全 文 ：天然产物研究与开发
NA T U RA P L R O O U CE I RS A E RH CA ND D V EP E L OM E NT V o l
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1 1N o
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6
内蒙古地产紫沙参多糖免疫功能
药效实验研究 `
杨 伦 陈友地 毛新伟
(中国林科院林产化学工业研究所
李秀玲
南京 2 10 02 4)
摘 要 给小鼠灌胃口服紫沙参多糖 400 mg· k g一 ` 、 8 0 mg· k g一 ’ , 观察其连续给药对
免疫功能的影响 。 结果显示 :在 s d 后能显著地增加小鼠耳肿胀度 ,提示紫沙参多糖能够
增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发性变态反应 ( D T H ) ;在 7 d 后能显著地增加碳粒廓清指
数 K 和吞噬指数 a ,增强单核巨噬细胞的吞噬功能 ,能显著地增加免疫器官胸腺 、 脾脏重
量 ,增强机体免疫作用 。 试验采用国家中药二类新药云芝多糖 1 0 00 m g · kg 一 `作为阳性对
照组 。
关键词 紫沙参多糖 , 免疫 ,碳粒廓清法 , DT H 法
南沙参是桔梗科沙参属植物的根 。性甘 、 微寒 , 归肺 、 胃经 。具有养阴清肺 、 化痰 、 益气之功 ,
主治肺热燥咳 、 阴虚劳嗽 , 干咳痰粘 、 气 阴不足 、 烦热 口干等症 ,是常用中药 。 我们对内蒙古自治
区沙参资源调查显示 , 全区南沙参种类多达 19 种 、 14 变种 ,野生资源极其丰富 ,其中紫沙参
(月介 n o 尹九。 , a 胆 n i cu 如 at )及其变种齿 叶紫沙参扭 . 脚 n i e u么 ta v a r . d e n ta t a )和有柄紫沙参 ( A . 那 n i。 坛 t a
va
r
·
pe iot lat
a )具有相对种群数量多 ,根系粗大 、 发达等生物型态 , 已进行人工培育 。 我们还通过
毒理试验证明 , 紫沙参水提物和醇提物均属 于基本无毒范围 。药理试验证明 , 紫沙参镇咳 、祛痰
效果显著 。 S O D 样活性测试发现 ,紫沙参提取物具有较强的 5 0 0 样活性 。 这些工作证明 , 紫沙
参具有开发利用的价值 。 多糖作为中草药中的一类天然成分 ,近年来国内 、 外进行了广泛的研
究 ,发现具有多方面的药理活性 。 为探索紫沙参多糖的利用价值 , 本实验针对生长在我国内蒙
沙区的紫沙参进行沙参多糖免疫功能药效研究 。
材料与方法
1
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1 药品
1
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1
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1 紫沙参 多糖 取干燥紫沙参细末 10 0 0 9 ,先采用 80 写工业乙醇 ,经 90 C 水浴热回流提
取三次后的滤渣 , 回收溶剂后凉干得干燥滤渣 。 加蒸馏水 , 90 `C 热浸四次 , 每次 Z h 。 合并四次
滤液 ,真空浓缩得粘稠状提取液 3 4 0 9 。 加蒸馏水稀释至 I OO0 ml , 再用氯仿萃取两次 ,每次加入
1 0 ml 氯仿 ,萃取后用分液漏斗分离去除氯仿部分 。 加 95 %工业乙醇稀释至浓度 80 % ,置于冰
箱中过夜 。 次 日进行过滤 ,滤渣用 95 写乙醇洗脱二次 , 再过滤 ,收集滤渣 。 在真空干燥器中 ,
收稿 日期 : 1 9 9 8一 1 2一 1 4
, 毒理 、药理试验由中国药科大学季晖与龚晓键完成 ,资源调查由内蒙古林科院张印完成 。
DOI : 10. 16333 /j . 1001 -6880. 1999. 06. 014
Vo l
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1 1 N o
. 杨 伦等 : 内蒙古地产紫沙参多糖免疫功能药效实验研究
一 7 6 0 m m H g 、 6 0 `C 条件下真空干燥得多糖 1 巧 g 。 再经研磨过筛 ( 40 目 )得紫沙参多糖制品 。 颜
色棕黄色 、 易溶于水 、 p H . 5 8。
1
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1
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2云芝多糖 南京老山制药厂生产 ,批号 : 9 7 0 12 2 。
1
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2 动物
昆明种小 鼠 : 体重 18 ~ 2 9 ,雌雄各半 , 由中国药科大学实验动物室提供 。
cI R 小鼠 : 体重 18 ~ 2 9 , 雌雄各半 , 由南京医科大学实验动物中心提供 。
1
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3 试剂
印度墨汁 ( B l a n k I n d ia n I n k ) : W IN S o R A N D N E W T o N IN K , B D H L I M IT E D p o o le , B H 1 2 ,
4 N N
,
nE gl an d
,使用前用生理盐水稀释 3 倍 ,超声波处理后离心 ,弃去沉淀物 。
二硝基氟苯 ( o i n i t r o r l u o r o b e n z e n e , o N F B ) : 吴江市青云精细化工厂生产 。 使用前配制 l %
D N F B 溶液 ,称取 O N F B 50 m g ,溶于预先配好的丙酮 、 麻油 (丙酮 : 麻油一 1 : 1) 溶液 s ml 中 。
1
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4 方法
1
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4
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1 昨特异性免疫功能 .ml 定— 碳拉廓清法 : 将昆明种小 鼠随机分为 4 组 ,每组 12 只 。 紫沙参多糖设两个剂量组 ,剂量为 4 0 0 m g · k s 一 ’和 8 0 0 m g · k s 一 ’ ; 云芝多糖作为阳性对照组 , 剂
量为 1 0 0 0 m g · k g 一 ` ; 阴性对照组仅给予与样品和阳性对照组等量的 0 . 5% c M c 一N a 溶液 。 上述
4 组均灌 胃给药 ,每日 1 次 ,连续 7 d 。 第七 日给药 0 . s h 后 ,各鼠尾静脉注射稀释的印度墨汁
0
.
0 5 m z/ k s
, 于 1 m i n ( t l )和 5 m i n ( t s )后分别从眼眶静脉取血 2 0 协l , 加到 2 m l 0 . 1%的 N a Ze o 3
溶液中摇匀 , 用分光光度计在 680 n m 下 比色测定 lt 和 t5 的光密度 ( 0 0 1 和 0 0 5 ) 。 随后 ,把小
鼠放血处死 ,取肝脏 、 脾脏 、 胸腺称重 。 按如下公式计算指数 K 、 a 和脏器系数 ,进行组间 t 检验 :
廓清指数 K l og O D一 lo g 0 D : l o g O D I一 lo g 0 D S
吞噬指数 a
脏器系数 -
t s 一 t -
_ 体 重
一 肝重 + 脾重
体 重
器官重
刹面
1
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4
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Z T 淋巴 细胞免疫功能体内测定— 迟发型变态反应 ( D T H ) 法 : 将 cI R 小鼠随机分为 4组 , 每组 10 只 , 各组用药剂量同 1 . 4 . 1 。 仍采用灌胃给药 , 每 日 1次 , 连续 s d 。 首次给药 ,在每
鼠腹部去毛 ,范围为 3 x 3 c耐 , 将 1% D F N B 均匀涂沫于上 。 D N F B 为一种小分子半抗原 ,将其
涂于皮肤上 , 可透过上皮与角蛋 白及胶原蛋白结合成为全抗原并刺激 T 淋 巴细胞转化为致敏
淋巴细胞再分布于全身皮肤 , 数 日后动物对此类物质便产生过敏反应 。 第 5 日给药后半小时 ,
将 1写D N F B 均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击 ,使局部产生迟发型变态反应 (水肿 ) 。 2 4 h 后 ,将小
鼠脱颈椎处死剪下左 、 右耳壳 。 用打孔器取下直径 8 m m 的耳片称重 , 以左 、 右耳片重量之差作
为肿胀度 ,进行组间 t 检验 。
2 结 果
2
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1 紫沙参多糖对非特异性免疫功能的影响试验
结果如表 1 、 表 2 。
天然产物研究与开发 V o l . 1 1 No . 6
衰 1 紫沙参多枯对小鼠碳粒廓清试验的作用 ( : 一 1 2 , x 士 s )D
aT ble 1 hT
e e f e e st o f po ly as c h
a r id e o f A
. 和刀盆浏白饱 o n t h e e lae r a n ce r a et o f m ice e h a r cao l 阵 r t i e les
组别 剂量 D嗽 廓清指数 K P 值 吞噬指数 a P 值
G r o u P m g
.
k g 一 l C le a r a n 沈 r a t e K P v a l u e P恤 g o e y t i e in d e x a P v a l u e
阴性对照 1 00 0 0 . 0 1 1 7士 0 . 0 0 4 6 5 4 . 1 3 9士 0 . 6 1 2
N e as t i
v e e o n t r o l
沙参多糖 4 0 0 0 . 0 1 7 4士 0 . 0 0 8 4 2 > 0 . 0 5 4 . 6 0 8士 0 . 9 1 5 > 0 . 0 5
P o ly as e e h ar id e o f 月 . 脚n姗如et
沙参多糖 8 0 0 0 . 02 2 0士 0 . 00 5 2 4 < 0 . 0 1 5 . 0 6 3士 0 . 4 2 6 < 0 . 0 1
P o ly as e e h a r id e o f A
. 那n姗如 et
云芝多糖 1 0 0 0 0 . 0 2 2 7士 0 . 0 0 9 1 2 < 0 . 0 1 5 . 4 1 9士 0 . 8 7 7 ( 0 . 0 1
P o ly as c h a r id e o f oP l州诚私 s
注 : P 值为与阴性对照组相 比较 。
N o et : T h e P va l u e 15 e o m伸 r e d w i t h n e g a t i v e e o n t r o l
表 2 紫沙参多枪对小鼠免疫器官孟 t 的影响 ( : ~ 1 2 , X 士 DS )
几 b le 2 T he e f f e e st o f Po ly as e e h a r id e o f A . 那路姗如 et o n t h e m ice im m u n e o r ga n e s
组别 剂量 D os e 脾脏指数 P 值 胸腺指数 P 值
G r o u P m g
·
k g 一 l S P le e n in d e x P v a lu e T h y m u s in d e x P v a l l e
m g
.
1 09 一 l m s . 1 0 9 一 l
阴性对照 1 0 00 3 8 . 7 5士 7 . 5 4 3 8 . 5 0士 9 . 4 9
N e g a t ive co
n t r o l
沙参多糖 4 0 0 5 0 . 6 6士 9 . 7 7 < 0 . 0 1 4 9 . 6 5士 9 . 3 7 ( 0 . 0 5
OP l y as
e e h a r id e o f A
. 那”姗 al et
沙参多糖 8 00 5 1 . 4 1士 1 5 . 2 3 ( 0 . 0 5 5 8 . 3士 1 1 , 0 5 ( 0 . 0 1
oP ly
s a e e h a r id e o f A
. 脚儿别勿 te
云芝多糖 1 000 6 0 . 5 6 士 1 7 . 0 4 < 0 . 0 1 5 9 . 9 2 士 1 2 . 8 8 ( 0 . 0 1
P o l y as c e h a r id e o f 子乞2州ict 赵 s
注 : P 值为与阴性对照组相比较 。
N o t e : T h e P v a l u e 15 e o m aP r e d w i t h n e g a t i v e e o n t r o l
2
.
2 紫沙参多枪对特异性细胞免疫功能的影响
二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应 (DT H )试验结果如表 3 。
表 3 紫沙参多箱对小鼠耳肿胀度的影响加 ~ 1 0)
介 b le 3 T h e e f fe e ts o f 因l y as e e h a r id e o f A . 那”姗如 t e o n t h e s w e l l i n g d e g r e e o f m i e e e a r
组别 剂量 D o s e 小鼠耳肿胀度 P 值
G r o u P m g
.
kg 一 l S w e l l i n g d e g r e e o f m i e e e a r P v a lu e
m g
,
X 士 S D
阴性对照 10 00 4 . 1 3士 0 . 6 0
N e ga t i
v e e o n t r o l
沙参多糖 4 0 0 4 . 8 5士 0 . 7 8 ( 0 . 0 5
P o l y acs
e h a r id e o f A
. 脚”卿如 et
沙参多糖 8 0 0 4 . 7 8士 0 . 6 8 < 0 . 0 5
OP l y as
e
hC
a r id e o f A
. 那拄姗白 t e
云芝多糖 1 0 0 0 5 . 4 4士 0 . 7 2 ( 0 . 00 1
P Ol y as e e h a r id e o f F’o之夕s t ic 加 s
注 : P值与阴性对照组相比较 .
N o et : T h e P va l
u e 15 e o m阵 r de w i t h n e s a t i v e e o n t r o l
V ol
.
1 1No
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6 杨 伦等 :内蒙古地产紫沙参多糖免疫功能药效实验研究
3 讨 论
从实验结果看出 , 紫沙参多糖在 80 0 m g · k g 一 `剂量下具有十分显著地提高碳粒廓清指数
K 和吞噬指数 a 的作用 ,相当于阳性对照组云芝多糖 1 0 0 0 m g · k g一 ’ 所产生的作用 。 说明紫沙
参多糖能够增强巨噬细胞的吞噬作用 ,提高机体的非特异性免疫 。 紫沙参多糖在 4 0 m g · k g 一 `
和 8 0 0 m g · k g 一 `剂量下均能显著地增加脾脏和胸脾重量 , 其中 80 0 m g · kg 一 `剂量组的胸腺指
数相当于云芝多糖 10 0 0 m g · k g 一 ’组的胸腺增重作用 。 胸腺分泌胸腺素 , 作为 T 淋巴细胞 的成
熟器官在免疫系统中发挥关键作用 。 试验结果还显示 , 紫沙参多糖在 40 0 m g · k g 一 `和 80 0 m g
·
kg
一 `剂量下均具有显著地增加小鼠耳肿胀度作用 ,说 明紫沙参多糖能够通过增强二硝基氟
苯诱导的小鼠迟发型变态反应 ,从而提高机体细胞免疫能力 。
通过本实验研究 ,进一步证明了内蒙古地产紫沙参具有综合开发利用的价值 。
参考文献
杨 伦等 · 沙参培育与产业化技术研究 . 林产化工通讯 , 1 9 9 7 , ( 3) : 19
徐叔云等主编 · 药理实验方法学 (第二版 ) . 人民卫生出版社 , 1 9 91
陈 奇主编 . 中药药理研究方法学 . 人民卫生出版社 , 1 9 9峨
卫生部药政局 . 新药 (西药 )临床前研究指导原则汇编 . 1 9 9 3
S T U D Y O N T H E P H A R M A C O D Y N A M IC S O F P O L Y S A C C H A R I D E
O F A D E N O P H O R A P A N I C U L A T E G R O 、 V IN G T H E IN N E R
M O N G O L IA O N IM M U N E F U N C T IO N
Y a n g L u n
,
C h e n Y o u d i
,
M a o X i n g w e
,
L i X i u l i n g
(彻sea 俨hc nI st i t越et o f 以 em i ca l 脚 o e e s s i n g a n d 之/ t il i az t勿 n of oF 沪 e s t 脚 o d u c rs , C A F . N a n j in g 2 1 0 0 4 2 )
A bs t ar e t T o d e t e r m in e t h e e f f e e t s o f Po ly sa e e h a r i d e o f A
. 那 n i ca at te o n im m u n e f u n e t i o n , 4 0 0 m g ·
k g一 l , 8 0 0 m g
.
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一 1 Po l y s a e e h a r i d e w e r e f e d t o m i e e
.
T h e r e s u lt s s h o w e d t h a t m a r k e d l y i n e r e a s e d
s w e l li n g d e犷 e e o f m i e e e a r o f te r 5 d a y s , w h i e h r e p全e s e n t e d t h e m i e e D T H i n d u c e d b y d i n i t r o f l u介
r o be n z e n e e o u ld r a is e d w i t h po l y sa e e h a r id e o f A
.
aP n ica 她 t ; I n a dd i t fo n , m a r k e d l y i n e r e a s e d t h e e l e a r -
a n e e r a t e K o f e h a r e o a l 琳 r t i e l es a n d t h e P h a g oc y t i e i n d e x a o f te r 7 d a y s , r a is e d t h e Ph a g o e y t o s is o f
m o n o e y te m a e r o Ph a g e
,
t h e w e i g h t o f im m u n e o r g a n e s t h y m u s a n d s P le e n
, r i s e d th e im m u n e m od u la t o r y
a e t io n
.
T h e P o l y s ti e t u s 因 l y s a e e h a r i d e 1 0 0 0 m s · k g 一 1 w a s e o n t r o l s a m Pl e .
K e y w o r d s Po l y sa e e h a r i d e o f A
. 那 n姗如勿 , lm m u n e , e l e a r a n e e r a t e o f e h a r e o a l 琳 r t i e l e s , D T H