全 文 :第 10 期
第 47 卷第 10期
2008 年 10月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 47 No.10
Oct.,2008
收稿日期:2008-06-25
基金项目:湖北省自然科学基金项目(2006ABA036);湖北省生物资源保护与利用重点实验室开放基金项目(2007020)
作者简介:翟 琨(1978-),女,辽宁沈阳人,讲师,主要从事土壤植物营养教学与研究工作,(电话)13477212501(电子信箱)zk3100@sina.com。
竹节人参属五加科植物,别名竹节三七、竹节
参、白三七、北三七、大叶三七[1,2],具有滋补强壮、散
瘀止痛、止血祛痰等功能,兼具我国北药人参和南
药三七之功效,在民间有“草药之王”的美誉,常用
于治疗病后虚弱,肺结核咯血,产后血瘀腹痛,寒湿
脾痛,跌打损伤等症 [3,4],属我国特有珍贵中药材资
源。 现代药理学研究表明,竹节人参主要活性物质
为皂甙类、多糖、氨基酸及少量的挥发性油等[5-7]。这
些活性物质具有抑制肿瘤、抗炎、镇痛、镇静、抗病
毒、免疫调节、提高学习记忆能力、保护脑损伤及心
肌缺血损伤、抗衰老及抗疲劳等多方面的功能 [8-11]。
因此,加强对竹节人参活性物质的开发与利用具有
十分重要的现实意义。 到目前为止,对竹节人参多
糖提取工艺的研究还未见报道。 本文主要通过单因
素和正交试验, 探讨竹节人参多糖的最佳提取工
艺,为竹节人参的进一步开发利用提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 材料
竹节人参:家种四年生,由湖北省中药材研究
所提供。 主要仪器:AVANTI30 高速冷冻离心机(美
国贝克曼公司);S53 / 54全波长分光光度计。
1.2 方法
1.2.1 样品处理 竹节人参置鼓风干燥箱中 60℃
烘干,粉碎机粉碎至全部通过 60 目筛孔,用适量的
丙酮脱脂后热风吹干,密封置于干燥器中备用。
1.2.2 方案设计
1)溶剂的选择。 控制料液比(W/V,g∶mL,下同)
比为 1∶20,分别用水、0.1 mol·L-1的盐酸及 0.1 mol·L-1
氢氧化钠溶液作为溶剂于沸水浴中进行提取,以多
糖的得率为指标,选择最佳溶剂。
2)单因素试验。 以溶剂的浓度、料液比、提取时
提取条件对竹节人参多糖得率的影响
翟 琨 a,b,向东山 a,c
(湖北民族学院,a.湖北省生物资源保护与利用重点实验室;b.化学与环境工程学院;c.生物技术研究所,湖北 恩施 445000)
摘要:采用单因素试验及 L9(34)正交试验,以竹节人参中多糖的得率为指标,探讨了影响竹节人参多糖
提取的因素,并通过单因素递变法结果校正,得到了竹节人参多糖提取的最佳工艺条件,即在沸水浴中
进行提取,氢氧化钠的浓度为 0.20 mol·L-1、料液比(W /V)为 1∶25、提取时间为 45 min、超声波破碎时间
为 2 min。
关键词:竹节人参;多糖;工艺条件
中图分类号:S572.062 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2008)10-1201-03
Study on Extraction of the Polysaccharide in the Panax japonicus
ZHAI Kuna,b,XIANG Dong-shana,c
(Hubei Institute for Nationalities,a.Key Laboratory of Biological Resources Protection and Utilization of Hubei Province,b. College of
Chemistry and Environment Engineering;c. Research Institute of Biological Technology Enshi 445000 Hubei, China)
Abstract: By the single factor experiment and the L9(34) orthogonal experiment and using the polysaccharide rate as the in-
dex,the effects of the different factors on the polysaccharide extracts of Panax japonicus was studied. The best industrial ex-
traction condition was boiling water with sodium hydroxide density 0.15mol·L-1 and 25 times the amount of samples for 45
minutes after ultrasonic broken within 2 minutes.
Key words: Panax japonicus;polysaccharide;industrial extraction condition
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2008.10.035
湖 北 农 业 科 学 2008 年
间及超声破碎时间作为影响竹节人参多糖得率的
单因素,设置各因素不同的水平,得到不同因素的
适宜范围。
3)正交试验。 以单因素试验的结果为参考,对
溶剂的浓度、料液比、提取时间及超声波破碎时间
进行 4因素 3水平正交试验,因素水平表见表 1。以
多糖的得率为指标,通过 L9(34)正交试验确定最佳
的提取条件。
1.2.3 多糖的提取与分离 分别用水、0.1 mol·L-1
的盐酸及 0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液作为溶剂,从脱
酯后的竹节人参粉末中进行提取,得到相应的溶液
即为水溶多糖、酸溶多糖及碱溶多糖。 然后在水溶
多糖、酸溶多糖及碱溶多糖提取液中分别加入等体
积的 Sevage试剂,振荡脱蛋白,静置分离。重复脱蛋
白 5 次,醇析,离心分离,去上清液,加溶剂溶解后
重复醇析两次,依次用丙酮、乙醚洗涤两次,再分别
用相应的溶剂充分溶解后定容到 100 mL,备用。
1.2.4 多糖含量的测定与得率的计算 多糖得率
(%)=100×(m1 /m2),其中 m1为从竹节人参中所提取
出的多糖质量,m2样品的质量。 多糖含量测定用苯
酚-硫酸比色法,485 nm测吸光度值。用葡萄糖制作
标准曲线, 曲线回归方程 y=116.72x+0.178 7,R2=
0.999 6。
2 结果与分析
2.1 溶剂的选择
平行称取适量的脱脂竹节人参粉末,分别加入
适量水、0.1 mol·L-1盐酸溶液和 0.1 mol·L-1氢氧化
钠溶液,料液比为 1∶20,沸水浴中提取 1 h,离心分
离。 重复提取 3次,合并 3次所得提取液,即得水溶
多糖提取液、 酸溶多糖提取液及碱溶多糖提取液。
然后分别计算出多糖的得率, 其结果如表 2 所示。
由表 2 可知,用氢氧化钠作提取溶剂,多糖得率明
显高于水和 0.1 mol·L-1的盐酸,因此本试验选择氢
氧化钠作为提取溶剂。
2.2 单因素对竹节人参多糖得率的影响
2.2.1 氢氧化钠溶液浓度对多糖提取效果的影响
为了研究氢氧化钠溶液的浓度对竹节人参多糖提
取效果的影响, 本试验设置了 4 个浓度梯度:0.05、
0.10、0.15、0.20 mol·L-1。 分别用不同浓度的氢氧化
钠溶液提取样品中的多糖并计算多糖的得率。 提取
条件为料液比 1∶20 的氢氧化钠溶液于沸水浴中提
取,每个样品提取 3 次,每次 1 h,结果见表 3。 由表
3可知,氢氧化钠浓度以 0.15 mol·L-1为最佳。
2.2.2 料液比对多糖提取效果的影响 本试验设
置了 4 个不同的料液比, 分别为 1∶10、1∶15、1∶20 和
1∶25倍。 提取条件为 0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶液于
沸水浴中提取,重复提取 3 次,每次 2 h。 按上述方
法计算多糖的得率,结果(表 3)表明,1∶25 的料液比
为最佳。
2.2.3 提取时间对多糖提取效果的影响 本试验
设置了 4 个不同的提取时间, 分别为每次提取 15、
30、45 和 60 min。 提取条件为料液比 1 ∶20 的 0.1
mol·L-1的氢氧化钠溶液于沸水浴中提取,重复提取
3 次。 然后计算多糖的得率,结果(表 3)表明,随着
提取时间的增加,多糖的得率增加,当提取时间增
加到 45 min 后,多糖的得率增加弧度很小,从时间
和能耗方面考虑,以每次提取 45 min为宜。
表 1 正交设计因素水平表
水平
1
2
3
氢氧化钠浓度
(A)/mol·L-1
0.10
0.15
0.20
料液比
(B)/g∶mL
1∶15
1∶20
1∶25
提取时间
(C)/min
30
45
60
超声波破碎时间
(D)/min
2
5
8
表 2 不同提取溶剂的结果
溶剂
水
0.1 mol·L-1盐酸
0.1 mol·L-1氢氧化钠
y1
17.86
18.23
27.85
y2
17.35
18.50
28.18
y3
17.42
18.35
27.90
y
17.54 c
18.36 b
27.98 a
多糖的得率/%
表 3 单因素试验结果
因素
氢氧化钠浓度/mol·L-1
料液比
提取时间/min
超声波破碎时间/min
水平
0.05
0.10
0.15
0.20
1∶10
1∶15
1∶20
1∶25
15
30
45
60
0
5
10
15
y1
22.30
28.06
29.91
29.55
21.21
26.13
28.06
28.75
19.86
26.25
27.56
28.06
28.06
28.35
24.58
24.52
y2
22.55
27.79
30.12
29.76
21.30
25.94
27.79
28.86
19.95
26.16
27.35
27.79
27.79
28.32
24.50
24.48
y3
22.70
28.12
29.98
29.69
21.55
26.01
28.12
28.55
20.17
26.49
27.18
28.12
28.12
28.55
24.65
24.58
y
22.52 d
27.99 c
30.00 a
29.67 b
21.35 d
26.03 c
27.99 b
28.72 a
19.99 d
26.30 c
27.36 b
27.99 a
27.99 b
28.41 a
24.58 c
24.53 c
多糖得率/%
1202
第 10 期
2.2.4 超声波破碎时间对多糖提取效果的影响
为了研究超声波破碎时间对多糖提取效果的影响,
在提取之前先用超声波细胞破碎仪对样品进行处
理,处理时间分为 5、10、15 min及对照 4个水平。提
取条件为料液比 1∶20 的 0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶
液于沸水浴中进行提取,重复提取 3 次,每次提取 2
h。然后计算多糖的得率,结果(表 3)表明,短时间用
超声波细胞破碎仪进行处理后可提高竹节人参多
糖的得率, 但处理时间过长会使多糖的得率降低,
这可能是因为处理时间过长使细胞内溶物溶解在
溶剂中,增加了溶液的粘度,影响了多糖在溶液中
的溶解。 以超声处理 5 min左右为宜。
2.3 不同因素共同作用对竹节人参多糖提取效果
的影响
为了研究不同因素共同作用对竹节人参多糖
提取效果的影响,采用 L9(34)正交表对样品中多糖
进行提取,以多糖得率为指标,进行试验优化,确定
最佳的提取条件。 结果及方差分析见表 4及表 5。
由表 4 中的极差可知,影响竹节人参多糖得率
的各因素中,其主次顺序依次为 A>C>B>D,即氢氧
化钠的浓度>提取时间>料液比>超声波破碎时间。
方差分析表明,4 个因素间对竹节人参多糖得率均
具有极显著的影响。
从表 4 的试验结果来看,A3B3C2D1组合多糖得
率最高。 因此竹节人参多糖提取的最佳条件组合为
A3B3C2D1,即氢氧化钠的浓度为 0.20 mol·L-1、料液比
为 1 ∶25,提取时间为 45 min、超声破碎时间为
2 min。
3 小结与讨论
1)多糖是竹节人参中主要的活性成分之一,本
文通过单因素和正交试验,得到了竹节人参多糖提
取的最佳工艺条件为在沸水浴中进行提取,氢氧化
钠的浓度为 0.20 mol·L-1、料液比为 1∶25、提取时间
为 45 min、超声波破碎时间为 5 min。
2)竹节人参中多糖的成分较为复杂,对多糖中
不同组分的分离提纯、结构鉴定等方面的内容还有
待进一步研究。
参考文献:
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(责任编辑 郑 威)
表 4 正交试验结果
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
k1
k2
k3
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
27.52
29.71
28.19
2.19
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
28.07
27.63
29.73
2.00
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
27.34
29.43
28.66
2.09
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
28.60
28.66
28.44
0.22
y1
26.01
27.63
28.89
30.08
28.98
29.72
27.85
26.08
30.30
y2
26.08
27.42
28.76
30.35
29.17
29.60
27.79
26.17
30.52
y3
26.25
27.58
29.10
30.25
29.35
29.91
28.01
26.25
30.72
y
26.11
27.54
28.92
30.23
29.17
29.74
27.88
26.17
30.51
多糖得率/%
表 5 方差分析表
注:* 表示有显著差异,** 表示有极显著差异。
方差来源
区组
A
B
C
D
误差
SS
0.224 8
22.650 9
21.988 0
20.034 8
0.213 9
0.171 8
df
2
2
2
2
2
16
MS
0.112 4
11.325 5
10.994 0
10.017 4
0.107 0
0.010 7
F
1 054.940 5**
10 24.065 2**
933.097 2**
9.963 0**
F0.05(2,16)
3.63
3.63
3.63
3.63
F0.01(2,16)
6.23
6.23
6.23
6.23
翟 琨等:提取条件对竹节人参多糖得率的影响 1203