全 文 ：表 4　蛋白吸附对摄取值的影响.n=5
样品 小鼠血浆/μl
摄取值
/cpm值
摄取变化百
分数/ %
3　H-CyA-NSC 0.0 68553±3549 0.0
3　H-CyA-NSC 20.0 65171±165551 -4.93)
3　H-CyA-NSC 40.0 156789±167242 1293)
Cell control 132±28
注:1)P>0.1 v s3H-CyA-NSC+0.0;2)P<0.001 vs 3H-CyA-NSC+0.0;3)摄取
变化百分数 vs3H-CyA-NSC+0.0
噬细胞主要为单核细胞吞噬系统(MPS , mononucle-
ar phagocy te system)。由实验可见 ,小鼠腹腔巨噬
细胞对各种胶体亚微粒的摄取具有明显的选择性 ,
其中对3H-CyA-NSC的摄取最大 ,而对3H-CyA-NCC
和3H-CyA-MEC 的摄取要低于对照组的3H-CyA-
Sol.,这可能与制备纳米囊 、微乳时需要大量的表面
活性剂有关 ,如微乳中的表面活性剂的量占处方量
的近 30%,另一方面巨噬细胞可能对多肽类药物环
孢菌素A 本身具有一定的趋向性。
大量文献报道了亲水性的表面活性剂对纳米粒
的包裹可使 MPS 对纳米粒的摄取下降[ 3] ,本实验
证明亲水性的表面活性剂(Tween 类和 Pluronic
F68)也可使 MPS 对微乳的摄取下降。
通常认为胶体亚微粒被 MPS 的快速摄取与血
浆中的调理蛋白对其的吸附有关[ 4] 。本实验证明
小鼠血浆蛋白与3H-CyA-NSC 的吸附可使 MPM
对3H-CyA-NSC的摄取明显增加(P <0.001)。
影响体外细胞摄取胶体亚微粒的主要因素是胶
体亚微粒的表面特性 ,但在体内可能受更多因素的
影响 ,如血浆蛋白的吸附。将环孢菌素 A 包封于纳
米球中可以增加其对巨噬细胞的靶向性而提高其免
疫抑制作用 ,将环孢菌素 A包封于纳米囊或微乳中
则可能延长其体内循环时间而更适合于长期用药。
参考文献
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(收稿:1999-06-16)
白花前胡对野百合碱所致大鼠肺动脉高压的影响＊
王健勇　王怀良1　章新华1　邢军1(北京 100050 中国药品生物制品检定所;1 沈阳 110001中国医科大学临床药理教研室)
摘要　目的∶研究中药白花前胡的提取物 PPD对野百合碱(MCT)所致大鼠肺动脉高压的影响。方法∶用 MCT 制造大鼠肺动
脉高压模型;以硝苯地平(Nif)为阳性对照药;PV-1 聚乙烯管插管测量肺动脉压力;肺组织切片 HE 染色显微测量肺小动脉
中膜厚度;免疫荧光法观察肺组织中 Tenascin-C 合成的变化。结果∶PPD可明显减少 MCT 引起的肺动脉压升高 , 而对体循
环压力无明显影响;可明显减少 MCT 所致的右心指数的升高;可明显减轻 MCT 所致的肺血管损伤与肺血管重建(明显减少
了炎性细胞浸润 、TN-C 的表达及血管平滑肌细胞的增殖)。结论∶PPD 可明显抑制 MCT 所致大鼠肺动脉高压的形成。
关键词　白花前胡;硝苯地平;野百合碱;肺动脉高压;右心指数;Tenascin
＊　国家科委重点攻关课题项目 ,编号:96-901-01-04
Effects of Peucedanum Praeruptorum Dunnon on the monocrotal ine-induced pulmonary hypertension in rats
Wang Jianyong(Wang JY), Wang Huailiang(Wang HL), Zhang Xinhua(Zhang XH), et al(National Institute for
the Control of Pharmaceutical and Biological Products , Beijing 100050)
ABSTRACT　OBJECTIVE:To study the action of the extract of Peucedanum Praeruptorum Dunnon(PPD) on monocrotaline
(MCT)-induced pulmonary hypertension in rats.METHODS:MCT w as used to establish the chronic pulmonary hyper tension model
in rats;Nifedipine was used as the positive control.The pulmonary artery pressure was monito red by R6000 poly graph system through
the cannulation of PV-1 poly viny l tube.The thickness of pulmonary ar tery media was measured under microscope.The composition of
tenascin-C in pulmonary vascula ture was observed through immunofluorescence assay.RESULTS:PPD reduced the pulmonary ar tery
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pressure without significant influencing the sy stemic artery pressure.I t decreased the right heart index and reduced the thickness of
small pulmonary artery media g reatly.The composition of tenascin-C decreased significantly in pulmonary vasculature in rats after giv-
en PPD.CONCLUSION:PPD inhibited the MCT-induced pulmonary hypertension in rats.
KEY　WORDS　peucedanum , nifedipine , monocrotaline , pulmonary hypertension , right heart index , Tenascin
　　目前治疗肺动脉高压尚无理想药物 。肺动脉高
压主要有 2种病理改变:肺血管收缩和肺血管重建 。
后者以血管平滑肌细胞的增生和细胞外基质
(ECM)蛋白沉积的异常增多为特点。 Tenascin-C
(TN-C)是重要的 ECM 蛋白 ,在肺动脉高压的形成
中起重要作用[ 1～ 2] 。用 MCT 制造肺动脉高压的动
物模型已被广泛采用 ,该模型中肺血管重建明显。
前胡在祖国医学中用于治疗咳喘等症。白花前
胡可舒张肺动脉环 ,并可降低低氧引起的犬肺动脉
压升高[ 3] 。而其对肺血管重建过程的作用尚未见
报道 。本实验从肺血流动力学 、右心指数 、肺血管重
建及 TN-C 的表达等几个方面观察了 PPD 的药理
作用 。
1　仪器与材料
1.1　仪器
多导 生理记录 仪(日本 Konden R6000),
S tatham P23ID压力换能器;TP200P 压力换能器;
PV-1型聚乙烯管 , PE -50 型聚乙烯管;切片机
(德国 Leica JUNG RM2025);OLYMPUS 光学显微
镜(日本 CH-2)及其显微测量尺;OLYMPUS 荧光
显微镜(日本 BX-60 , 自带摄影系统)。
1.2　药品与试剂
PPD:从白花前胡(peucedanum praeruptorum
Dunnon)根部提取 ,组分是总香豆精类化合物 。沈
阳药科大学提供;用 Tw een-80 、聚乙二醇(PEG-
400)和蒸馏水混合液(1∶4∶15)配成所需浓度 。
MCT(日本和光纯药业株式会社)用乙醇和生理盐
水(2∶8)混合液配成 1%溶液。Nif(上海第十七制
药厂)用 Tween-80 、PEG-400和蒸馏水混合液(1∶4∶
15)配成所需浓度。一抗∶小鼠抗人 TN-C 单克隆抗
体(Sigma公司);二抗∶FITC 结合的兔抗小鼠 IgG
(Sigma 公司);透明质酸酶(Sigma 公司)。固定液∶
蒸馏水 、无水乙醇 、冰醋酸混合液(1∶96∶3),过滤后
备用 。
1.3　动　物
Wistar大鼠♂80 只 ,体重(135±14)g(中国医
科大学实验动物部提供)。
2　方法与结果
2.1　大鼠处理法
将大鼠按体重均衡原则随机分为 T 组 、MCT
组 、空白组 、MCT +PPD 溶剂组 、MCT +Nif 组 、
MCT+PPD 25 , 50 , 75mg·kg-1组 ,共 7 组。除空白
组外其它6组一次性 ip MCT 60mg·kg-1 ,空白组 ip
同等体积 MCT 的溶剂 。2 h后分别 po 给水 、水 、溶
剂 ,Nif 20mg·kg-1 , PPD 25 , 50 , 75 mg·kg-1 , bid。
所给药液体积均同 ,连续给药 20 d直至检查前 12h
停药 。最后测定时各组动物数分别为 11 , 7 , 8 , 10 ,
10 ,11 , 11只。
2.2　颈动脉压与肺动脉压的测定
于给药后第 21天测定 。将大鼠称重 、ip戊巴比
妥钠 45mg·kg-1麻醉后 ,切开颈部皮肤 ,分离颈外
静脉及颈动脉 。将肝素化的 PE-50 管插入颈动脉 ,
连接压力换能器(TP200P), 经载波放大器(AP-
61G),用多导生理记录仪记录收缩 、舒张及平均颈
动脉压。将肝素化的 PV-1 导管(其末端加热使形
成 U形小弯)经颈外静脉 、右心房 、右心室插入肺动
脉内 ,连接压力换能器(Statham P23ID),经放大器
用多导生理记录仪记录收缩 、舒张及平均肺动脉压。
MCT 组 、溶剂组肺动脉平均压均明显升高 ,与
空白组相比均差异显著(P <0.01:组间进行 t 检
验 ,以下均同)。Nif 组 , PPD 25 , 50 , 75 mg·kg -1组
肺动脉平均压与 MCT 组相比分别下降 16.6%(P
<0.05), 14.5%(P >0.05), 19.2%(P <0.05),
21.2%(P <0.01);后4组 ,组间相互无显著差异(P
>0.05)。溶剂组和 MCT 组差异不显著(P >
0.05),说明溶剂无明显药理作用 。7组的颈动脉平
均压相互无显著差异(P >0.05)。见表 1。
2.3　右心指数的测定 、肺组织病理学观察与肺小动
脉中膜厚度的测量
测压结束后 ,通过 PV-1导管注入肝素 10mg·
kg-1抗凝 。按文献[ 4] 方法行灌流固定 、切取肺组
织并称量右心室自由壁重和左心室加室间隔重 ,计
算其比值即为右心指数 。
肺组织固定 24 h 后 ,石蜡包埋切片 , 厚度为
5μm 。HE 染色 ,显微镜下观察并摄影。显微测量外
径在 65 ～ 75μm 的肺小动脉(选择与呼吸性支气管
相伴行的)中膜厚度 ,选取垂直血管长轴的切面 ,围
绕圆周测8个值(相互间隔45°角),后取平均值 。两
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位实验者分别独立测量 ,再取此二值的平均值为结
果。每张切片选取 5 个血管断面 ,每例取 5张切片
(肺门水平)。
MCT 组 、溶剂组右心指数明显升高 ,与空白组
相比均差异显著(P <0.01)。Nif 组 , PPD 25 , 50 ,
75mg·kg-1组右心指数与 MCT 组相比分别下降
14.8%(P<0.05),17.6%(P<0.05), 23.4%(P <
0.01), 31.4%(P <0.01)。其中 , PPD 75mg·kg-1
效果优于 Nif 20mg·kg-1(P<0.01)和 PPD 25mg·
kg-1(P <0.05)。溶剂组和 MCT 组无显著差异(P
>0.05)。见表 1 。
光镜下观察 HE染色切片:MCT 组与溶剂组肺
泡萎陷 、断裂融合 ,肺泡隔增厚 ,肺组织中肥大细胞 、
单核细胞 、中性粒细胞等炎性细胞数量增加 ,肺毛细
血管和肺小动脉内皮细胞肿胀 、坏死 ,内皮层断裂 ,
新生内膜形成 。肺小动脉中膜平滑肌细胞增生 、中
膜厚度增加 ,血管管腔狭窄甚至闭塞 。而 Nif组与
PPD组均不同程度地减轻肺组织损伤程度 ,炎性细
胞浸润减少 ,肺小动脉中膜厚度降低 。MCT 组 、溶
剂组肺小动脉中膜厚度明显增加 ,与空白组相比差
异均显著(P <0.01)。Nif 组 , PPD 25 , 50 , 75mg·
kg-1组肺小动脉中膜厚度与 MCT 组相比分别下降
26.1%(P <0.01),36.9%(P <0.01),48.4%(P <
0.01),60.3%(P <0.01), 4 组间相互差异均显著
(P<0.01),并以 PPD 75mg·kg-1效果最好 。溶剂
组和 MCT 组无显著差异(P >0.05)。见表 1。
表 1　各组实验数据一览
组　别 各组动物数/只 肺动脉平均压/mmHg颈动脉平均压/ mmHg 右心指数 中膜厚度/μm 荧光强度
空白 7 10.59±3.91 117.19±20.14 0.223±0.028 3.82±0.63 1.00±0.09
MCT 11 17.55±2.811) 102.55±15.12 0.387±0.0501) 17.48±3.221) 3.39±0.211)
MCT +溶剂 8 18.20±4.05 108.90±20.88 0.390±0.059 17.41±2.01 3.63±0.28
MCT +Nif 10 14.63±2.672) 103.25±17.14 0.330±0.0502) 12.91±2.453) 1.89±0.153)
MCT+PPD 25mg·ng-1 10 15.00±3.40 114.60±22.52 0.319±0.0802) 11.03±2.183) 1.50±0.263)
MCT+PPD 50mg·ng-1 11 14.18±2.992) 109.64±12.09 0.297±0.0673) 9.01±1.453) 1.33±0.303)
MCT+PPD 75mg·ng-1 11 13.82±2.093) 118.18±24.98 0.266±0.0423) 6.94±1.533) 1.22±0.223)
注:MCT 组与空白组进行组间 t 检验 , 1)P<0.01;其余各组与 MCT 组进行组间 t 检验 , 2)P<0.05 , 3)<0.01
2.4　免疫荧光法观察 TN-C 在肺组织中的沉积
按文献[ 5]方法行荧光染色 ,于镜下(激发波长∶
495nm)观察并摄影 。
将荧光强度分为 5级:0级:几无荧光;1级:很
弱;2级:中等;3 级:较强;4级:很强。每例观察 5
个切片(肺门水平),每张切片观察 5个血管断面 ,选
取法同上 。
MCT 组 、溶剂组荧光强度均明显增强 , 表明
TN-C的沉积增多 。TN-C主要表达于肺动脉增厚
的中膜与新生内膜。肺泡壁也见其表达 。以非特异
羊血清分别取代一抗 、二抗 ,结果均为阴性 。Nif
组 ,PPD 25 , 50 , 75mg·kg-1组荧光强度均有不同程
度的降低(表 1),较 MCT 组分别降低 44.2%(P <
0.01), 55.8%(P <0.01), 60.8%(P <0.01)及
64.0%(P<0.01)。而溶剂组与 MCT 组无显著差
异(P >0.05)。表明此两药均可减少 TN-C 的沉
积 ,且以 PPD 75mg·kg-1组最明显。
3　讨　论
血管内皮细胞是 MCT 损伤的靶细胞 ,它受损
后通过一系列机制引起平滑肌细胞迁移 、增生 ,使
ECM 的合成与沉积增多[ 1 , 6] ,引发肺血管重建 ,增
加肺血管床阻力 ,使肺动脉压升高 。
PPD对 MCT 引起的大鼠肺动脉压升高和肺血
管构型重建有选择性抑制作用。其作用机制可能
为:①通过 Ca2+通道拮抗作用和 K+通道开放作用
舒张肺血管 ,降低肺血管压力。有人证实白花前胡
甲素同时具有阻断 Ca2+通道和开放 K+通道的作
用[ 7] 。 ②保护内皮细胞 。组织学观察发现其保护
作用明显 ,但此为其直接作用还是继发改变则有待
进一步研究。 ③与一些生长因子相互作用而减少
ECM 的合成。因 ECM 的合成与沉积主要受转化
生长因子 、血小板衍生性生长因子 、表皮生长因子等
的影响 ,PPD减少 TN-C的沉积则可能与之有关。
在慢性肺动脉高压的研究中 ,心输出量与右心
指数相关性较好[ 8] 。但最好还是用心输出量作为
肺血流动力学的指标 ,虽然它对于小动物较难测量。
本实验虽观察到了白花前胡的良好疗效 ,但要
阐明其作用机理尚需进一步研究 。
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(收稿:1999-06-22)
脑血管药 CBN 对药效靶器官的毒理学研究＊
杜力军　李敏　孙虹　苏秀玲　金文 (北京 100094中国医学科学院-中国协和医科大学药用植物研究所)
摘要　目的:观察脑血管药 CBN 对脑血流的作用及在毒性剂量下对脑血流的影响。方法:利用激光 Doppler技术测试小鼠大
脑皮质运动区脑膜血流量。比较给药前后脑血流的变化。同时监测心电和呼吸。结果:CBN剂量为 12.5 , 25 , 50 mg·kg -1时 ,
有明显增加脑血流的作用 ,并呈量效关系。大剂量药后 10 min 脑血流明显增加。剂量为 800 mg·kg -1时脑血流明显下降 , 其
下降 50%的平均时间为(11.56±7.54)min ,呼吸频率下降 25%平均时间为(3.89±0.99)min ,心率下降 100 次/分的时间为
(2.4±1.56)min。脑血流下降与呼吸和心率下降的相关系数(r)分别为 0.9393 和 0.9399。结论:药效剂量下 CBN 有明显增
加脑血流的作用。中毒剂量下脑血流下降。这种下降与呼吸及心率的下降呈明显的相关性。提示 , CBN 急性中毒时主要作
用在呼吸及循环系统 ,并涉及中枢神经系统。
关键词　三七皂苷;葛根黄酮;脑血流;毒理学;药理学;小鼠
＊　国家新药研究基金 ,合同号:96-901-05-105
Effects of CBN on the cerebral blood flow in mice
Du Lijun(Du LJ),Li Min(Li M),Sun Hong(Sun H), et al(Instituteof Medicinal Plants , Chinese Academy of Medical
Sciences & Peking Union Medical College , Beijing100094)
ABSTRACT　OBJECTIVE:CBN is consisted of notoginsennoside and pueraria flavanoids.To investigate bo th the effective the dosage
and the to xic dosage of CBN on the cerebral blood flow in mice.METHODS:The blood flow on the Rolandos zone—motor area of
cerebral cortex(AP-1 , L 2)w as tested by the way of laser Doppler instrument.RESULTS:CBN effectively improved the blood flow ,
by the dosages of 12.5 , 25 , 50 mg·kg-1 , respectively , with the dose-effect relation ship.While the dosage increased to 800 mg·kg-1
(the bottom line of LD50), it decreased obviously the flow .The average time of the flow 50% dow nw ards was at(11.56±7.54)min
after CBN injection , the time of the flow 25%decreased respiratory w as at(3.89±0.99)min , and the time of the heart ra te decreas-
ing 100 times per minute w as at(2.4±1.56)min.The correlation coefficients betw een the blood flow downwards and the respiratory
o r hear t rate decreased were 0.9393 and 0.9399 respectively.CONCLUSION:CBN at low dosage could increase the blood flow.While
using the to xic dosage , it could decrease the flow with the obviously correlation between the respirato ry and the heart rate.It suggested
that the acute toxicity of CBN may be related to the sy stems of respira tory , circulation and central nervous.
KEY　WORDS　notoginsennoside, pueraria flavanoids , cerebral blood flow , toxicology , pharmacology , mice
　　CNB 粉针剂主要由三七皂苷(含量 93%)和葛
根黄酮(含量为 82%)组成(二者比例为 6∶4)。为新
一代的脑血管药物。已有研究表明 ,CBN 可以延长
小鼠常压耐缺氧能力 ,明显对抗由鼠脑凝血活素所
致小鼠体内血栓形成所引起的死亡 。直接保护脑神
经原 ,避免其因缺糖缺氧而引起的膜通透性的改
变[ 1] 。作为脑血管药其对脑血流的作用如何 ,在毒
性剂量下对脑血流有何影响 ,其影响的机理如何 ,对
此进行研究 ,对于全面认识该药具有一定的意义。
同时也为急性毒性研究的方法学作一有益的探讨。
1　材料与方法
1.1　试验药物
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