全 文 ：·科研简报 ·
四方篙片剂的溶出度测定
顾少君 , 刘 洁 , 陈仲益 ,姚形炜 ` (浙江大学药学院药物分析
与药物代谢研究室 ,杭州 31 朋 3 1 )
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A
10 1
一 24 9 4 ( ZJ 沁 ) 10 一 07 叩 一 03
文章编号 :
四方篙片剂是 由唇形科植物 四方篙 ( lsE ho Z疏 a
b伍刀更去〕 B en ht )花序提取物制得的一种 中药制剂 。 四
方篙资源十分丰富 , 主要分布于云南 、 贵州等地 ,其
叶 、花或全草均可人药 ,用于治疗感冒 、痢疾 、 肝炎等
病症 , 哈尼族民间用于治疗眼部疾病及呼吸道感染 ,
其疗效甚佳 。 文献报道 ,动物实验模型表明 , 四方篙
提取物有保护心肌细胞的作用 , 对心肌缺血有明显
的疗效 。 四方篙的主要成分为黄酮 ,如异紫云英昔
( is o a t拍 g a li n , 工 ) , 木犀草素一 7 一葡萄糖昔 ( lu t e o l i n 一 7 -
gl
u e o s ide
,
1 )
, 木犀草素一 3 ’ 一葡萄糖昔 ( l u t e d i n 一 3 ` 一gl u -
e o s id e
,
1 )
, 木犀草素一 7 一半乳糖昔 ( lu teol in 一 7 一蒯` t o -
is de
,
W )
, 四方篙素等 , 尤以花序中黄酮 含量最高 。
已有文献报道了四方篙提取物的含量测定方法 。 笔
者在对四方篙花序提取物 的质量研究基础上 , 建立
了四方篙片剂的溶出度测定方法 ,并考察了不同处
方工艺制得的片剂 的溶出行为 , 为片剂的试制提供
依据 。
1 材料与仪器
芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所 , 供含量
测定用 ) , 四方篙提取物 (浙江大学药学院中药与天
然药化研究室 ) , 四方篙实验片剂 (浙江大学药学院
药物制剂研究所 ,每片含总黄酮 Zo mg ) 。 其他试剂
均为分析纯 。
Z SR
一 SG 智能溶出仪 (天津大学无线电厂 ) , D U
麟0 分光光度计 ( eB ck ~ )
。
2 实验方法
2
.
1 总黄酮含量测定
2
.
1
.
1 对照品溶液配制 精密称取在 120 ℃减压
干燥至恒重的芦丁对照品 20 m g ,置 lo mL 量瓶中 ,
加甲醇 10 mL , 充分振摇使溶解 , 加水稀释至刻度 ,
摇匀 。 即得 (每 l fnL 中含无水芦丁 o . Z gm ) 。
2
.
1
.
2 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液 1 . 0 ,
3
.
0
,
4
.
0
,
5
.
0
,
7
.
0 毗 , 置 2 5 毗 量瓶中 , 分别 加水
6
.
0
,
4
.
0
,
3
.
0
,
2
.
0
,
0 m L
, 加入 5% 亚硝酸钠溶液 -
n止 ,摇匀 ,放置 6 而 n ,加人 or %硝酸铝溶液 l mL ,摇
匀 ,放置 6 m in , 加人 Nao H 试液 10 mL ,再加水至刻
度 ,摇匀 ,放置 巧 面 n ,照分光光度法 (中国药典 2仪旧
版附录W A ) ,于 so lun 波长处测定吸光度 , 以吸光
度为纵坐标 , 芦丁质量浓度 为横坐标 , 绘制标准 曲
线 。
2
.
1
.
3 测定法 取本品 10 片 , 精密称定 ,研细 , 精
密称取 60 gm (约相当于 1/ or 片量 )于 lo mL 三角
瓶中 ,加水 60 m L , 40 ℃超声 40 m in 使充分溶解 ,过
滤至 10 mI J 量瓶 ,残渣用水洗 ,洗液并人滤液中 ,加
水至刻度 ,摇匀 。 精密量取滤液 s mL ,置 25 mL 量瓶
中 ,加水 Z mL , 以下照 “ 2 . 1 . 2 ”项下 自“ 加人 5 %亚硝
酸钠溶液 l nrL ” 起 , 同法操作 。 以标准曲线法计算
供试液中总黄酮含量 ( C ) , 根据片粉取样量 ( W ) ,计
算平均每片相当于标示量的百分含量 ( c / w x 稀释
倍数 x 平均片重 /规格 x 10 % ) 。
2
.
1
.
4 回收率实验 精密称取片粉约 30 grn ( l / 20)
片量 ,分别加人低 、 中 、 高量 ( 10 , 15 , 20 m g )的四方篙
提取物各 3 份 ,置 lo mL 三角瓶中。 另精密称取片
粉约 1/ 10 片量 ,四方篙提取物约 25 gm , 分别置两个
l o ntL 三 角瓶中 。 按 “ 2 . 1 . 3 ” 项 下 自 “ 各加 水 60
nrL
” 起 , 同法操作 , 作为回收率 、 片剂含量和提取物
测定液 。 分别取上述 3 种溶液各 s mL 至 25 mL 量
瓶 ,加水 Z nrL , 以下照 “ 2 . 1 . 2 ” 项下 自“ 加人 5% 亚硝
酸钠溶液 l rnL ” 起 , 同法操作 ,计算回收率 。
2
.
1
.
5 精密度实验 分别精密称取低 、 中 、 高量 (含
量测定取用量的 80 % , 10 % , 120 % )的片粉各 3份 ,
按 ,’2 . 1 . 3’ 操作 , 于同一 日和不同日测定含量 , 计算
日内精密度和 日间精密度 。
2
.
2 溶 出度测定
取 6 片 , 以 驯刃 mL 水为溶出介质 , 照中国药典
2仪巧年版二部附录 X C 溶出度测定法下方法测定 。
采用转篮法 ,转速为 10 : · m i n 一 ` 。 于不同时间点分
别取样 s mL ,滤过 ,精密量取续滤液 s rnL , 置 25 fnL
基金项目 : 浙江省自然科学基金 (3 。26 82 ) ;教育部高等学校博士学科点专项科研基金 (2 仪冲〕3 350 13 ) ;浙江省科技厅基金 ( 2以” C 3 。刃 ) [浙江省中
药现代化专项基金 (浙财建字 ( 2侧 )2 )巧 5 号 )〕
作者简介 : 顾少君 , 女 ,硕士研究生 ’ 通讯作者 :姚彤炜 , 女 . 教授 eT l : ( 05 川 8 72 17 20 3 E 一m ial : yaot w @ jz u . 司 u . C n
·
79 0
·
ch i,I }P
翻 Z
n 了, 2筋 赫砂 , vol . 41 No . 0] 中国药学杂志 2( x巧年 5 月第 41 卷第 10 期
量瓶中 ,加水 2 毗 ,以下照 “ 2 . 1 . 2 ” 项下 自 “加人 5 %
亚硝酸钠溶液 l rnL ” 起 , 同法操作 。 以片剂 的总黄
酮含量为 10 , 计算溶出百分率 。
3 结果与讨论
3
.
1 提取溶剂与提取方法的选择
精密称取 25 gm 提取物和 45 m g 片粉 , 置 10
mL 三角瓶中 , 分别用 甲醇 、 水 、 甲醇 一水 ( 1 : l) 各 60
mL 作为提取溶剂 , 40 ℃ 超声提取 40 m in , 过滤至
l o mL 量瓶 , 加溶剂 至刻度 。 分别测定总黄 酮含
量 。 结果 3 种溶剂对提取物 中总黄酮 的提取率相
似 ,考虑含量测定和片剂的溶出度测定所用介质为
水 ,所 以选择水作为提取溶剂 。
分别采用水浴振摇法和超声法进行提取 ,其他
条件相同 , 比较两法所得黄酮含量 。 结果 4O ℃水浴
振摇 4o 而 n ,测得总黄酮含量为 72 . 3 % ; 40 ℃超声
4 0 而 n 总黄酮含量为 82 . 95 % , 故选择超声方法来测
定含量 。
.3 2 溶出介质的选择
考虑与体内的相关性 ,选择水 、 0 . 01 mo l · L 一 `盐
酸溶液为溶出介质 , 转速为 10 : · m i n 一 ` , 考察片剂
在不同溶出介质中的溶出曲线 ,在盐酸溶液中片剂
的总黄酮溶出量很低 ,不能准确测定 ,故不适宜用作
溶出介质 。 而以水为介质时 ,溶出 30 m in 即有 90 %
以上的总黄酮被溶出 , 水又是药物溶出度测定中的
常用介质 ,所以选择水为溶出度测定介质 。
.3 3 转速的选择
以水为溶出介质 , 考察转速分别为 50 , 10 , 12 0
r
· 而 n 一 ’下片剂的溶出曲线 ,转速 10 和 120 r · m in 一 ’
条件下的溶出较好 ,两者结果基本一致 ,故选择转速
10
:
·
m in
一 ’作为溶出度测定转速 。
.3 4 方法的专属性和显色溶液的稳定性
取一片量辅料 ,按 “ 2 . 2 ”操作 ,结果表明 ,在该显
色条件下 ,辅料无吸收 ,不干扰黄酮的测定 。
照 “ 2 . 1 ” 项下方法 , 将加 Nao H 试液和加水稀释
至刻度的显色液 , 放置不同时间 ( 5 , 10 , 15 , 2 0 , 2 5 , 30
而n) 后测定吸光度 。 发现随放置时间延长吸光度逐
渐下降 。 虽然在 30 m in 内测定 , 误差在 2% 以内 ,但
巧 而 n 后吸光度下降较 巧 而 n 前明显 。 故为降低测
定误差 ,规定放置 巧 m in 后立即测定 。
.3 5 均一性实验和溶出曲线
按片剂的 “ 2 . 2 ” 项下方法操作 , 分别于溶出 5 ,
10
,
25
,
2 0
,
25
,
3 0
,朽 , 6 0 ,卯 而 n 时取样测定 ,计算不
同时间点的溶出程度和 6 片溶出度的均一性 。 测得
各时间点 6 片累积溶出百分率的 R s D : 巧 ha n 前小
中国药学杂志 2以巧年 5 月第 41 卷第 10 期
于 6 % , 30 ha n 前小于 3% , 45 ha n 后小于 2 % 。
.3 6 方法学研究结果
在本实验条件下总黄酮质量浓度 9 . 48 一 6 . 36
mg
·
L
一 ’ 内 ,质量浓度 ( 尸)与吸光度 ( A )呈线性关系 ,
测得回归方程 A 二 O众义) 18 十 10 . 9 1尸 , : 二 O , 9 9 90
测得 片粉 和 提取 物 的 总黄酮 含 量 分别 为
3
.
65 %和 83 . 巧% , 根据片粉中加人的提取物量 , 计
算低 、 中 、 高浓度 的加样 回收率分别为 10 . 8% ,
98
.
6 %
,
98
.
8%
。 日内精密度为 0 . 7% 一 1 . 9% , 日间
精密度为 0 . 4% 一 1 . 5% 。
3
.
7 3 批片剂的溶出曲线
取不同批四方篙片各 6 片 , 于 g o mL 水中 , 照
“ 2
.
2 ”操作 ,于 5 , 10 , 15 , 2 0 , 2 5 , 3 0 , 4 5 , 60 , 9 0 m in 下取
样测定 ,结果见图 1。
。 翌 _一 一 _ 一下_0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 0 0 7 0 8 0 9 0 1 00了 / n l“ l
图 1 3 批 四方篙片剂的溶出曲线
闷卜 一 第 1批月 于 一 第 2批 ; 艺、 一 第 3批
n g 1 D is s o lu t i o n e u vr e s of th er e b a t e h e s o f El sh o lt z ia b lan d
a
tab l
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今 一 场匕 h ~ ; 屯} 一 加 cI h 咖 ; ~互 一 鲡hc th正 e
.3 5 威布尔参数求取
利用威布尔方程表达式对图 1溶出曲线的数据
进行处理 ,计算 : = 0 时的威布尔参数与直线方程 ,
结果见表 1。 T 表明溶出初始阶段和释放过程中的
滞后 时间 ,多数情况下为 。 。 表中 m 值表示 曲线的
形状 , 0t 为时间尺度参数 , 可以用 t d代替 。 t s。 , t d和
st0 分别代表药物溶出 50 % , 63 . 2 % 和 80 % 的时间 。
比较 3批片剂的 蜘 , t d , t , 值 ,第 3批片剂的溶出速
度最快 ,第 2 批片剂最慢 , 这与 3 批片剂的溶出度曲
线一致 。
表 1 威布尔参数
T a b 1 W
e
lbul l l〕a r a l l l e t e r
B a ct h m to t , / im
n 之 d / im n
20
.
45
25 2 3
14
`
15
的 / im n h~ 叫
u a t ion
: 2
1
.
35
1
.
25
1
.
13
4 3
.
83
卯 . 2
20
.
13
巧 . 26
2 1 5 2
29 9 1
叼 .沁
21
.
54
y 二 l
`
25 3尸一 3 . 780 0
.卯 7 9
y ` 1
.
34 8产 一 4` 502 0 . 芭明 6
丁二 1 . 13 3尸一 3 《川 3 0 .卯 7 6
4 小 结
本实验建立 了四方篙片剂的溶出度测定方法 ,
该法操作简便 , 结果可靠 。 应用建立 的方法成功考
hC in 少刃“ I n 双 J , 2`泥巧 乃扬 , , Vol
.
41 No
.
OI
·
79 1
·
察了不同处方制得的片剂的溶出行为 ,为制剂 的处
方筛选提供了科学依据 。
(收稿日期 : 2(义巧一 10 一 2 0)
毛细管气相色谱法测定盐渍苏叶中乐
果和对硫磷的残留
宋红光 (辽东学院医学部 ,辽 宁 丹东 118姗
中图分类号 : 9R 17 文 献标识码 : A 文章编号 :
10 1
一 2 4 94 (2 《】…巧 ) 10 一 0’7 9 2 一 02
由于进 口 国对其农药残留的要求日益加强 , 这
就要求在种植过程中使用高效低毒的农药或生物农
药 ,另一方面要加强农药残留的检测监控工作 。 出
口盐渍苏叶的控制指标为有机磷类农药的残留量 ,
其主要针对农药为乐果和对硫磷 。 我国在有机磷类
农药残留的研究报道很多 ,但测定盐渍苏叶中乐果
和对硫磷等残留量笔者未见报道 。 笔者采用微波提
取技术进行样品处理 ,建立了一种简便快速的测定
盐渍苏叶中乐果和对硫磷残留量的方法 。
1 实验部分
1
.
1 仪器与试剂
气相色谱仪 GC 一 14 A 附 FP【) 检测器 , ( 日本岛
津 ) N Z ( XX) 色谱工作站 ;微波提取装置 ( MA RS 美 国
C E M 公司 ) ;旋转蒸发仪 (上海亚荣 生化仪器厂 ) 。
乐果 、 对硫磷对照品 (纯度分别为 9 . 0% , 9 . 0 % ,北
京陆桥公司 ) ;二氯甲烷 (分析纯 ) ;无水硫酸钠 (分析
纯 , 6 50 ℃灼烧 4 h ,储与密闭容器中 ) 。
1
.
2 标准溶液的配制
精密称取乐果和对硫磷对照品用二氯甲烷配制
成分别含乐果 、 对硫磷 l gm · L 一 ’ 的溶液 。
1
.
3 样品的预处理
精密称取制成匀浆后的样品 3 9 ,置微波提取罐
中 ,加二氯甲烷 巧 m L ,提取 10 而 n , 提取温度为 10
℃ 。 提取完毕后 ,取出 ,经装有无水硫酸钠 5 9 的玻
璃漏斗滤过 , 再以二氯甲烷 s mL 洗涤提取罐及滤
渣 ,合并滤液及洗液至旋转蒸发器的蒸发瓶中 , 在
4D ℃以下蒸发至近干 ,并以二氯甲烷定容至 Z mL ,
待测 。
1
.
4 色谱条件
色谱柱 SE 一 54 石英毛细 管柱 ( 0 . 5 3 m x 2 5
~ )
; F p l ) (火焰光度 )检测器 ;载气 : 高纯氮气 ;流速
20 mL
· 而 n 一 ’ , 氢气 : 流速 45 rnL · 而 n 一 ’ ;空气 : 流速
45 0 mL
· 而 n 一 ’ ;柱温 2 30 ℃ 。 进样 口 : 温度 2 50 ℃ ;检
测器 :温度 260 ℃ ;无分流进样方式 ,进样量为 1 拜L 。
在此色谱条件下 ,乐果与对硫磷可得到完全分
离 ,分离度大于 1 . 5 ,盐渍苏叶样品溶液在乐果与对
硫磷峰相应的位置上没有有关物质峰 。
2 结 果
2
.
1 样品预处理条件的选择与优化
本方法采用微波提取方法 ,使样品处理大为简
化 ,提取效率增加 。 国家标准中有机磷农药的测定
多采用以丙酮二氯甲烷提取净化的方法 , 费时而且
丙酮分层较为困难 ,容易导致回收率偏低 ,采用微波
处理后 ,简化了样 品的处理步骤 , 回收率较高 , 稳定
可靠 。
2
.
2 线性关系及最低检出限
精密称量样品 3 9 ,共 5 份 ,分别准确添加标准
品溶液 0 . 5 , 1 . 0 , 2 . 0 , 4 . 0 , 6 . o mL , 按 “ 1
.
4 ” 条件进行
处理后 ,最终的乐果及对硫磷的配制质量浓度均为
0
.
02 5
一 2 . o grn
·
L
一 ` ,取 1 拌L样品注人气相色谱仪进
行测定 。
以质量浓度 (尸 )为横坐标 , 以峰面积 ( )Y 为纵坐
标进行线性回归 ,乐果的回归方程为 : y = 10 8的尸+
1 23 5
, r 二 0 . 997 2
。 对硫磷的 回归方程为 : Y =
10 1 14尸 + l 以 3 , r = 0 . 99 7 1。 当信噪 比为 2 时 , 乐
果 、对硫磷检出限分别为 0 . 3 , 0 . 巧 gn 。
2
.
3 精密度实验
准确称量样品 3 . 0 9 ,共 5 份 ,每份准确加入乐
果 、对硫磷混合标准溶液 2 . o mL ,按 “ 1 . 3 ”条件进行提
取净化后 ,取 1 拜L 样品注人气相色谱仪进行测定 ,结
果乐果平均峰面积值为 l2 4( 辫 , SR D 为 3 . 3% 。 对硫
磷平均峰面积值为 n 43 2 , SR D 为 4 . 0% 。 精密度测
定结果表明 ,该实验条件基本稳定 ,测定结果良好 。
2
.
4 放置稳定性实验
取线性关系实验样品一份 ,于室温条件下放置 ,
并在 1 , 2 , 4 , 6 , s h 后取样测定 , 结果乐果平均峰面
积值为 12 3 17 , sR D 为 3 . 2% 。 对硫磷平均峰面积值
为 1 1 18 7 , SR D 为 2 . 8 % 。 实验结果表明 ,测定溶液
在上述时间放置基本稳定 , 环境温度的变化不影响
测定 。
2
. 弓 回收率实验
分别准确称量已测定不含乐果和对硫磷的样品
作者简介 : 宋红光 , 女 ,副教授 E 一~ l : h on脚 an -g oZ s@ 163 . C 0 m
7 9 2
·
hC i
n l刁翻l r n J ,入天场从珍 , Vo l . 4 1 No . ] O 中国药学杂志 2侧芜 年 5 月第 41 卷第 ro 期