全 文 ：基金项目:国家自然科学基金资助项目(30672531)
作者简介:张海娟 ,女 , 博士研究生　　＊通讯作者:娄红祥 ,男 , 教授 ,博士生导师　　Tel/Fax:(0531)88382019　　E-mail:louhongxiang@
sdu.edu.cn
·论　著·
云南肺衣中酚类化合物的研究
张海娟 1 ,孙丽彦 2 ,陈聪豪1 ,娄红祥 1＊(1.山东大学药学院 ,济南 250012;2.泰山医学院药学院 ,山东 泰安 271000 )
摘要:目的　研究地衣植物云南肺衣(LobariayunnanensisYoshim)的化学成分。方法　利用硅胶柱色谱 、SephadexLH-20凝
胶柱色谱和高效液相等色谱技术分离纯化化学成分 ,通过理化性质和波谱数据确证其结构。结果 　从地衣植物中分离得到
5个酚类化合物:苔黑酚羧酸(orselinicacid, Ⅰ )、苔黑酚羧酸乙酯(ethylorselinate, Ⅱ)、苔黑酚(3, 5-dihydroxytoluene, Ⅲ)、茶
渍衣酸(lecanoricacid, Ⅳ)和苔色酸(gyrophoricacid, Ⅴ)。结论　5个化合物均为首次从该植物中分得。
关键词:云南肺衣;酚类化合物;地衣
中图分类号:R284.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2008)07-0489-03
StudyonPhenolicConstituentsfromLichenLobariayunnanensisYoshim
ZHANGHai-juan1 , SUNLi-yan2 , CHENCong-hao1 , LOUHong-xiang1＊ (1.SchoolofPharmaceuticalSciences, Shandong
University, Jinan250012, China;2.SchoolofPharmaceuticalSciences, TaishanMedicalCollege, Tai′an271000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToinvestigatethechemicalconstituentsofChineselichenLobariayunnanensis.METHODS　Various
chromatographictechniqueswereusedtoisolateandpurifytheconstituentsandtheirstructureswereelucidatedbymeansofspectralev-
idencetogetherwithphysiochemicalproperties.RESULTS　Fivecompoundswereisolatedfromtheplantandidentifiedasorsellinic
acid(Ⅰ ), ethylorsellinate(Ⅱ ), 3, 5-dihydroxytoluene(Ⅲ ) , lecanoricacid(Ⅳ )andgyrophoricacid(Ⅴ ), respective-
ly.CONCLUSION　Althesecompoundswereisolatedfromtheplantforthefirsttime.
KEYWORDS:Lobariayunnanensis;phenols;lichen
　　地衣(lichen)是植物界一个特殊的类群 ,是真
菌(fungi)和藻类 (algae)高度结合的共生复合体 。
含有松萝酸 、珠光酸 、苔色酸等多种独特的次生代谢
产物 ,具有多方面的生物活性 ,可以用作香料 、药材
等 [ 1] 。近几年的文献 [ 2-4]报道 ,从地衣植物中分离
得到了许多具有活性的新化合物或新天然产物 ,而
国内对地衣方面的研究还很少 ,同时对地衣种的鉴
定方面还缺少很多的数据 。为了从地衣植物中发现
具有较好生物活性的天然产物 ,我们展开了对地衣
植物化学成分的研究 。本实验对云南肺衣中的酚类
成分进行了研究 ,采用各种分离方法包括硅胶柱色
谱 ,凝胶柱色谱等色谱分离方法 ,从中分得 5个酚类
化合物 ,经光谱数据分析鉴定它们的结构分别为:苔
黑酚羧酸(orselinicacid, Ⅰ )、苔黑酚羧酸乙酯(eth-
ylorselinate, Ⅱ )、苔黑酚 (3, 5-dihydroxytoluene,
Ⅲ )、茶渍衣酸(lecanoricacid, Ⅳ)和苔色酸 (gyro-
phoricacid, Ⅴ)。这 5个化合物均为首次从本植物
中分离得到。
1　材料与仪器
1.1　材料
云南肺衣(LobariayunnanensisYoshim)于 2004
年 9月采自云南省丽江老君山(Alt, 3 200 m),由泰
山医学院药学院孙丽彦老师鉴定 。标本保存在山东
大学药学院天然药物化学教研室 (No.SDU
04092)。苔黑酚标准品(常州长益化工有限公司 ,
分析纯 ,含量 96%)。
1.2　仪器
紫外分光光度计 (上海精科实业有限公司 ,型
号 WFH-203);高效液相仪器(Agilent1100和 Wa-
ters600);纯水仪(Milipore纯水仪);NMR由山东
大学药学院中心实验室代为测定 (BrukerAvance
600型核磁共振波谱仪)。薄层色谱硅胶 GF254和柱
色谱硅胶 (青岛海洋化工厂);SephadexLH-20
(PharmaciaBioteck);半制备高效液相柱(YMC-Pack
·489·中国药学杂志 2008年 4月第 43卷第 7期　　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2008 April, Vol.43 No.7
ODS-A);溶剂为分析纯和色谱纯。
2　提取分离
地衣植物 (285 g)粉碎 ,用体积分数为 95%工
业乙醇加热回流提取 3次 ,提取液减压浓缩得乙醇
浸膏(56.0 g)。浸膏以水溶 ,然后分别用乙醚和正
丁醇萃取 ,乙醚层浓缩得浸膏 9.0 g。乙醚浸膏(9.0
g)以 200 ～ 300目硅胶拌样 ,上硅胶(200 ～ 300目)
柱 ,分别以 PE-Acetone系统(PE-Acetone-96∶4 ～ 7∶
3)、CHCl3-MeOH系统(CHCl3 -MeOH =9∶1 ～ 0∶1)
梯度展开 ,流份以 TLC检测 ,合并相同流份 ,将其粗
分为 12个组份(C1-1 ～ C1-10)。C1-3结晶 ,重结晶得化
合物 I(0.35 g)。C1-5硅胶柱色谱(200 ～ 300目),
展开剂为石油醚 -丙酮(84∶16),合并其中部分流份 ,
甲醇溶解 ,微孔滤膜过滤 ,过高效液相 ,展开剂为甲
醇 -水(45∶55),得到化合物 I(0.45 g)。将 C1-7抽滤
得到化合物 Ⅲ(0.28 g)。 C1-9经硅胶柱色谱(PE-Ac-
etone=78∶22)得到化合物Ⅳ(0.15 g)。将 C1-11甲醇
溶解 ,抽滤得化合物Ⅴ(0.10 g)。
3　结构鉴定
化合物Ⅰ:白色针晶 (石油醚 /丙酮)。1 H-NMR
[ (CD3)2 CO, 600 MHz] :δ2.52 (3H, s, -Ar-CH3),
6.22 (1H, d, J=2.50 Hz, Ar-H), 6.29(1H, d, J=2.50
Hz, Ar-H), 9.12 (1H, s, Ar-OH), 12.13 (1H, s, Ar-
OH);13C-NMR[ (CD3)2CO, 150 MHz] :δ103.7 (C-
1), 166.1 (C-2), 100.4 (C-3), 162.3 (C-4), 111.0
(C-5), 143.8 (C-6), 23.1(C-7), 173.1 (C-8)。与文
献 [ 5]数据对照基本一致 ,确定其结构为苔黑酚羧酸
(orselinicacid,Ⅰ),其化学名称为 2, 4-二羟基-6-甲基
苯甲酸(2, 4-dihydroxy-6-methylbenzoicacid)。
化合物 Ⅱ :白色针晶(石油醚 /丙酮)。1 H-NMR
[ (CD3 )2 CO, 600 MHz] :δ 1.40 (3H, t,
J=7.10 Hz, OCH2CH3), 2.49 (3H, s, Ar-CH3),
4.40 (2H, q, J=7.10 Hz, OCH2CH3), 6.24 (1H,
d, J=2.40 Hz, Ar-H), 6.29 (1H, d, J=2.40 Hz, Ar-
H), 9.11 (1H, s, Ar-OH), 11.74 (1H, sAr-OH);
13C-NMR[ (CD3)2 CO, 150 MHz] :δ105.4 (C-1),
166.5 (C-2), 101.6 (C-3), 163.2 (C-4), 112.3 (C-
5), 144.5 (C-6), 24.5 (C-7), 172.6 (C-8), 61.9
(C-9), 14.5 (C-10)。与文献 [ 6]数据对照基本一
致 ,确定其结构为苔黑酚羧酸乙酯(ethylorselinate,
Ⅱ ),其化学名称为 2, 4-二羟基 -6-甲基苯甲酸乙酯
(ethyl2, 4-dihydroxy-6-methylbenzoate)。
化合物 Ⅲ:白色粉末 ,与标准品对照 , TLC观察
比移值一致。1 H-NMR [ (CD3)2 CO, 600 MHz] :δ
2.05 (3H, Ar-CH3), 6.18 (3H, Ar-H);13 C-NMR
[ (CD3)2 CO, 150 MHz] :δ158.0 (C-1), 99.5 (C-
2), 158.0 (C-3), 107.3 (C-4), 139.6 (C-5), 107.3
(C-6)。与文献 [ 6]数据对照基本一致 ,确定其结构
为苔黑酚(3, 5-dihydroxytoluene, Ⅲ)。
化合物Ⅳ:白色针晶(石油醚 /丙酮)。 1H-NMR
[ (CD3)2CO, 600 MHz] :δ2.61 (3H, s, H-8), 2.64
(3H, s, H-8′), 6.31 (1H, d, J=2.45 Hz, H-5), 6.40
(1H, d, J=2.06 Hz, H-3), 6.77 (1H, d, J=2.13
Hz, H-5 ), 6.81 (1H, d, J=2.30 Hz, H-3′), 11.14
(1H, s, Ar-OH);13 C-NMR[ (CD3)2CO, 150 MHz] :δ
103.6 (C-1), 143.7 (C-2), 111.7 (C-3), 163.0 (C-
4), 100.6 (C-5), 165.6 (C-6), 169.2 (C-7), 23.2
(C-8), 110.0 (C-1′), 164.3 (C-2′), 108.3 (C-
3′), 154.0 (C-4′), 116.2 (C-5′), 143.5 (C-6′),
172.5 (C-7′), 22.8 (C-8′)。与文献[ 7]数据对照基
本一致 , 确定其结构为茶渍衣酸 (lecanoricacid,
Ⅳ)。其化学名称为 4-(2, 4-二羟基-6-甲基苯甲羧
基)-2-羟基 -6-甲基苯甲酸 [ 4-(2, 4-dihydroxy-6-meth-
ylbenzoyloxy)-2-hydroxy-6-methylbenzoicacid] 。
化合物 Ⅴ:白色粉末。1 H-NMR[ DMSO-d6 , 600
MHz] :δ6.24 (1H, d, J=2.10 Hz, H-3, ), 6.23
(1H, d, J=2.10 Hz, H-5), 6.68 (1H, d, J=1.50
Hz, H-3′), 6.67 (1H, d, J=1.50 Hz, H-5′), 6.63
(1H, d, J=1.98 Hz, H-3″), 6.61 (1H, d, J=1.98
Hz, H-5″), 2.36 ～ 2.38 (9H, m, 3-CH3 ), 10.03
(-OH), 10.32 ( OH), 10.51 ( OH);13 C-NMR
[ (CD3)2CO, 150 MHz] :δ108.7 (C-1), 160.0 (C-
2), 100.6 (C-3), 161.2 (C-4), 110.0 (C-5), 140.3
(C-6), 21.4 (C-7), 167.3 (C-8), 118.2 (C-1′),
156.4 (C-2′), 107.4 (C-3′), 152.3 (C-4′), 114.4
(C-5′), 138.1 (C-6′), 19.5 (C-7′), 165.8 (C-8′),
117.6 (C-1″), 158.8 (C-2″), 107.3 (C-3″), 152.2
(C-4″), 114.5 (C-5″), 139.6 (C-6″), 21.0 (C-7″),
170.6 (C-8″)。与文献 [ 7]数据对照基本一致 ,确定
其结构为苔色酸(gyrophoricacid, Ⅴ)。其化学名称
为 4-[ 4-(2, 4-二羟基-6-甲基苯甲羧基)-2-羟基 -6-甲
基苯甲羧基 ] -2-羟基 -6-甲基苯甲酸{4-[ 4-(2, 4-di-
hydroxy-6-methylbenzoyloxy )-2-hydroxy-6-methyl-
benzoyloxy] -2-hydroxy-6-methylbenzoicacid}。
致谢:本院分析测试中心代测 NMR。丽江教育学院的杨林
军老师提供植物材料。
REFERENCES
[ 1] 　 HUNECKS.Thesignificanceoflichensandtheirmetabolites
[ J] .NatWisenschaften, 1999, 86 (12):559-570.
·490· ChinPharmJ, 2008 April, Vol.43 No.7　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2008年 4月第 43卷第 7期
作者简介:张东 ,男 ,实习研究员　　＊通讯作者:杨岚 ,女 ,研究员　　Tel:(010)64014411-2971　　E-mail:ylan 66@yahoo.com.cn
HPLC-ELSD测定青蒿素片中青蒿素的含量
张东 1 ,杨岚 1＊ ,王满元2 ,屠呦呦 1(1.中国中医科学院中药研究所 ,北京 100700;2.首都医科大学中医药学院 ,北京 100069)
摘要:目的　建立 HPLC-ELSD测定青蒿素片中青蒿素含量的方法 , 并用于青蒿素片中青蒿素含量的测定。方法　采用蒸发光
散射检测器对青蒿素片中青蒿素进行 HPLC分析 , ThermoC18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);以甲醇-水(80∶20)为流动相;
流速为 1.0 mL· min-1;柱温为 25 ℃;蒸发光散射检测器漂移管温度 60℃, 载气(N2)压力 5.8 ×10-3 Pa,增益值为 50。结果
　青蒿素在 1.002 ～ 4.008μg内呈现良好的线性关系(r=0.999 6),平均加样回收率为 99.45%(RSD为 2.3%)。结论　本法
简单 、准确 、重复性好 , 可用于测定青蒿素片中青蒿素的含量。
关键词:青蒿素片;青蒿素;HPLC-ELSD;含量测定
中图分类号:R284　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2008)07-0491-02
DeterminationofArtemisinininArtemisininTabletsbyHPLC-ELSD
ZHANGDong1 , YANGLan1＊ , WANGMan-yuan2 , TUYou-you1(1.InstituteofChineseMateriaMedica, ChinaAcademyof
ChineseMedicalScience, Beijing100700, China;2.ColegeofTraditionalChineseMedicineandPharmacy, CapitalUniversityofMedical
Science, Beijing100069, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishaHPLC-ELSDmethodforthedeterminationofthecontentofartemisinininartemisinintab-
lets.METHODS　TheanalyticalcolumnwasThermoRP-C18(4.6 mm×250mm, 5μm).Themobilephasewasmethanol-water(80∶20).
Theflowratewas1.0mL·min-1.Thesamplesweredeterminedbyanevaporativelight-scatteringdetector(ELSD)Waters2420withthe
drifttubetemperatureat60℃ andthenitrogenflowpressureof5.8×10-3 Pa.RESULTS　Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof
1.002 ～ 4.008 μg(forartemisinin, r=0.999 9).Theaveragerecovery(n=5)was99.45% (RSD=2.3%).CONCLUSION　The
methodissimple, accurateandwithgoodreproducibility.Itcanbeusedasthequalitycontrolofartemisinintablet.
KEYWORDS:artemisinin;artemisinintablet;HPLC-ELSD;determination
　　青蒿素是从青蒿中提取出来的有效成分 ,是我
国唯一获得国际承认的抗疟药物。青蒿素片是由我
所研制 ,该药对间日疟 、恶疟包括凶险型脑疟均有卓
效 ,尤其对抗氯喹 、抗喹哌等抗性疟疾有特效。青蒿
素的含量测定方法一般采用双波长薄层扫描法 、紫
外分光光度法[ 1] 、柱前衍生-RP-HPLC[ 2] 、高效液相
蒸发光散射检测法 [ 3] 、反相高效液相色谱法[ 4]等 。
目前青蒿素片的含测方法为紫外分光光度法 ,该法
有干扰 ,不准确。本实验采用蒸发光散射检测法测
定青蒿素片中青蒿素的含量 ,方法可靠 ,结果准确 ,
可以控制青蒿素片的质量 。
1　仪器与试药
Aliance高效液相色谱仪及 Empower2色谱工
作站(Waters公司);2420蒸发光散射检测器(Wa-
ters公司);NA-5L氮气发生器(北京中兴汇利科技
发展有限公司);KQ-100型超声波清洗器 (功率
300 W, 频率 50 kHz, 昆山超声仪器有限公司);
Mili-Q超纯水机(美国 Milipore公司);青蒿素对
照品(中国药品生物制品检定所 ,纯度大于 98%,批
号 100202-200402);青蒿素片 (本实验室自制 ,批
号为 060510, 060511, 060512),甲醇(色谱纯)。
2　方法与结果
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(收稿日期:2007-05-07)
·491·中国药学杂志 2008年 4月第 43卷第 7期　　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2008 April, Vol.43 No.7