全 文 ：西北林学院学报 2X ( )7, 22 ( 4 ) : 13 5 一 138
Jo u m al 成 No rt hw e s t oF er s t yr Uin ve 玲i yt
几种松萝中松萝酸含量及提取物清除 D P P H 自由基能力测定
杨东升` , 苏印泉 , ,*2 , 彭 锋` , 玉泉幸一 郎2
( 1西北农林科技大学 林学院 , 陕西 杨陵 7 12 10 ;2旧 本九州大学 , 81 2 一 85 81 , 日本国 )
摘 要 :为了得到提取松萝酸的最佳原料 ,采用紫外分光光度法在波长 28 4 n m 处对长松萝、 环
裂松萝 、粗皮松萝 、桦树松萝、 亚花松萝中松萝酸含量进行提取分析 , 结果表明 , 长松萝主要活
性成分松萝酸含量最高 ,达到 5 . 6 % 以上 。 以分光光度法测定抗坏血酸清除二苯基苦基苯拼
( DP P H ) 自由基的能力并制作清除率曲线 ,将 IC 50 值作为评价试样清除 D PP H 自由基能力的指
标 , 应用于松萝提取物清除 D P H 自由基能力的测定 。 将试样和抗坏血酸的测定结果进行比
较 ,发现几种松萝提取物的清除 DP H 自由基的能力均不强 。
关键词 :松萝 ; 松萝提取物 ; 松萝酸 ; 二苯基苦基苯拼 ; 紫外分光光度法 ; 清除能力
中图分类号 : 5759 . 82 文献标识码 : A 文章编号 : 100 1一 4 6 1 ( 2X() 7】04 习 135很
M e as u er me
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林g砧 s im a , .U d沥 a e协 , .U mo n t七沂娜 , .U b et 以ian a dn .U s u妞 o r id a an i n U V一 V i s ib l e 孙e e加Ph o -
ot m e t e r a t 28 4 mn
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n d a g a t e s er s e vr e
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p h e叮 l一p i e叮l一 h y d r娜l ( D P H ) fer e ar d i e al s e va e n g i n g a e it v iyt of a s e o ht i e a e id w a s p u t fo wr o ln . hT e e v al u iat n g
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t e r m e ht o d ; s e a v e n ig
n g ac it v iyt
松萝酸 ( us n i c a ic d) 是研究地衣的极其重要的 点 ,是提取松萝酸原料的理想选择 。 松萝中含有多
代谢产物 ,具有重要的商业价值 。 许多含有松萝酸 种多酚类化合物 ,地衣多糖 ,异地衣多糖等 ,具有一
的地衣和提取物被广泛用于医药 、 香料 、 美容等领 定的抗氧活性 。 D P H 检测法 〔 ’ .e] 是 DP H 分子提
域川 。 松萝酸已经显示出具有抗菌 、 抗病毒 , 抗原 供一个稳定的自由基与抗氧化剂提供的一个电子配
生动物病 、 抗增生 、 抗癌 、 消炎和镇痛等活性 2[, , ] 。 对结合 ,使 DP P H 的特征紫色消失 ,其褪色程度与其
在生态作用方面 ,松萝酸具有阻止生长 ,抗草食动物 所接受的电子数量成定量关系 , 因此可用分光光度
和昆虫等特性川 。 含有松萝酸的植物主要有松萝 法进行定量分析 。 对于松萝酸提取的方法 ,早有报
属 ( us en a) 、树花属 ( aR lan lian ) 、 树发属 ( A le c ot iar ) 、 道〔-70] ,但是 ,对于不同产地和不同种类地衣植物松
扁枝衣属 (忍泥爪 ia) 、 石蕊属 ( cla 面碗 ) 、茶渍属 (肠 一 萝中的松萝酸含量分析尚未见到 。 本试验通过对几
ca on ar )等属的地衣植物 。 其中松萝属的地衣资源 种不同松萝进行实地采样和松萝酸含量的提取分
丰富 ,松萝酸含量高 ,植株个体较大 ,便于采摘等特 析 ,并对松萝 95 % 乙醇提取物清除 D P H 自由基能
收稿日期 : 20 06 一n 一 修回日期 : 20 7一卜 10基金项目 :中日 ( N E DO )合作项目 ( 160 109 )
作者简介 :杨东升 ( 19 7 9一 ) , 男 , 四川简阳人 ,在读硕士 ,主要从事植物资源开发利用研究 。
· 通讯作者 :苏印泉 ( 19 5 4 一 ) ,男 , 陕西白水人 ,教授 ,主要从事植物资源开发利用 。 E 一m ial : sy 丫刃 9@ 12 6 . co m
西北林学院学报22 卷
力进行了尝试性研究 , 试验结果有一定的理论意义
和实用参考价值。
1 材料与方法
1
.
1 仪器与试剂
测试仪器主要使用 UV 一17 0 型紫外分光光度
计 ( 日本岛津 ) , UV20 0 型紫外分光光度计 (上海光
谱仪器厂 ) ,万分之一电子天平。
试验药品主要是松萝酸标准品 (含量 % % , 西
安高科实业股份有限公司天成生物公司提供 ) , D P -
P H (质量分数多 95 % , is gm a 产品 ) ,其它试剂均为分
析纯 。
1
.
2 材料
长松萝 ( sU en o lo 林g 砧 S im a) (采集于东北林业大
学凉水林场和西藏林芝色季拉山 ) ;环裂松萝 .U 鲜
尹配at (采集于东北林业大学凉水试验林场 ) ;粗皮
松萝 ( .U mo n r is -f 讨i ) 、 桦树松萝 ( .U b咖l i n a ) (采集
于西北农林科技大学宁陕火地塘教学试验实习林
场 ) ;亚花松萝 ( .U s “匆l o ir汉a an ) (采集于新疆喀纳斯
林区 ) 。 采集后阴干备用 。 将采集到的松萝根据形
态 、 细胞组织结构以及化学显色反应 ,参照地衣分类
学资料 [’ 。 一 lz] 和其它资料〔” ,川对照鉴定 ,得出所采样
品的学名 。
1
.
3 松萝酸含量的测定
1
.
3
.
1 最大吸收波长确定 将干燥恒重的松萝酸
对照品配制成 or m扩 L 的三氯甲烷溶液 。 置于石英
吸收池中 , 用 U V 一 17 0 型紫外分光光度计在波长
190
一 1 10 n m 范围内进行全波段扫描 ,最大吸收峰
出现在 2 84 n m 处 。
1
.
3
.
2 对照品溶液制备 精密称取松萝酸对照品
50 mg 于 50 m L 容量瓶中用三氯甲烷进行溶解定
容 ,用吸液管取 1 m L 于 25 m L 容量瓶中用三氯甲烷
进行稀释定容 ,再从 25 mL 容量瓶中准确吸取 2
.
5
mL 于 or m L容量瓶中稀释定容 ,备用 。
从上面的 25 m L 容量瓶中分别精确吸取 0 . 0 、
0
.
5
、
1
.
0
、
1
.
5
、
2
.
0
、
2
.
5
、
3
.
0
、
3
.
5 m L 三氯甲烷溶液
于 or mL 容量瓶中 ,稀释定容待测 [” o]
1
.
3
.
3 标准曲线绘制 用 u v 一 170 型紫外分光光
度计在 284 n m 处进行测定 。 浓度在 0 一 14 m岁L 范
围内线性关系良好 , 回归方程 A 二 0 . 0 79 4 C ,相关系
数 r = 0 . 999 7 。
1
.
3
.
4 供试品溶液制备 将松萝样品分别除去枯
枝枯叶和其他杂物 ,剪碎 , 置于 50 ℃ 真空干燥箱中
干燥 12 h 。 各精确称取 5 9 松萝样品 (每种 2 个重
复 )于 5 0 0 m L 圆底烧瓶中加人 9 5% 乙醇 t ’ 6 ] 2 0 0 m L
在 80 ℃水浴中提取 4 h ,趁热抽滤 。 然后再向残渣
中加人 150 m功 5% 乙醇进行第二次提取 ,时间 3 h ,
趁热抽滤 ,将同一个松萝样品的滤液合并 。 并浓缩
至 20 一 30 m L分别转人培养皿在常温下进行自然蒸
发干燥 ,再转人 50 ℃真空干燥箱中干燥 24 h 。 等样
品冷却后称重 。
将干燥好的松萝酸样品 (粗品 , 未经提纯 , 以免
松萝酸的损失 )分别称取 50 m g 放人 50 m L 容量瓶 ,
使用三氯甲烷进行溶解 、定容 、 摇匀 。 用移液管准确
量取 1 m L 三氯甲烷溶液转人 25 mL 容量瓶稀释 ,定
容 。 再从 25 mL 容量瓶中准确吸取 5 m L 于 or m L
容量瓶中稀释 ,定容 , 待测 。
1
.
3
.
5 含量测定 用 U V 一 17 0 型紫外分光光度
计 ,利用上面做好的松萝酸标准曲线进行测定 ,得到
了所测容量瓶中松萝酸的浓度 ,再利用公式 ( l) 进
行计算 。
松萝酸含量/ % = 松萝酸的浓度 x s / 10 x 25 令 50 x
lX() % ( l )
1
.
4 松萝提取物清除 D PP H 自由基的测定
1
.
4
.
1 试样的制备 将 1 . 3 . 4 干燥好的松萝提取
物经石油醚脱脂处理后 , 分别配制成 1 . 0 、 2 . 0 、 3 . 0 、
4
.
0
、
5
.
0
、
6
.
O m酬m L 的系列 95 % 乙醇溶液 ,备用 。
1
.
4
.
2 清除自由基能力的测定 D P P H 用少量的
无水乙醇溶解 , 制成 5 x lo 一 4 m ol · L 一 `的溶液 。 在
试管中依次加人 1 . 5 mL 5 x l o 一 4 m o l · L 一 ’ n PP H 溶
液和 1 . 5 m 9L 5% 乙醇 , 总体积为 3 . 0 m L , 混匀 20
im
n 后 ,使用 U V 2000 型紫外分光光度计于 1 。 m 比
色皿中测定 D ( s l 7 mn ) ,记为 D 。 ;加人 1 . 5 m L 5 x
10
一 ` m o l
·
L
一 ’ 的 D P P H 溶液和 1 . 5 m L 待测试样溶
液 ,测定值记为 sD ;加人 1 . 5 m L 体积分数为 95 % 的
乙醇和 1 . 5 m L 待测试样溶液 , 测定值为 rD , 按式
( 2) 计算 DP P H 自由基清除率。
清除率% 二 1 1 一 ( sD 一 rD ) + 那 } x 10 % (2 )
抗坏血酸清除 自由基能力采用清除 D PP H 的
cI 50值表示 。 将抗坏血酸配制成 0 . 5 / or 一 5 、 1 . o x
10
一 ’ 、 1
.
5 x l o
一 , 、 2
.
o x l o
一 , 、 3
,
o x l o
一 ,
g/ m L 的溶
液 ,测定抗坏血酸质量与 DP H 自由基清除率 ,并绘
制曲线读取 D PP H 自由基清除率为 50 % 时所需抗
坏血酸质量 ,按式 (3) 计算 cI 50 值 ,重复测定 2 次 ,平
均值即为测定结果 。 因此 , ,sC 。 的物理意义为 : 当达
到 50% 清除率时 , 单位质量抗坏血酸所清除 DP P H
的质量 [” ] 。
IC
S。 二 加人的 D PP H 质量 x 50 % : 试样溶液中溶质
质量 ( 3 )
2 结果与分析
从表 l 和表 2 松萝酸粗品提取量比较可知 ,东
第 4期 杨东升 等 几种松萝中松萝酸含量及提取物清除 D P H自由基能力的测定
北长松萝和西藏长松萝含量最高 ,其次是环裂松萝 、
亚花松萝和粗皮松萝 ,桦树松萝最低 ;从松萝酸的百
分含量来看 ,东北的长松萝和西藏的长松萝最高 ,其
次是亚花松萝 、 环裂松萝和桦树松萝 , 粗皮松萝最
低 。 对于同一个种来说 ,虽然西藏长松萝的松萝酸
粗品含量较高 ,但是松萝酸的百分含量却略低于东
北的长松萝 。 对于同一产地来说 ,东北的长松萝和
环裂松萝不管是粗品提取量还是松萝酸含量的差异
均很明显 , 而秦岭的粗皮松萝和桦树松萝只在粗品
量上有较大差异 ,在松萝酸的含量上差异不大 。
表 1 松萝酸粗品
Tab le 1 C ur de p耐 u e t of u s in e 耐 d g
血酸的 IC 50值 1 . 52 x lo 一 ’ ,说明松萝 95 % 乙醇提取
物清除自由基的能力不强 。
- 令一 长松萝 (西蔽 ) ~ 日于一
一望广门 环裂松萝 一书一 -
一州一 亚花松萝
长松萝 (东北 )
粗皮松萝 / `
on
ùO夕O肠
0
一“ù月犷6咤14
米弃渔澳
3 0
2 0
2 3 4 5 6
提取物浓度l( x lo 一、 · mL 一勺
花萝亚松树桦萝松粗皮萝松序号 长松萝
(东北 )
长松萝
(西藏 )
环裂
松萝
3
平均
0
.
8 6 7 4 0
.
9 37 1 0
.
7 94 9
0
.
87 7 8 0
.
9 1 2 9 0
.
8的 2
0
.
88 0 1 0
.
9 32 1 0
.
7 86 4
0
.
8 7 5 1 0
.
927 4 0
.
7 96 8
0
.
6 82 6 0
.
5 8 9 5 0
.
7 5 2 3
0
.
69 8 1 0
.
609 2 0
.
763 2
0
.
685 3 0
.
5 99 5 0
.
7 7 1 1
0
.
6 88 7 0
.
5 99 4 0
.
762 2
图 2 松萝提取物清除 D P H 自由基的能力
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2 仆 e DP PH 阮 e adr ie司 sc a ve n ig鳍 a e it v iyt of u sean
e xt la c t ive s
表 2 松萝酸的百分含盘
TalJ le Z eP 代 e们 t of u s n ie 即 id
松萝样品
980”73ù”1`i .n
长松萝 (东北 ) ( .U 肠昭如 i-
蕊萝 (西藏 ) .u( “咖“
戚松萝.u( 旬加以 )粗皮松萝 ( .U 州旧心七币乎)
桦树松萝 ( .U 脉以玄加 )
亚花松萝 ( .U 5 1峋而雌d o an )
%
平均 SR D
5
.
7 1 0
.
7
5
.
7 2
3
.
92
2
.
24
2
.
3 6
4
.
0 5
5
.
6 1
3
.
9 7
5
.
65
3
.
89
2
.
24
2
.
3 9
4
.
06
5
.
6 6
3
.
9 3
2
.
3 0
2
.
4 1
4
.
0 3
2
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3 9
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.
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抗坏血酸浓助 ( l x 1 0 一, g . m L 一 `)
3 结论与讨论
通过本试验得出 :长松萝是提取松萝酸的最佳
原料 ,东北的长松萝略优于西藏的长松萝 ; 在松萝
95 % 乙醇提取物清除 D P P H 自由基能力方面 , 几种
松萝提取物和抗坏血酸进行 比较 ,清除自由基的能
力均不强 。
西藏的长松萝虽然松萝酸含量略低于东北的长
松萝 ,但是粗品含量较高 ,说明西藏的长松萝中内涵
物质含量极为丰富 ,但这些物质主要是些什么成分 ,
有无更加有意义的药用及其他作用 ,还有待进一步
分析。 粗皮松萝的松萝酸含量约为长松萝 40 % ,但
粗品含量相差不太大 , 说明粗皮松萝中提取的其他
有机物质含量较高 ,它的成分 、活性还有待进一步深
人研究。 由于松萝 95 % 乙醇提取物主要是多酚类
化合物 ,只能说明松萝中的多酚类化合物在清除自
由基的能力方面不强 , 而松萝中还含有较多的地衣
多糖 、 异地衣多糖及其它物质 ,其清除自由基能力如
何 ,还有待进一步研究 。
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图 1 抗坏血酸的 D p H 清除率曲线
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e n g e D P P H 丘e e 耐 iea l
由图 1 可知 , 抗坏血酸在 0 . 5 x 10 一 , 一 3 . O x
10
一 ’ 岁mL 范围内浓度与 Dp p H 清除率之间基本呈
线性关系 。 线性方程为 y = 32 . 9 26 : , R = 0 . 990 7 。
由此可得抗坏血酸 I C二 = l . s l 8 5 6 x l o 一 ’扩m L 。
由图 2 可看出 ,松萝的 95 % 乙醇提取物都有一定的
清除自由基能力 ,能力最强的是粗皮松萝 ,其次是长
松萝 (东北 ) 、长松萝 (西藏 ) 和亚花松萝 ,最差的是
环裂松萝 。 和图 1 中的抗坏血酸进行 比较 , 每个松
萝提取物的 IC , 都在 3 . 0 、 10 一 ’ 以上 ,远远高于抗坏
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