全 文 ：·
1 3 6
. C b
、 n J In t e g r
`
I’ r a d W e s t M e d D ig , J u n 20 0 3 V QI 1 1 , N o . 3
飞天娱蛤七对肝纤维化大鼠肝组织转化
生长因子 俘1 蛋白表达的影响 `
崔大江 ` 聂丹丽 ’ 邪 敏 2 毛水龙 3
` 西安交通大学第二医院中医科 ,西安 7 1 0 0 0 4
2 西安交通大学第二医院消化内科 , 西安 7 1。。0 4
3 西安神龙中医医院 , 西安 71 0 0 61
仁摘要〕 目的 :探讨飞天娱蚁七 防治 肝纤维化 的作用机制 。 方法 : CCI ; 法复制肝纤维化模型 , 48 只 S D 大鼠随
机分 为飞天娱蛤七组 ( A 组 ) 、秋水仙碱组 (B 组 ) 、 模型组 (C 组 )和正常对 照组 ( D 组 ) , 每组 12 只 。 各组分别在第 2 、
43 天时 , 检测血清透明质酸 ( H A ) 、 层粘蛋白 (L N ) 、 皿型前胶原 (P C 一 班 )含量 ; 行肝组织转化生长因子书 , ( T G F一 p, )
免疫组化染色 , 检测其蛋白表达 。 结果 : 第 2 天时 , 与 D 组 、 A 组 比较 , C 组血清 H A 、 P C 一 皿升高 , T G F 一 p: 阳性表达
较强 ( P < 0 ` 05 ) , L N 升高 ( 尸 > 0 . 0 5 ) ;第 43 天时 , 与 D 组比较 , C 组血清 H A 、 L N 、 P C 一 l 明显降低 , 肝组织 T G F一伪
阳性表达明显减轻 ( p < 。 . 0 5 ) 。 结论 : 飞天娱蛤七可以减轻肝纤维化程度 、抑制肝组织 T G F 一俘l 蛋白的表达 , 飞天娱
蛤七 可作为抗肝纤维化的一种有效药物 。
[关键词 〕 肝纤维化 , 实验性 ; 飞天娱蛤七 ; 转 化生长因子书
[中图分类号 ] R 5 7 5 . 2
E f f e e t a n d M e e h a n is m o f A
r a l i a C h i n e n s i s L
.
i n t h e
T r e a tm e n t o f H e P a t ic F ib r o s is i n R a t s
仪了1 aD 7 l’a n g , N I E D a n il , Z H I M in , e t a l
众 Pa r tm e n t o f T C M , t h e S e e o n d H o s p i t a l o f X i ,a n J ia o t o n g U n i v e r s i t y , X i ,a n 7 1 0 0 0 4
A b s t r a e t O b j e e ti v e
: T o i n v e s t ig a t e t h e e f f e e t a n d m e e h a n is m o f A r a l ia C h i n e n s i s l一 i n t h e t r e a t -
m e n t o f h e p a t l e f i b r o s i s i n r a t s
.
M e t h o d s
: F o r t y
一 e ig h t S D r a t s w e r e r a n d o m l y d i v id e d i n t o 4 g r o u p s (
n
~ 1 2 e a e h )
:
A r a lia C h i n e n s i s l一 g r o u p ( g r o u p A ) , e o le h i e i n e s g r o u p ( g r o u p B ) , h e p a t ie f ib r o s i s
m o d e l g r o u p 〔g r o u p C ) a n d n o r m a l e o n t r o l g r o u P ( g r o u p D ) . F o r t y p e r e e n t e a r b o n t e t r a e h l o r id e
( C C I
;
) d is s o lv
e
d i n p e a n u t 0 11 w a s i n je e t e d s u b e u t a n e o u s l y i n t o r a t s o f g r o u p A
,
B a n d C t w i e e a w e e k
a n d t h e r a t s o f g r o u p A a n d B w e r e s i rn u l t a n e o u s ly t r e a t e d w i t h A r a l ia C h i n e n s is L
.
a n d e o l e h i e i n e s
r e s P e e t iv e ly
.
H A
,
I
才
N
,
P C
一 班 in s e r u m w e r e d e t e e t e d b y r a d i o im m u n i t y m e t h o d a n d t h e e x P r e s s io n
o f T G F
一日w a s d e t e r m i n e d b y im m u n o h is t o e h e m ie a l s t a i n in g . R e s u l t s : A t t h e e n d o f t h e t h i r d w e改 ,
H A a n d P C
一 皿 i n t h e s e r u m o f g r o u p C i n e r e a s e d s i g n i f i e a n t ly a n d t h e e x p r e s s io n o f T G F 一日1 r a i s e d
s t r o n g l y e o m p a r e d w i t h t h o s e o f g r o u P A a n d D ( P < 0
.
0 5 )
,
w h il e L N in e r e a s e d w i t h o u t s t a t i s t i e
s i g n i f ie a n e e ( p > 0
.
0 5 )
.
A t t h e e n d o f t h e s ix t h w e e k
,
H A
,
L N
,
PC
一
1 a n d t h e e x p r e s s io n o f
T G F
一月1 i n l iv e r t i s s u e o f g r o u p C d e e r e a s e d g r e a t l y e o m p a r e d w i t h t h o s e o f g r o u p D ( P < 0 . 0 5 ) .
C o n e l u s i o n : A r a l ia C h in e n s i s I
J . e o u ld r e li e v e h e P a t i e f ib r o s is a n d l e s s e n t h e l e v e l o f T G F
一几 i n li v e r
t is s u e
.
T h e r e s u l t i n d i e a t e d t h a t A r a li a C h i n e n s is I
J .
w a s a n e f f e e t iv e d r u g f o r h e p a t ie f ib r o s i s
.
K e y w o r d s H e p a t ie F i b r o s is ; A r a l i a C h in e n s i s I
J . ; T G F
一日,
飞天娱蛤七是秦 巴山区特有 的植物 , 主要功效
为清热祛湿川 ,是我们临床长期应用治疗慢性肝病
’ 陕西省自然科学基金资助项 目 (N O . 2 0 0 0 SM 4 )
的有效药物 。 本研究通过实验动态观察了飞天娱蛤
七对 C CI ; 性肝纤维化大鼠肝组织中转化生长因子 -
俘, ( T G F 一 p, )蛋白表达的影响 ,现报告如下 。
中国中西医结合消化杂志 2 0 0 3年 6 月第 1 卷第 3期 1 37
材料与方法
材料
1
.
1
.
1 动物 雄性 S D 大 鼠 8 4只 , 清洁级 , 体 重
( 2 0 0 士 2 0 ) g , 由西安交通大学实验 动物 中心提供
(陕医动证字 : 0 8一 0 0 5 号 ) 。
1
.
1
.
2 药品与试剂 飞天娱蛤七 30 9 ,本院药剂科
水煎 、 浓缩 制备 , 生药含 量 1 9 /m l ;秋水仙碱片 (云
南昆明植物 药厂出品 , 批号 : 2 0 0 10 3 1 2 ) ; e e l; 分析
纯 (天津易发化学试剂厂出品 ,批号 : 2 0 0 0 1 2 4 ) ;精
制花生油 (山东鲁花集团产品 ) 。 兔抗鼠 T G F 一几抗体
(工作浓度 1 : 1 0 0) 及链霉亲和素一生物素一酶复合物
(S A B C )试剂盒均为武汉博士德生物工程有限公司
产品 。 透明质酸 ( H A ) 、 层粘蛋白 ( L N ) 、 皿型前胶原
(P C
一 皿 )放免试剂盒购于上海海研医学生物技术 中
心 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 分组及模型复制方法 48 只大鼠正式实验
前适应性饲养 l 周后 随机分为 4 组 , 即飞天娱蛤七
组 ( A 组 ) 、 秋水仙碱组 ( B 组 ) 、 模型组 ( C 组 )和正常
对照组 ( D 组 ) ,每组 12 只 ,整个实验过程中自由摄
食及饮水 ,并每周称体重 1次以 调节药量 。 A 、 B 、 C 3
组参照沈吉云等阁法进行模型复制 , D 组注射等量
0
.
8 5%氯化钠溶液 。 A 组每 日灌服飞天娱蛤七 1 . 5
m l / 1 0 0 9
,
B 组每 日灌服秋水仙碱 0 . 0 1 1 m g / 1 0 0 9 ,
C 组及 D 组按每 日灌以蒸馏水 1 . 5 m l / 10 0 9 作对
照 。 整个实验持续 43 d 。
1
.
2
.
2 血清 H A 、 L N 、 P C 一 l 含量 的测定 各组分
别在第 2 、 43 天时随机处死 6 只大鼠 , 分别取血分
离血清 ,用放免法检测血清 H A 、 L N 、 P c 一 l 含量 。
1
.
.2 3 T G F
一俘1测定 免 疫组化及 图像半定 量分
析 。 取肝右叶相 同部位小块组织 ,经 40 % 甲醛固定 ,
石蜡包埋 , 5 拌m 切片 , S A B C 法测定 T G F 一民的表达 ,
用 P B S 替代一抗做空 白对照 , 由病理科 同一医师在
相同环境 中进行 。 并应用半定量方法 ,在 20 0倍光镜
下 ,于切片标本的 4 个角及中央部分 , 分别选取 5 个
观测区 (避开边缘效应 ) ,并要求每个视野包含 1 个
汇管区加 1 个肝小叶或 1 条纤维间隔 , 然后根据每
个视野 的阳性染色所 占该视野 的百分 比值进行计
分 ,取其平均值为该样本的分值 。
1
.
3 统计学处理方法
用 S P S S l o . 0 统计软件对资料进行方差分析 。
2 结果
2
.
1 大鼠一般情况
D 组大 鼠第 35 天死亡 1 只 , C 组第 30 天死亡 1
只 。 各组体重持续增加 。 C 组动物较另外 3组瘦弱 ,
皮毛无光泽 ,倦怠 、 精神萎靡 ,激惹后烦躁 、 易怒 。
2
.
2 各组第 2 2 、 4 3 天血清 H A 、 L N 、 P C 一 皿 含 t 变化 及肝组
织 T G F一p, 阳性表达 的比较
结果见表 1 。
3 讨论
目前 ,在众多的抗肝纤维化的药物中 ,祖国医学
以其独特的疗效和作用在肝纤维化治疗中显示出优
势 , 如王宝恩以 ` 〕的复方 8 61 合剂 ,刘成等s[, 6〕的扶正
化疲方 。这些方剂和治法从活血化痕 、 益气扶正的角
度进行研究 , 疗效确切 。 1 9 9 7 年 由周 仲瑛教授主持
研究 的 “ 清化疲毒 , 调养肝脾法辨治慢 乙肝 ” 获 国家
中医药管理局科技进步奖 ,他辨证强调了湿与热的
两重性及湿热致癖的病理特点川 。 本病属中医 “ 胁
痛 ” 、 “ 积聚 ” 范畴 。 因正气不足 , “ 湿热毒邪 ” 、 “ 疫毒 ”
等侵袭机体 , 留聚肝脏不散 ,阻滞气机 ,气滞血疲 ,脉
络奎阻 , 聚湿成痰 , 亦可血疲成积 , 最终导致气水痕
留而为患 ,其病程长 , 缠绵难愈 。 这与苑淑芳等 s[] 的
“ 湿热疫毒是肝纤维化的启动因素 ” 理论相一致 。 除
病毒感染外 , 由酗酒 、 肥胖 、 药物等因素引发 的肝脏
损伤 ,其临床症状中亦有湿热证存在 ,起病初期采用
清热祛湿为主的治疗原则已被公认 。 进人慢性期即
使正虚 、 血疲已经比较明显 ,但是从症状 、 舌象 、 脉象
等方面均证明湿热仍存在 , 并持续损伤肝组织 , 因此
表 1 各组第 2 2 、 4 3 天血清 H A 、 L N 、 P C 一 l 含量变化及肝组织 T G F 一母, 阳性表达的比较 王士 `
时间 n H A P C 一 皿 T G F一 pl
B 组
C 组
D 组
第 2 天
第 43 天
第 2 天
第 4 3天
第 2 天
第 43 天
第 2 天
第 4 3天
1 9 9
.
9 3士 6 8 . 3 2 1 ,
2 9 5
.
2 0士 8 2 . 5 6 1 )
2 7 1
.
8 5士 7 1 . 6 4
4 0 5
.
0 0士 8 7 . 6 7
3 4 9
.
1 4士 7 2 . 8 6
5 3 7
.
1 0士 1 9 5 . 0 4 2 )
1 9 1
.
9 7士 7 3 . 7 5 1 )
2 0 4
.
1 0士 5 9 . 2 4
2 0
.
1 7士 6 . 0 1’ )
2 3
.
2 9士 7 . 1 0 ` )
2 5
.
8 0士 7 . 0 4
3 2
.
2 8士 1 2 . 1 5
3 4
.
4 5士 8 . 6 9
3 9
.
9 5士 1 4 . 2 3 2 )
1 7
.
3 7士 5 . 8 7` )
1 7
.
6 1士 6 . 0 1
1 6
.
0 5士 7 . 8 8
2 1
.
1 9士 8 . 7 9’ )
1 8
.
3 2士 8 . 7 7
3 0 4 8士 1 1 . 63
2 2
.
7 7士 1 0 . 2 3
3 6
.
2 2士 1 5 . 0 9 2 )
1 5
.
2 3士 8 . 3 1
1 5
.
6 2士 6 . 5 7
1
.
8 5士 0 . 9 4 , )
1
.
9 4士 0 . 7 6 1 )
2
.
8 7士 1 . 0 6
3
.
1 6士 1 . 1 5
3
.
5 6士 1 . 2 9
4
.
7 5士 1 . 3 1 2 )
1
.
1 1士 0 . 6 4 1 )
1
.
3 0 士 0 . 7 4
, ’与 C 组 比较 P < 0 . 0 5 ; 2 ,与 D 组 比较 P < 0 . 0 1
(下转第 1 3 8 页 )
·
1 38
· C h in J In te g r T r ad W e s tM e d D ig
,
J
u n 2 0 0 3 V o l 1 1
,
N o
.
3
慢性胃病脾虚患者胃窦粘膜胃泌素细胞和分泌
生长抑素细胞的变化及其意义
宋于刚 ` 姚永莉 ` 刘 利 民 “ 张万岱 `
` 第一军医大学南方医院全军消化内科研究所 , 广州 51 0 51 5
2 广州军区第 1 6 3 医院肿瘤科 , 长沙 4 1 0 0 0 0
〔摘要 ] 目的 :观察 以慢性 胃病为主的脾虚患者胃窦粘膜分泌胃泌素 ( G as )细胞 (G 细胞 ) 、 生长抑素 (S )S 细胞
( D 细胞 )与脾虚证发生 的关系 。 方法 :将 84 例脾虚患者分为脾胃虚寒组 、脾虚夹热组 、 胃阴不足组 、脾胃湿热组 、 肝
胃不和组 , 应用免疫组化技术标记胃窦粘膜 G 、 D 细胞 , 并定量分析 。 结果 : 以慢性胃病为主的脾虚证患者 G 、 D 细胞
数均减少 , D 细胞面积缩小 , G /D 细胞数和细胞面积比值均增高 ( 尸 < 0 . 0 5 ) 。 结论 : G 、 D 细胞的变化可能是慢性胃
病脾虚证胃肠功能障碍的一个重要病理机制 。
〔关键 词口 胃疾病 ; 胃肠激素 ; 脾虚
〔中图分类号 〕 R 5 7 3 ; R 9 7 5 ; R 2 6 5 . 3 9
C h a n g e s o f G C e l 15 a n d D C e l 15 i n P a t i e n t s w i t h C h r o n i e G a s t r o P a t h y
o f S P I e e n A s t h e n i a T y P e a n d i t s S ig n i f i e a n e e
S O N G Y u g a n g
,
Y A O Y加之9 1 , L IU L im in
,
et al
I n s t i t u t e o f D ig e s t i v e D i s e a s e o f P l
,
A
,
N a n f a n g H o s p it a l
,
F i r s t M i li t a r y
M
e d i e a l U n i v e r s i t y
,
G u a n g z h o u 5 1 0 5 1 5
(上接第 1 3 7 页 )
在治疗中应用清热祛湿药物 。 我们先期已通过动物
实验证实 , 同时采用活血化疲与清热祛湿药物可 以
减轻实验性大鼠的肝纤维化程度图 。 然而 ,单用清热
祛湿药物飞天娱蛤七能否起 到防治肝纤维化的作
用 ? 为了验证我们的观点 , 进行了以上实验 。 飞天娱
蛤七为五加科植物 , 味微甘 、 苦 、 辛 ,归肝 、 脾 、 肾经 ,
有清热祛湿之功 。含三菇皂贰 、 胆碱 、 挥发油 , 其中三
菇皂贰类的贰元主要是齐墩果酸 〔` “ 〕。 齐墩果酸存在
于许多植物中 , 是临床治疗急慢性肝病的常用药物
之一 ,我们采用飞天娱蚁七不仅仅是它含有齐墩果
酸的原 因 , 主要考虑它的功效符合中医的辨证 论治
规律 。 结果显示 , 飞天娱蛤七可以减轻肝纤维化 、 降
低 T G F 一月l 的表达水平 , 提示飞天娱蛤七可作为抗
肝纤维化的一种有效药物 。
参 考 文 献
李世全 秦岭巴山天然药物志 . 西安 :陕西科学技术出
版社 , 1 9 8 7 . 3 4 3 .
沈吉云 , 燕忠生 , 赵淑媛 . 软肝合剂对慢性实验性肝损
伤的保护作用及机理 . 中华实用中西医杂 志 , 1 99 , 12
( 2 0 )
:
1 3 4 6
.
3 王宝恩 ,赵洪涛 , 王泰岭 , 等 . 复方 8 61 对肝炎肝纤维 化
疗效的病理组织学分析 . 中华肝脏病杂志 , 19 97 . 5 ( 2 ) :
7 7
.
4 尤 红 , 王宝恩 , 王泰岭 ,等 . 复方 861 对肝星状细胞的
增殖和凋亡的干预作用 . 中华肝脏病杂志 , 2 0 0 0 , 8 ( 2 ) :
7 8
.
5 刘 成 , 姜春荫 ,刘成海 ,等 . 扶正化疲方对肝星状细胞
分泌血管内皮生 长因子的干预 . 中华肝脏病杂志 ,
2 0 0 1
,
9 ( 5 )
:
2 8 2
.
6 刘 成 ,刘 平 ,姜春荫 , 等 . 扶正化疲方对大鼠肝星状
细 胞旁分泌活化途 径 的抑制作用 . 中华消化杂志 ,
2 0 0 1
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2 1 ( 6 ) : 3 6 7
.
7 钱 英 . 中医治疗病毒性肝炎的现状与思考 . 中西 医
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8 苑淑芳 , 张俊富 . 抗纤软坚冲剂抗肝纤维化临床研究 .
中西医结合肝病杂志 , 1 9 9 , 9 ( 4 ) : 3 .
9 那 敏 , 聂丹丽 , 崔大江 ,等 . 肝康合剂对实验性大鼠肝
纤维化的预防作用 . 陕西中医 , 2 0 0 2 , 23 ( l ) : 8 .3
10 江苏新医学院编 . 中药大辞典 . 上海 : 上 海科学技术出
版社 , 1 9 8 8 . 2 4 3 9 .
(收稿 日期 : 2 0 0 3一 0 1一 2 7 )