组合是亲合性的，而同核体、半亲合、
不亲合的交配才产生棉毛状菌落，提出了蜜环菌具
有四极性性别系统，并提出这种壳状组织是双倍
体。随后，Korhonen & Hintikka（1974）和 Peabody
& Therrien（1978）通过细胞学实验和细胞遗传学
测定都证实了这种交配产生的与子实体分离得到
的相同的菌落是双倍体。Korhonen（1978）通过改
进这种方法鉴定了 5个欧洲生物种，之后 Anderson
& Ullrich（1979）采用 Korhonen（1978）的方法分
析了北美之前通过形态学难以区分的，被认为是一
个大的复合的互交不育群 A. mellea，发现用交配实
验的方法可以将其区分开，为 10 个互交不育群，并
可确定为生物种。生物种是指一个拥有共同基因库的
个体组合，在生物种间很少或根本没有基因交流。
此后，互交不育性实验成为鉴定生物种和划分
不同未知菌株到生物种的通用方法（Kile & Watling
1983，1988；Morrison et al. 1985b；Mohammed et
al. 1994；Cha & Igarashi 1995b；Ota et al. 1998）。
该方法主要是根据单×单交配或单×双交配技术，用
代表不同生物种的单倍体测试菌株（tester）同未
知种的单倍体菌株进行交配，交配反应按菌丝的形
态变化进行判断。如果不是属于同一生物种的，则
对峙的两个单倍体菌落的菌丝总体上是气生菌丝
浓密，且两菌落相接触的地方形成种间的黑色的拮
抗线，菌落间没有透明带（ClearZone，CZ），而且
种间交配的黑线用 L‐DOPA 染色后不能用脂酶褪色
（秦国夫 2002a）。
Cha et al.（1992）通过互交不育群鉴定了 2个
日本的生物种 A．ostoyae 和 A．bulbosa。Kile（1981）
鉴定了 A. luteobubalina，之后 Kile & Watling（1983，
1988）通过交配实验陆续鉴定了澳大利亚的 4 个蜜
环菌生物种 A. hinnulea、A. novae‐zelandiae、A.
fumosa和 A. pallidula。互交不育实验也用来鉴定了
非洲的生物种（Abomo‐Ndongo et al. 1997；Coetzee
et al. 2000）以及中国的生物种 CBS C、CBS F、CBS G、
CBS H（秦国夫等 2000）和 CBS J、CBS L、CBS N、
CBS O（赵俊等 2005）。
蜜环菌生物种的概念正是基于性亲和性交配
的鉴定方法而提出的，由此可见该方法在蜜环菌鉴
定发展历程中的重要性。然而，该技术必须要经过
单孢子分离和单孢菌株的交配实验，蜜环菌子实体
和单核菌丝的获得难度大、周期长，而且判断互交
可育性也要有一定的经验；交配实验准确度高，但
却是一个所需时间长且不易掌握的技术。
2.3 同工酶技术
同工酶电泳技术用于蜜环菌的鉴定始于 20 世
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 22, 2016 Vol. 35 No. 11
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纪 80 年代，研究者们先后采用了酯酶同工酶（Lin
et al．1989；Mwangi et al. 1989）、多酚氧化酶同
工酶（Morrison et al. 1989，2011）、果胶酯酶同工
酶（Mwenje et al. 2006；Mwenje & Ride 1996，1997；
Wahlström et al. 1991）、谷氨酸脱氢酶同工酶
（Matsushita et al. 1996；Agustian et al. 1994）等
对蜜环菌进行了研究。Morrison et al.（1989）采
用同工酶电泳技术分析了不列颠哥伦比亚 6 个生
物种的酯酶同工酶酶谱和多酚氧化酶同工酶酶谱，
表明同工酶谱可用于生物种内亚群的鉴定及鉴别
相关的生物种。Wahlström et al.（1991）采用果胶
酯酶和多聚半乳糖醛酸酶同工酶对欧洲的 5 个生
物种进行了研究，结果表明，根据已知欧洲种的同
工酶谱，可以将任何一株未知的蜜环菌测定其同工
酶谱后鉴定到某一生物种，果胶酯酶的同工酶谱还
表明 A. ostoyae 和 A. borealis 遗传关系比较密切。
Matsushita et al.（1996）用 25 个酶检测了日本 6
个蜜环菌生物种 Nag. A、Nag. B、Nag. C、Nag. D、
Nag. E 和 Nag. AM，结果发现通过谷氨酸脱氢酶酶
谱可以鉴定出 Nag. B、Nag. E 和 Nag. AM，之后再
通过乳酸脱氢酶酶谱可以鉴别剩下的生物种，说明
通过谷氨酸脱氢酶和乳酸脱氢酶结合的同工酶谱
能够区分日本的 6 个生物种。
2.4 分子生物学鉴定方法
随着分子生物学技术的不断发展，从基因水平
上对蜜环菌进行鉴定也成为必然。与传统的形态学
鉴定方法相比，分子生物学技术更具有灵敏度高、
准确度高、易操作等优点，尤其是多基因序列的联
合应用，更能有效地区分一些近缘种或复合种。当
前，分子生物学技术已在蜜环菌生物种鉴定、系统
发育分析、分子系统地理学等方面得到了很好的应
用。因此，我们对近年来应用到蜜环菌生物种鉴定
中的分子生物学方法进行了总结。
2.4.1 限制性片段长度多态性技术：即 RFLP
（restriction fragment length polymorphism）技术，
在 20 世纪 80 年代之后开始广泛应用于蜜环菌的
鉴定中。
起初的研究主要针对的是蜜环菌线粒体 DNA
的多态性。Jahnke et al.（1987）用直接酶切线粒
体基因组产生的 RFLP 方法，发现 A. mellea、A.
gallica 和 A. ostoyae 的线粒体基因组大小约为
90–95kb， 种 内 RFLP 图 谱 相 似 性 较 大 ， 为
67%–100%，而种间的相似性则较小。Anderson et al.
（1987）对 A. mellea 进行了 RFLP 分析，采用完整
的线粒体 DNA 做探针，也发现了种内 RFLP 相似而
种间 RFLP 不同。Smith & Anderson（1989）用 RFLP
分析了北美的 A. ostoyae、A. sinapina、A. gallica、
A. gemina、A. calvescens、A. mellea 和 A. nabsnona，
他们用完整的线粒体基因组或亚克隆的线粒体片
段作探针，组合 4 种限制性内切酶，估计奥氏蜜环
菌的线粒体基因组大小约为 140kb，同样证明了蜜
环菌种内具有较大的相似性，而种间的相似性则
很小。
随后，针对蜜环菌核基因组 DNA 的多态性也
始有报道。Schulze er al.（1995）用 Sacchaeomyces
carlsbergensis 的 rDNA 作探针，分析了欧洲蜜环菌的
5个生物种，采用 4种限制性内切酶 BglⅡ与 EcoRⅠ、
BamHⅠ或 Hind Ⅲ任意一个结合的方法，可以区
分 5 个生物种。之后，Schulze et al.（1997）用 Ava
Ⅱ内切酶分析了 A. ostoyae 的 20 个菌株，再结合
RAPD 分析的结果，可将他们划分为 5 个类型。
蜜环菌核基因组 DNA 的多态性适用于研究蜜
环菌的分类学、系统发育和鉴定。这些研究为后来
的 PCR 扩增 rDNA 区，利用其 RFLP 多态性进行生
物种鉴定打下了理论和方法基础。然而 RFLP 技术
需要分离大量的纯的 DNA 进行酶切，以及需要进
行放射性探针标记。
2.4.2 随机扩增多态性 DNA 技术：RAPD（random
amplified polymorphic DNA）技术是 1990 年由
Williams et al.（1990）和 Welsh & Mcclelland（1990）
两个研究小组几乎同时建立起来的技术。
Guillaumin et al.（1996）用 RAPD 方法分析了
门金鑫 等 /蜜环菌生物种及鉴定方法研究进展
菌物学报
1295
A. gallica、A. ostoyae 和 A. cepistipes 的 36 个遗传
体的 73 个菌株，结果表明，用 RAPD 和交配型分
析，只用 3 个随机引物就可以区分所有的 36 个遗
传体，因此认为 RAPD 技术在鉴定遗传体方面同体
细胞非亲和性实验一样有效。Schulze et al.（1997）
用 RAPD 技术分析了奥氏蜜环菌菌株，用 20 个随
机引物得到的多态性片段可以鉴定所分析的菌株。
贺伟和秦国夫（1996）用 RAPD 技术分析了中国的
5个蜜环菌菌株与欧洲的菌株，将其分为 4个类群，
同时将 CBS B鉴定为高卢蜜环菌 A. gallica。Ota et al.
（2000）用 9 个随机引物分析了日本和非洲的同
宗配合蜜环菌菌株以及欧洲和北美的异宗配合蜜
环菌狭义种的菌株，结果发现，日本的同宗配合蜜
环菌同非洲菌株属于一个类群，且欧洲和北美分别
是不同的类群。
目前看，RAPD 方法适用于近似种和种水平以
下的 DNA 多态性分析，既可适用于蜜环菌群体遗
传结构的研究，也可用来研究近缘种的系统发育关
系（秦国夫 2002a）。
2.4.3 扩增限制性片段长度多态性技术：即 AFLP
（amplified fragment length polymorphism）方法是
Vos et al.（1995）建立的新的 DNA 指纹分析技术，
广泛用于生物的物种鉴定、基因连锁作图和系统发
育研究。优点是重复性较 RAPD更稳定，多态性更高。
目前在蜜环菌鉴定的研究中应用的并不多，
Terashima et al.（2001）分析了奥氏蜜环菌菌株，
结果表明，用改进的 AFLP 方法得到的 DNA 多态性
片段可以鉴定奥氏蜜环菌 A. ostoyae。Kim et al.
（2006）分别用了 rDNA 序列中的 IGS‐1、ITS+5.8S、
nLSU（nuclear large subunit rDNA）和 AFLP 分析了
北美的 10 个蜜环菌生物种，结果表明 rDNA 序列
可以区分除 A. calvescens、A. sinapina、A. gallica
和 A. cepistipes 之外的其他北美生物种，但 AFLP
分析的结果同传统的鉴定方法结果一致，认为
AFLP 可以用于区分北美的生物种。
2.4.4 基于 DNA 序列的测序技术：PCR 技术出现之
后，蜜环菌的鉴定方法有了快速的发展。
Anderson & Stasovski（1992）通过蜜环菌的
rDNA‐ITS 和 IGS1 区进行了研究。该研究用一对引
物 CLR12 和 O‐1（Duchesne & Anderson 1990）扩增
并测序了位于 26S和 5S的 rDNA基因区之间的 IGS1
区，利用 IGS1 序列对欧洲和北美的各生物种进行
了分子系统发育分析；通过 rDNA‐ITS 的序列分析
确定了 A. mellea、A. tabescens 与 A. sinapina 比其
他的更相近。
此后关于蜜环菌 rDNA区 ITS和 IGS1区域的研
究不断发展。Coetaee & Wingfield（2000）研究了
蜜环菌狭义种的 ITS 和 IGS 区域，表明 A. mellea 具
有高度的多样性，通过地理起源将其分为 4 个隔离
群：亚洲、北美西部、北美东部和欧洲。Coetzee &
Wingfield（2001）通过 ITS1、ITS2 和 rRNA 编码的
5.8S 基因区域研究了澳大利亚和新西兰生物种的
系统发育关系。
由于 ITS 和 IGS 区域不能很好地区分 A.
cepistipes 和 A. gallica，因为二者的相似度很高，
所以近些年一个新的基因区域 EF‐1α（elongation
factor‐1 alpha）延伸因子也被很多学者应用在了蜜
环菌的鉴定中（Antonín et al. 2009；Hasegawa et al.
2010；Maphosa et al. 2006；Mulholland et al. 2012；
Ota et al. 2011；Ross‐Davis et al. 2012；Tsykun et al.
2012）。Maphosa et al．（2006）首先将其运用到了
蜜环菌的鉴定中，发现 EF‐1α 延伸因子可以区分大
部分蜜环菌生物种。Hasegawa et al．（2010）用 ITS、
IGS 及 EF‐1α 延长因子综合分析了日本的 8 个生物
种： A. mellea、 A. ostoyae、 A. nabsnona、 A.
cepistipes、A. gallica、A. sinapina、A. tabescens 和
Nag. E，发现 ITS 和 IGS 的系统发育分析可以鉴定
A. mellea、A. ostoyae、A. nabsnona、A. tabescens
和 Nag. E，但是鉴定不出 A. cepistipes、A. gallica
和 A. sinapina；然而 EF‐1α 的系统发育分析可以准
确鉴定这 8 个种，表明通过 EF‐1α 延长因子是最适
合鉴定日本蜜环菌生物种的方法。
ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q Mycosystema November 22, 2016 Vol. 35 No. 11
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1296
Brazee et al.（2011）用 EF‐1α、rpb2（RNA
polymerase II）和 nLSU 分析了北美的 6 个生物种：
A. calvescens、A. gallica、A. gemina、A. mellea、
A. sinapina、A. solidipes（即 A. ostoyae），结果表
明只有 EF‐1α 可以区分 A. calvescens 和 A. gallica。
Brazee et al.（2012）采用 EF‐1α 延长因子将 NABS X
鉴定为 A. altimontana。Ross‐Davis et al.（2012）分
析了北美的 10 个生物种，发现 EF‐1α 可以区分除
了 A. gallica 和 NABS X 以外的其他生物种。说明
EF‐1α 虽然可以鉴定大部分的蜜环菌生物种，但是
却仍有相近的种只用 EF‐1α 是区分不开的。
2.4.5 多序列结合 RFLP：Harrington & Wingfield
（1995）改进了 Anderson & Stasovski（1992）的
方法，将 DNA 序列与 RFLP 相结合，这又是蜜环菌
分子鉴定方法的一大进展。
DNA序列如 ITS和 IGS区域不能很好地区别开
A. cepistipes 和 A. gallica，EF‐1α 则可以区分绝大多
数蜜环菌生物种，然而还是有个别的生物种如
A. gallica 和 NABS X 区分不开。而分子标记技术也
存在同样的问题，都有着一定的局限性，说明采用
单一方法不能够快速准确地鉴定蜜环菌生物种，然
而将 DNA 序列与分子标记有机结合起来加以应
用，蜜环菌的鉴定就变得简单快速了。
Harrington & Wingfield（1995）采用 PCR‐RFLP
扩增蜜环菌 IGS 区域的方法，通过 5 个限制酶
AluⅠ、NdeⅠ、HindⅡ、BsmⅠ、ThaⅠ的结合能
够区分除了 A. calvescens 和 A. gallica 以外的所有
北美生物种，A. calvescens 与 A. gallica 非常相近。
随后，PCR‐RFLP 迅速地应用到蜜环菌的鉴定
中去（Guido et al. 2005；Coetzee et al. 2005；
Gezahgne et al. 2004；秦国夫 2002b；Kim & Vidaver
2000；Sierra et al. 1999；Banik & Burdsall 1998；
Terashima et al. 1998；White & Morrison 1998；
Chillali et al. 1997；Banik et al. 1996；Volk et al.
1996），他们采用 PCR‐RFLP 的方法，构建 RFLP 图
谱进行生物种的鉴定。随着一些新 RFLP 图谱类型
的构建，使得全球蜜环菌的 PCR‐RFLP 片段逐渐丰
富，能够得以进行比较，从而实现蜜环菌生物种和
遗传多样性的鉴定。
Volk et al．（1996）采用 Harrington & Wingfield
（1995）所用的 PCR‐RFLP 的技术，鉴定了 A.
nabsnona，证明了之前描述的 NABS IX 与形态种
A. nabsnona 一致。Coetzee et al．（2000）通过形
态和 IGS1区的 PCR‐RFLP方法描述鉴定了南非的蜜
环菌 A. fuscipe。Banik et al．（1996）通过 IGS1 区
的 PCR‐RFLP 鉴定了北美的 8 个生物种，认为
Harrington & Wingfield（1995）的基于 PCR 的方法
在一个有限的地理区域中鉴定菌株是非常有用的，
它比单双交配实验更快速，结果也不会有模糊不清
的。之后 Banik & Burdsall（1998）通过 IGS1 区的
PCR‐RFLP 方法研究了 A. cepistipes、A. sinapina 与
NABS X、NABS XI 的亲和性，证明了 NABS X、NABS
XI 与 A. cepistipes、A. sinapina 不同，是新的生
物种。
Chillali et al.（1998）用 ITS‐RFLP 来区分欧洲蜜
环菌的 7 个种，他们用 ITS1 和 ITS4 引物扩增了 ITS
区，产物用 EcoRⅠ、CfoⅠ、RsaⅠ、AluⅠ、HinfⅠ、
TaqⅠ和 NdeⅡ酶切消化，结果显示，用 HinfⅠ和
TaqⅠ酶切能将 A. borealis 和 A. ostoyae 与 A.
cepistipes 和 A. gallica 区分开来，NdeⅡ的酶切能
进一步将 A. borealis 和 A. ostoyae 区分开。但没有
一个酶能够区分所有的 7 个种。总体上，A. mellea、
A. tabescens和 A. ectypa能够被大多数的内切酶所
区分。
Tsykun et al.（2013）选择了 3 个 DNA 区域：
核糖体 IGS‐1、ITS 和 EF‐1α 基因，分析了欧洲的 6
个种：A. cepistipes、A. ostoyae、A. gallica、A.
borealis、A. mellea、A. tabescens。结果表明：A.
tabescens 和 A. mellea 的 ITS 序列具有很高的相似
性（91%–98%）。在 ITS 和 IGS 这两个核糖体非编码
DNA 区域中，A. cepistipes 与 A. gallica 有高达 99%
的相似性，A. ostoyae 和 A. borealis 有 97%的相似
门金鑫 等 /蜜环菌生物种及鉴定方法研究进展
菌物学报
1297
性。而且 EF‐1α 区域不太能准确区分 A. borealis 和
A. ostoyae。但是在 PCR 的基础上又进行了 RFLP 分
析，发现通过一个 ITS、IGS、EF‐1α 与 RFLP 结合的
方法可以区分所有的蜜环菌。
以上综述了当前蜜环菌生物种的鉴定方法，从
传统的形态学方法到最新的分子生物学方法。形态
学作为传统经典的鉴定方法，从子实体、孢子、菌
索等方面加以鉴定，有着其独特的优越性，但是这
就需要有子实体和菌索，才可进行形态学鉴定，无
形中就有了一定的限制；而分子生物学方法仅需提
取 DNA 就能够快速高效地从系统发育角度了解未
知种类蜜环菌的分类地位。由此可见，将形态学方
法与分子生物学方法进行有机结合，就能有效地对
未知蜜环菌种类加以鉴定。
3 展望
近些年来，蜜环菌生物种的鉴定已取得了长足
的进步，尤其是在欧洲、北美、日本等地，蜜环菌
的生物种研究比较深入，大部分生物种都有具体的
形态特征和标准的分类学名称。而中国、非洲等地
有关蜜环菌生物种的研究也已取得了较大进展
（Machingambi 2013；Abomo‐Ndongo & Guillaumin
1997；Coetzee et al. 2005；李向前等 1998；王岚
和杨祝良 2003；赵俊等 2005），但仍然还有许多
工作需要完善。有部分生物种仅仅是通过互交不育
实验确定为新的生物种，但是并没有具体描述，如
Asef et al.（2003）通过互交不育实验鉴定了伊朗
的两个新生物种 IISG5 和 IISG6，但是并没有分类学
命名，也没有形态学的描述。Coetzee et al.（2015）
研究了中国蜜环菌的系统发育关系，也只是发现
CBS F 应该不是之前认为的 A. singula，表明目前中
国的蜜环菌生物种的研究相对还是太少。由于蜜环
菌属真菌形态解剖学特征的研究不够深入，有关蜜
环菌的鉴定仅见零星报道，目前还无系统的工作和专
著。因此，今后还应加强对一些未知种或疑似新生物
种的蜜环菌的研究，相信未来将会有更多的蜜环菌生
物种被报道，蜜环菌的分类鉴定也会更加完善。
对于蜜环菌的鉴定方法，在已有的文献报道
中，只采用 ITS、IGS、EF‐1α 序列的鉴定方法，不
能准确鉴定到每一个种。RFLP、RAPD 等酶切的方
法，也只能准确鉴定部分蜜环菌生物种。现在应用
最多的就是如 ITS、IGS、EF‐1α 等 DNA 序列和酶切
的方法相结合，恰巧可以互补，把蜜环菌的生物种
都准确鉴定。IGS 比 ITS 的多态性要高，所以采用
IGS‐RFLP 方法的更多，而 EF‐1α 序列也被越来越多
的人用于蜜环菌的鉴定。但是也有很多问题值得探
讨。将 DNA 序列与酶切的方法相结合，现在能够
准确鉴定的菌株多数为欧洲、北美等地及世界范围
内共有的生物种，而对于如中国、非洲等地的包括
未命名生物种的鉴定是否能够准确地区分开，现在
并没有很多的研究报道。中国的蜜环菌遗传多样性
较欧洲和北美都高，蜜环菌属的 RFLP 图谱类型也
非常丰富（秦国夫等 2001；秦国夫 2002b），因此
对中国一些未知的蜜环菌生物种分子生物学鉴定
方法需要做更多的探索。
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