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肾叶打碗花总黄酮含量的分析



全 文 :作者简介:尚金燕,女,研究方向:生物制药,E - mail:jinyanshang@ 163. com
肾叶打碗花总黄酮含量的分析
尚金燕,历 娜,杨 雪
( 山东药品食品职业学院,山东 威海 264210)
摘要:目的 分析肾叶打碗花中的黄酮含量。方法 以芦丁作为对照品,利用紫外 -可见分光光度法对其进
行黄酮含量测定。结果 肾叶打碗花黄酮含量为 5. 73%。结论 肾叶打碗花黄酮含量较高。
关键词:肾叶打碗花;黄酮含量;分光光度法
中图分类号:R284. 4 文献标识码:A 文章编号:2095 -5375(2014)06 -0326 -002
Analysis of total flavonoids content in Calystegia soldanella
SHANG Jin-yan,LI Na,YANG Xue
(Shandong Drug and Food Vocational College,Weihai 264210,China)
Abstract:Objective To analyse the total flavonoids content in Calystegia soldanella.Methods Using rutin as refer-
ence substance,the content was determined by ultraviolet and visible spectrophotometry. Results The content of flavonoids
was 5. 73% . Conclusion The content of flavonoids in Calystegia soldanella was relatively high.
Key words:Calystegia soldanella;Flavonoids content;Spectrophotometry
肾叶打碗花 Calystegia soldanella(Linn.)R.
Br.,别名:滨旋花、孝扇草、扶子苗、肾叶天剑等。是
一种多年生匍匐性草本,生长于海滩沙地、海岸岩石
缝中。广泛分布于山东、江苏、辽宁、河北、浙江、台
湾等沿海各地。该植物的药用已有悠久的历史,
《全国中草药汇编》记载该药材具有祛风利湿,化痰
止咳的功效[1]。《中国药用植物图鉴》记载其:治风
湿性关节疼痛[2]。《中华本草》记载该植物具有清
热解毒,主治丹毒的功效[3]。有关打碗花化学成分
的研究很少,《中药辞海》记载其化学成分为合红古
豆碱[4],Tori M等[5]研究发现该植物的茎中含有一
种反式 - 4 -羟基桂皮酸酯。我们初步研究了肾叶
打碗花的化学成分,发现该药材含有较高黄酮类物
质,为进一步开发利用肾叶打碗花资源,本研究利用
紫外 -分光光度法测定了该药材全草的总黄酮含
量,为肾叶打碗花资源的开发利用提供理论依据。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器 电子天平(梅特勒 ME204E);摇摆式粉
碎机(LK -1000A);紫外 -分光光度计(TU - 1810);
循环水多用真空泵(SHB - Ⅲ);电热鼓风干燥箱
(FG -10)。
1. 2 药物和试剂 肾叶打碗花药材采自山东省威
海市前双岛海滨(采集时间为 2013 年 8 月份),经
山东药品食品职业学院中药教研室曲畅游教授鉴定
为肾叶打碗花的全草。芦丁对照品(中国药品生物
制品检定所,批号:100080 - 200306);所用试剂亚硝
酸钠、氢氧化钠、无水乙醇,硝酸铝均为分析纯,实验
用水为纯化水。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 用电子天平准确称取
25. 00 mg 芦丁对照品,加乙醇定容至 50 mL,摇匀,
配制成 0. 5 mg·mL -1的溶液。
2. 2 样品溶液的制备 打碗花全草室温下风干,用
摇摆式粉碎机粉碎,过 60 目筛后备用。精密称取 2
g样品粉末,置于 100 mL 圆底烧瓶内,加入 70%的
乙醇 60 mL,放置在水浴中,70 ℃左右回流提取 60
min,过滤、定容至 100 mL,备用。
2. 3 检测波长的选择[6 ~ 8] 精密量取样品溶液和
芦丁对照品溶液各 2 mL,分别置于 25 mL 量瓶中,
各加入 60%的乙醇 10 mL,加入 1. 00 mL 5%的亚硝
酸钠溶液,混合均匀,室温下放置 6 min;加入 1. 00
mL 10%硝酸铝溶液,摇匀,室温下放置 6 min;加入
·623· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Research 2014 Vol. 33,No. 6
DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2014.06.006
10. 00 mL 4%的氢氧化钠溶液,然后用纯化水,定容
至刻度,摇匀,室温放置 15 min。以 60%的乙醇溶
液作为空白溶液,分别在 300 ~ 600 nm 范围内进行
波长扫描,结果显示,制备的肾叶打碗花样品溶液和
芦丁对照品溶液在 510 nm处均有较平缓的吸收峰,
确定检测波长为 510 nm。
2. 4 标准曲线的绘制 精确量取芦丁对照品溶液
1. 00、2. 00、3. 00、4. 00、5. 00、6. 00 mL,按照上述
“2. 3”项下的测量方法,空白为不加芦丁对照品的
溶液,分别在 510 nm 波长处测定吸光度,然后选取
对照品的质量浓度 C(mg·mL -1)为横坐标,吸光值
(A)为纵坐标,绘制标准曲线。结果显示芦丁质量
浓度在 0. 020 ~ 0. 12 mg·mL -1范围内有良好的线
性关系。回归方程为 A = 9. 897C + 0. 003 4,R2 =
0. 999 5。
2. 5 样品含量测定 精确量取样品溶液 5 份,每份
1 mL,按标准曲线制备的方法测定肾叶打碗花样品
的吸光度,利用回归方程计算总黄酮含量,测定结果
表明,肾叶打碗花全草总黄酮的平均含量为
5. 73%,结果见表 1。
表 1 肾叶打碗花全草总黄酮含量测定结果
编号 吸光值(A) 总黄酮含量(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0. 456 5. 71
2 0. 460 5. 77
3 0. 453 5. 68 5. 73 0. 82
4 0. 461 5. 78
5 0. 455 5. 70
2. 6 精密度试验 精确量取 5 份 1 mL的芦丁对照
品溶液,在 510 nm处测定各吸光度,计算总黄酮含
量,RSD = 1. 15%(n = 5),结果表明该测量方法精密
度良好。
2. 7 稳定性试验 精确量取“2. 2”项下所制备的 1
mL的样品溶液,按“2. 3”项下方法分别在 0、15、30、
45、60 min,于 510 nm处测定各吸光度,计算后得到
RSD = 1. 05%(n = 5),表明在 1 h内样品稳定。
2. 8 重现性试验 精确称取肾叶打碗花样品粉末
2 g,按照“2. 2”项下的方法制备 5 份样品溶液,按
“2. 3”项下的方法分别测定 5 份样品的吸光度,代
入回归方程,计算得到总黄酮含量为 5. 74%,RSD =
0. 89%(n = 5),重现性良好。
2. 9 加标回收率试验 精确称取 5 份肾叶打碗花
细粉,每份 2 g,按“2. 2”项下的方法处理得到样品
溶液,再向每份样品液中精密加入芦丁对照品溶液
1 mL(0. 5 mg·mL -1),按照“2. 5”项下的方法分别
测定 5 份溶液的吸光度,计算回收率。结果显示,平
均回收率为 99. 6%,RSD 值为 0. 33%(n = 5),说明
该方法具有较好的回收率,结果见表 2。
表 2 加标回收率试验结果
编号
样品黄酮
量(mg)
芦丁加入
量(mg)
吸光值
测得总黄酮
含量(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 1. 14 0. 5 0. 650 1. 635 99. 0
2 1. 15 0. 5 0. 656 1. 648 99. 6
3 1. 14 0. 5 0. 652 1. 639 99. 8 99. 6 0. 33
4 1. 14 0. 5 0. 652 1. 638 99. 6
5 1. 15 0. 5 0. 656 1. 649 99. 8
3 结论
肾叶打碗花是分布在沿海沙滩常见的植物,分
布广,数量大,易采集;已有研究证明该植物的水提
物和醇提物具有抗炎镇痛作用[9],但目前该植物药
用价值和物质基础研究较少,基本上作为杂草,影响
了该药材的开发利用。本研究采用乙醇提取法,提
取了肾叶打碗花的黄酮成分,并采用紫外 -可见分
光光度法初步测定了肾叶打碗花中总黄酮的含量,
测定结果显示肾叶打碗花黄酮含量较高,为该植物
的进一步开发研究提供了一定理论基础。
参考文献:
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·723·药学研究·Journal of Pharmaceutical Research 2014 Vol. 33,No. 6