全 文 ：药物分析杂志 C h i n J Ph amr A n al 2)0( 6
,
2 6 ( 3 )
高效液相色谱法测定华细辛不同部位马兜铃酸 A 含量
高钧 , 孙爽 , 李德坤 , 李伟 , 魏峰
(天津天士力集团有限公司 , 天津 3X() 4 02)
摘要 目的 :检测细辛药材不同用药部位肾毒性成分马兜铃酸 A 的含量 。 方法 :高效液相色谱方法 , 采用 A igl en t oZ br ax BS -
C l : 色谱柱 ( 4 . 6 m m x 250 ~
,
5 林m ) , 以 乙睛 一 1% 冰醋酸水溶液 ( 39 : 61 ) 为流动相 ,流速为 0 . 8 m L · 而 n 一 ’ , 检测波长为
3 17 nr
,分别测定细辛全草和根 、 芦头 、 叶柄 , 叶片 、 花 5 个部分马兜铃酸 A 的含量 。 结果 : 高效液相色谱方法的回收率为
98
.
7%
, 马兜铃酸 A 进样量在 5 . 2 一 68 ng 范围内线性关系良好 ;细辛全草含马兜铃酸 A 1 6 . 2 此 · g 一 ’ ,根和芦头中含微量马
兜铃酸 A , 叶柄和叶片中有较多马兜铃酸 A ,花中含量最高 。 结论 : 细辛地上部分和地下部分马兜铃酸 A 含量差别很大 。
关键词 :细辛 ;马兜铃酸 ;高效液相色谱法 ’
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A 文章编号 : 025 4 一 1 79 3 (2 0() 6 )03 一 04 01 一 03
Q u a n it at it v e a n a ly s i s o f a ir s t o l o c h i e a c id
A S
G A O J u n
.
a ur m s i e b o 吞1 1 M i q . b y
A in d i n沁r e n t P a r st o f
H P L C
SU N Sh u a n g
,
L l D e 一 k u n , H W e i
,
W E I F
e n g
( iT anj i
n T as ly G or
u p C o
.
,
L t d
.
,
T ian ii n 3( X科0 2 , Cih n a )
A b st r a e t o bj
e e it v e : T o d e t e rm i
n e t h e n e p h r o p a t h y 一 e a u s i n g s u b s t an e e
, a ir s t o l o e h i e ac id A
,
i n d i fe
r e nt p art
s o f A s
-
a r u m s ie b o ld ii M iq
.
M e ht o d s
: A n H p L C m e t h o d w a s e s t ab l i s h e d w i th a A ig le n t Z o br ax S B 一 C I: e o lu m n ( 4
·
6 m m x
2 5 0 m m
,
5 林m ) , u s i n g a m o b i le p h a s e o f ac e ot n i t ir l e 一 0
,
l % ac e t ie ac id so lut i
o n
( 39
: 6 1 )
, a if ow
r at e of
0
.
8 m L
·
m i n
一 ’ , a d e t e e t i o n w a v e l e n gt h o f 3 17 n m t o d e t e mr i
n e th e e o n t e n t s o f a ir s t o l o e h i e a e id A i n A s a ur m s et bo l
-
d i i M i q
’ 5 or o t
,
or o t h e ad
,
p e t i o l e
,
lam i
n a J l o 叨 e r an d t h e w h o l e p l a nt
.
eR
s u l st : hT
e va e r a罗 er e vo e巧 r at e w as
9 8
.
7 %
, a n d th e r e w a s a g o o d l i n e a r i ty for m 5
.
2 n g t o 6 8 n g
.
T h e e o n e e n atr t i
o n o f iar
s to l o e h i e a e id A i n th e w h o l e
p lan t w
a s 16
、
2 林g · g 一 l , a n d th e er w e r e v e巧 l i lt e i n ht e ort an d ort h
e ad
,
an d m o er i n p e t i o le an d l a m i n a
, a n d t h e
m o s t i n fl o w e r
.
C o n c l u is o n : T h e u n d e r gr o u n d p a rt s o f A s a ur m s i e bo ild i M i q
.
h va e m u e h a ir s to l o e h i e a e id A w h i l e t h e
or o t h a s v e yr l i t il e
, a n d t h e r o o t 15 mo
r e s u it ab l e ot b e u s e d i n m e d i e i n e
.
K e y w o r ds : A s a ur m s ie b o l d i i ; M iq : iar
s to l o e h i e a e id A ; H P LC
细辛为马兜铃科植物北细辛 sA a 二m he et or t or -
卯ide s rF . S e h而d t v ar . 、 ” 泛九加 ir e u m ( M ax im . )凡 t a g . 、
汉城细辛 A . ise bo ild i iM q . v ar . se ou l e璐 。 Nak ia 或华细
辛 A . s ic bo ild i iM q . 的干燥全草川 。 研究表明 ,细辛中
含有微量的肾毒性成分马兜铃酸 A川 。 据不完全统
计 , 我国已经批准的中药复方中含有细辛的中药有
17 6 种 s[] 。 因此 ,细辛中马兜铃酸 A 的毒性问题涉及
到众多中药 ,能否找到合理的解决办法 ,既保留这些中
药品种 ,又保证相关中药的安全睦是一个紧迫的任务 。
细辛始载于 《神农本草经》 , 传统上以根人药 。
《名医别录》 曰 : “ 二月 、八月采根 , 阴干 。 ” 《本草经集
注》日 : “ 用之去头节 。 ” 《雷公炮炙论》 曰 : “ 凡使 , 一
一剪去双叶 ,服之害人 。 ” 可见 ,传统上 , 细辛只以根
人药 ,芦头和地上部分是禁止药用 的 。 根据近些年
来发现的细辛中含有微量毒性成分马兜铃酸 A 的
情况 ,推测古代医家不以细辛地上部分人药的原因
可能与细辛中含有的马兜铃酸类成分有关 。
本文建立了高效液相色谱方法分另d检测了华细辛
不同部位中马兜铃酸 A 的含量清况 ,测定华细辛根 、芦
头 、叶柄 、叶片和花等 5 个部位马兜铃酸 A 的含量 。
1 仪器与试药
A igl
e ln 1 10 0 高效液相色谱仪 ,配置四元泵 、 二
极管阵列检测器 、 自动进样器 、 在线真空脱气机 、 柱
温箱 ,配置 H P C he m st iat on 色谱工作站 ; H iat hc i U -
第一作者 eT l : 0 2 2 一 2 6 7 3 63 33 E 一 m ia l : 罗Oj u n 19 6 9@ h ot m ` 1 . c o m
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2006. 03. 005
一 402 一 药物分析杂志 Ch in J h Partn A n al 20 0 6, 2 6 ( 3 )
3 0 1 0 紫外 一 可见光谱仪 ; M E竹比 R T O LE D O AG 13 5
电子天平 。
马兜铃酸 A 对照品 ,购于中国药品生物制品检
定所 ,批号 : 0 7 4 6 一 2 0 0 10 3 , 纯度为 9 8 . 7% ( 3 17 n m
检测 ,简单归一化法 ) 。
乙睛为色谱纯 ( M e cr k 公司 ) , 冰醋酸为分析纯
( 中国医药集团上海化学试剂公司 ) ,水为纯化水 。
华细辛 ,产于陕西省商洛市 ,经天津天士力集团公
司现代中药研究所高钧博士鉴定为 sA二m s icb o ild i
呱 q 。 分取根 、芦头 、叶柄 、 叶片和花 。 分别粉碎后 , 过
40 目筛 ,如 ℃干燥 Z h ,备用 。 另取全草 ,同法制备 。
2 色谱条件
色谱柱为 A g i le n t Z o r b ax SB 一 C l s柱 ( 4 . 6 m m x
2 5 0 m m
,
5 协m ) ; 以 乙睛 一 l % 冰醋酸水溶液 ( 3 9 :
61 )为流动相 ;流速为 0 . 8 m L · m in 一 ’ ;检测波长为
31 7 n m
。 马 兜 铃 酸 A 紫 外 扫 描 结 果 表 明 , 在
2 5 0 n m
、
3 1 7 n m 和 3 8 8 n m 有最大吸收 。 在 2 5 0 n m
处 ,有较大吸收强度 ,但是有较强干扰 。 在 3 17 n m
和 3 8 n m 处干扰均较弱 , 3 17 n m 灵敏度较高 ,故选
择 3 17 n m 为检测波长 。
在该色谱条件下 , 马兜铃酸 A 的保留时间约为
35
.
5 而 n 。 马兜铃酸 A 与相邻色谱峰实现较好分离 。
马兜铃酸 A 对照品和细辛花样品的色谱图见图 1 。
3
.
2 供试品溶液 取 “ 1 ” 项下制得的药材粉末约
1
.
5 9
, 精密称定 , 置具塞三角瓶 中 , 精密加人甲醇
20 m L
,精密称定 ,超声提取 30 m in ,放冷至室温 , 再
称重 ,用甲醇补足损失的甲醇量 。 0 . 45 林m 微孔滤
膜过滤 , 取续滤液 , 即得 。
4 检出限的确定
取浓度为 0 . 4 2 林g · m L 一 ` 的马兜铃酸 A 对照
品溶液 4 林L ,进样分析 , 测量马兜铃酸 A 对照 品
峰高约为噪音 的 3 倍 , 以此计算最低 检 出 限为
1
.
7 n g
。
5 线性关系考察
取 “ 3 . 1 ” 项下对照品溶液 ,在上述色谱条件下
分析 ,分别进样 1 , 3 , 5 , 7 , 9 , 1 1 , 13 卜L ,记录色谱图 。
以马兜铃酸 A 进样质量 ( n g )为横坐标 , 以峰面积为
纵坐标 ,绘制标准曲线 。 回归方程为 :
Y = 2
.
4 0X + 0
.
2 6 7 r = 0
.
9 9 9 8
结果表明 , 在 5 . 2 一 68 gn 范围内 , 峰面积与马
兜铃酸 A 的进样量呈现良好线性关系 。
6 稳定性试验
取 “ 3 . 1 ” 项下对照 品溶液 , 室温放置 10 h ,含量
没有明显变化 。 表明马兜铃酸 A 甲醇溶液在 10 h
内稳定 。
7 回收率试验
分别精密吸取 “ 3 . 1 ” 项下对照品溶液 2 . 0 m L 6
份 、 3 . 0 m L 3 份 ,各置于三角瓶中 , 挥干溶剂 。 分别
精密称取细辛药材 (全草 ) 0 . 8 1 , 0 . 6 5 , 0 . 5 2 m g , 加
人相应三角瓶中 ,按照供试品溶液制备方法操作 ,并
进样 10 林L 分析 。 加人量分别相当于药材细辛中马
兜铃酸 A 含量的 80 % , 10 0% 和 12 0 % 。 计算平均回
收率分别为 98 . 4% , % . 8% , 10 . 9 % 。 回收率试验
结果见表 1 。
表 1 回收率试验结果
aT b 1 R ec
o
ve yr 溉ul st of a ir s t o】伙址 c a e i d A
称样量 / g 加人量 / m g 回收率 /% 平均回收率 / % B s D /%
489
98610
t / . i n
0
.
8 10 0
.
0 105
0 6 50 0
.
0 105
96
.
2
97
.
1
0
.
8 20 0
.
0 158 10 1
图 1 马兜铃酸 A 对照品 ( A )和细辛花样品 ( B )色谱图
Fi g 1 Ch or m at o g旧 m s Of er fe er n e e st an dadr 面 s t ol oc h i e a e id A ( A ) an d
fl ow er
o f A
.
s ic bo ld i i M iq
.
( B )
1
. 马兜铃酸 A (如s t o loc h i。 ac id A )
3 溶液制备
3
.
1 对照 品溶液 取马兜铃酸 A 对照品适量 , 用
甲醇溶解 , 定容 , 制成浓度为
兜铃酸 A 对照品溶液 。
5
.
2 5 林g · m L 一 ’ 的马
8 重复性试验
按前述供试品溶液制备方法制备细辛药材 (全
草 )供试品溶液 6 份 。 计算马兜铃酸 A 含量的 R S D
为 2 . 5% 。
9 样品测定
精密 吸取供试品溶液适量 ,注人高效液相色谱
仪分析 , 以外标法计算含量 , ·华细辛的根 、 芦头 、 叶
药物分析杂志 C坛 nJ P h ~A na l20 6
,
2 6 ( 3) 一 4 03 一
柄 、 叶片 、 花和全草中马兜铃酸 A 含量测定结果见
表 2 。
表 2 含 t 测定结果
T ab 2 D e t e r m i n 8 U 0 n r e s ul st
华细辛部位
( Part )
含量
(
e o nt e n st ) / m g
·
g 一 1
根 ( 、 t )
芦头 ( 、 t h e ad )
叶柄 ( p e t i ol e )
叶片 ( lam i n a )
花 ( fl ow e r )
全草 ( w hole p lan t )
细辛地上部分的毒性 。
本研究表明 ,细辛地上部分含有较大量的马兜
铃酸 A , 而其地下部分则含微量马兜铃酸 A 。 建议
中国药典一部收载的细辛药材改以全草人药为以根
人药 ,并去芦头 ,以减少毒性 。
样品含量测定过程中 , 为了保证峰面积在所做
标准曲线的线性范围内 , 不同样品采用了不同进样
量 。 由于高效液相色谱仪进样精度很好 , 可 以满足
分析准确度的要求 , 又避免了做两条标准曲线的麻
烦 。
079
.
vosl1如1562
10 讨论
本研究结果表明 ,华细辛根和芦头中只含有微
量的马兜铃酸 A ,其含量低于 1 . 0 此 · g 一 ’ 。 而其地
上部分含有较多马兜铃酸 A , 以叶柄 、 叶片和花的顺
序 , 马兜铃酸 A 含量增加 。
中国古代本草 中 , 细辛的药用部位为根 , 还要
“ 去头节 ” , 并认为细辛地上部分 “ 服之害人 ” 。 可
见 ,在古代临床应用细辛过程中 ,医药学家已经发现
参考文献
1 C hP (中国药典 ) . 2 0( 犯 . V ol l (一部 ) : 1 85
2 XI E Z h
a o 一面 n g (谢昭明 ) , l hs u n 一 石an g (李顺样 ) , L IA O H an -
e h e n g (廖汉成 ) . D e t e rnu n at i on of 面 s t ol oc h i。 ac id A i n h e rb 。 A s面
b y HLP C ( H PL c 法测定细辛药材中马兜铃酸 A 的含量 ) . ce nt
OS 以h P h a。 (中南药学 ) , 2X() 3 , l ( 3 ) : 1 6 5
3 WA N G Z hi 一 而 n (王智民 ) . A n al y s i s of ht e T CM s h a vi n g X汤 n as a
c o m po ne nt (含有马兜铃酸的中成药情况分析 ) . hC ian J hC in aM -
te r Me d (中国中药杂志 ) , 2 0 2 , 27 ( 10 ) : 8 0
(本文于 2 0 5 年 l 月 巧 日修改回 )