全 文 ：书第 3 期 郑佳 等 金盏菊总黄酮提取工艺研究及含量测定
2014 年 9 月第 37 卷第 3 期 成都中医药大学学报
Sept. 2014，Vol. 37，No. 3 Journal of Chengdu University of TCM
中药研究
金盏菊总黄酮提取工艺研究及含量测定
郑佳 卢先明 易超宇 高必兴
(成都中医药大学，四川 成都 611137)
摘 要:目的:优选金盏菊总黄酮的提取工艺，建立金盏菊总黄酮含量测定的方法。方法: 以金盏菊
总黄酮提取率为指标，通过单因素考察，研究金盏菊总黄酮的最佳提取工艺; 并利用紫外分光光度法，以
芦丁为对照品，对 10 个不同产地以及同一产地不同采收期的金盏菊总黄酮进行含量测定。结果: 金盏菊
总黄酮最佳提取工艺为: 料液比 1∶ 50，提取温度 90℃，60%乙醇回流提取 1. 5 h; 10个不同产地的金盏菊
总黄酮含量为 2. 25%～4. 78%，平均含量为 3. 17% ; 初花期的金盏菊总黄酮含量最高，为 3. 58%。结论: 建
立了金盏菊总黄酮含量测定方法，此方法简单、准确、稳定、可靠，可作为金盏菊总黄酮的质量控制。
关键词:金盏菊; 总黄酮; 提取工艺; 含量测定; 不同产地; 不同采收期
中图分类号:Ｒ282. 4;Ｒ282. 71 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2014)03-0001-03
DOI编码:10. 13593 / j. cnki. 51-1501 / r. 2014. 03. 001
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划资助项目 ( 编号: 2007BAL10B07)
作者简介:郑佳，女，1987年生; 在读硕士研究生; 研究方向: 中药品种、品质与资源开发; E-mail: 623432246@ qq. com。
通讯作者:卢先明，男，1950 年生; 教授，博士生导师; 研究方向: 中药品种、品质与资源开发; E-mail: lxming1950@
126. com。
Study on Extraction Technology and Content Determination
of Total Flavonoids from Calendula officinalis. L
ZHENG Jia，LU Xian-ming，YI Chao-yu，et al
(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，611137，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extraction technology of total flavones from Calendula officinalis． L and establish its content
determination method． Methods:The single factor test were used to optimize extraction technology;Ｒutin was defined as the stand-
ard and UV method was adopted to determine the content of total flavonids of Calendula officinalis． L from 10 different areas and differ-
ent harvest time. Ｒesults:The results indicted that the optimum extraction process were described as follows:the solid / liquid ratio 1 g
∶ 50 mL，extracting temperature 90℃，ethanol volume scores 90 %，extracting time 1. 5 h ;the content of total flavonids of Calendu-
la officinalis． L from 10 different areas was 2. 25% ～ 4. 78%，averaging 3. 17%;the content of total flavonids is the highest at the
beginning of flowering，3. 58%. Conclusion:The method is simple，accurate，stable，reliable and can be used for quality control of
Calendula officinalis. L.
［Key Words］ Calendula officinalis. L;total flavonids;extraction process;content determination;different areas;different
harvest time
金盏菊为菊科植物金盏菊 (Calendula officina-
lis. L)的全草。原产于埃及和欧洲南部［1］，现在
全球广泛种植，再生资源丰富，我国各地均有栽
培。金盏菊不仅在食品和化妆品行业被广泛应用，
·1·
成都中医药大学学报 2014 年第 37 卷
而且在欧洲的医学、药学和植物学史上也起着举足
轻重的作用［2-3］。早在欧洲中世纪，金盏菊就被用
于治疗静脉曲张、褥疮和皮肤病，长期以来以药膏
的形式用于各种急救处理［3］。在我国，金盏菊作
为一种民间药用于中耳炎、月经不调等疾病的治
疗［4］。有研究表明，金盏菊含有类黄酮、三萜皂
苷等活性物质［5］。黄酮类化合物具有广泛的药理
活性，如抗炎、抗氧化、镇痛、保肝等作用。目
前，国内对金盏菊的研究主要在色素提取方面，而
对金盏菊总黄酮的研究未见报道。金盏菊药用历史
悠久，资源丰富，为使这一资源得到合理开发利
用，本文考察了金盏菊总黄酮的提取工艺，并测定
了 10 个不同产地以及同一产地不同采收期的金盏
菊总黄酮含量，为进一步开发金盏菊资源提供科学
依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
UV-1700 型紫外-可见分光光度计，岛津制作
所分析计测事业部;万分之一电子天平 (德国
Sartorius BP121s);十万分之一电子天平 (德国
Sartorius BP211D);DZKW-4 电子恒温水浴锅 (北
京中兴伟业仪器有限公司);超声波清洗器 (昆山
市超声仪器有限公司，KQ5200E)。
1. 2 试药
金盏菊购于湖北宜昌、成都郫县等 10 个不同
产地，经成都中医药大学卢先明教授鉴定为菊科植
物金盏菊 Calendula officinalis. L 的全草;芦丁对照
品 (中国食品药品检定研究院 100080-200204)无
水乙醇，95%乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化
钠。
2 方法与结果
2. 1 金盏菊总黄酮的含量测定
2. 1. 1 对照品溶液的制备
取芦丁对照品 25 mg，精密称定，置 50 mL 容
量瓶中，加 60%乙醇适量，超声处理使溶解，放
冷，加 60%乙醇至刻度，摇匀。精密量取 20 mL，
置 50 mL 容量瓶中，加 60%乙醇至刻度，摇匀，
即得每 1 mL中含无水芦丁 0. 2 mg的芦丁对照品标
准溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备
取本品粉末 (过二号筛)1 g，精密称定，置
具塞三角瓶中，精密加入 60%乙醇溶液 50 mL，精
密称定，加热回流 1. 5 h 后，自然放冷，补重，过
滤，取 1 mL滤液于 25 mL 容量瓶中按 2. 1. 3 项下
显色处理进行总黄酮含量测定。
2. 1. 3 测定波长的选择
精密吸取芦丁对照品溶液 4 mL 于 25 mL 容量
瓶中，加 5%的亚硝酸钠溶液 1 mL，摇匀，放置
6 min;加 10% 硝酸铝溶液 1 mL，摇匀，放置 6
min;加氢氧化钠试液 10 mL，摇匀，再加 60%乙
醇至刻度，摇匀，放置 15 min;另取一个 25 mL容
量瓶不加对照品，同法制得空白对照品。以空白作
参比，于 400 ～ 600 nm 波长范围内扫描，在 508
nm处有最大吸收波长，故选 508 nm为测定波长。
2. 1. 4 标准曲线的制作
精密量取芦丁对照品溶液 0 mL、1 mL、2 mL、
3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL，分别置 25 mL
容量瓶中，各加 60%乙醇至 7 mL，按 2. 1. 3 项下
方法操作，在 508 nm 波长处测定吸光度，以吸光
度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到
回归方程 A =11. 921C-0. 0012，结果表明芦丁对照
品在 0 mg /mL ～ 0. 056 mg /mL 范围内线性关系良
好。
2. 1. 5 精密度实验
精密移取芦丁对照品溶液 4. 0 mL于容量瓶中，
按 2. 1. 3 项下显色方法显色，连续测定 6 次，ＲSD
= 0. 106%，表明仪器精密度良好。
2. 1. 6 稳定性实验
取最优工艺条件下的样品溶液，按 2. 1. 3 项下
显色后，每隔 15 min 测定其吸光度，共测定 90
min，ＲSD = 0. 771%。表明该显色反应在 90 min内
稳定。
2. 1. 7 重复性实验
取同一批次样品 6 份，按供试品制备法及显色
法测定，计算总黄酮含量，ＲSD = 1. 385%，表明
重复性好。
2. 1. 8 回收率实验
取同一批次已知黄酮含量的金盏菊粉末 6 份，
每份 0. 2 g，精密称定，各精密加入芦丁对照品
4. 5 mg，按照供试品溶液制备方法及显色方法操
作，测定总黄酮含量，计算回收率，结果平均回收
率 = 98. 05%，ＲSD = 1. 86%。见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
编号
称样
量 (g)
样品中含
量 (mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率 (%)
ＲSD
(%)
1 0. 2007 4. 600 4. 5 9. 068 99. 29
2 0. 2006 4. 598 4. 5 8. 900 95. 61
3 0. 2008 4. 602 4. 5 8. 942 96. 45
4 0. 2007 4. 600 4. 5 8. 984 97. 43
5 0. 2006 4. 598 4. 5 9. 068 99. 33
6 0. 2008 4. 602 4. 5 9. 110 100. 18
98. 05 1. 86
·2·
第 3 期 郑佳 等 金盏菊总黄酮提取工艺研究及含量测定
2. 2 金盏菊总黄酮的提取工艺优选
2. 2. 1 提取溶剂对总黄酮提取率的影响
采用料液比 1∶ 40 (g /mL)，超声提取 1 h，考
察不同浓度乙醇对黄酮提取率的影响，见图 1。结
果表明，黄酮提取率随乙醇浓度的升高先增加后降
低，当乙醇浓度为 60%时，黄酮提取率最高，故
选 60%乙醇作为提取溶剂。
图 1 乙醇体积分数对黄酮提取率的影响
2. 2. 2 提取方法对总黄酮提取率的影响
采用料液比 1∶ 40 (g /mL)，60%乙醇提取1 h，
考察不同提取方法对黄酮提取率的影响，见表 2。
结果表明，回流提取优于超声提取，故选回流作为
提取黄酮的方法。
表 2 提取方法对黄酮提取率的影响
提取方法 超声提取 回流提取
吸光度 (A) 0. 424 0. 486
黄酮提取率 (%) 3. 58 4. 08
2. 2. 3 提取温度对金盏菊总黄酮提取率的影响
采用料液比 1∶ 40 (g /mL)，60%乙醇提取1 h，
考察不同温度对黄酮提取率的影响，见图 2。结果
表明，黄酮提取率随温度升高而增加，温度低于
90℃时，温度对黄酮提取率影响比较大，高于
90℃增加不明显，故选 90℃作为提取温度。
图 2 提取温度对黄酮提取率的影响
2. 2. 4 提取时间对金盏菊总黄酮提取率的影响
采用料液比 1 ∶ 40 (g /mL)，温度为 90℃，
60%乙醇提取，考察不同提取时间对黄酮提取率的
影响，见图 3。结果表明，在 1. 5 h 时，黄酮提取
率最高，故选 1. 5 h作为提取时间。
2. 2. 5 料液比对金盏菊总黄酮提取率的影响
采用提取时间 1. 5 h，温度 90℃，60%乙醇提
取，考察不同料液比对黄酮提取率的影响，见图
4。结果表明，当料液比在 1 ∶ 50 (g /mL)时黄酮
提取率最高，故选 1∶ 50 (g /mL)作为黄酮提取的
料液比。
图 3 时间对黄酮提取率的影响
图 4 料液比对黄酮提取率的影响
2. 3 不同产地金盏菊总黄酮的含量测定。
按最优工艺对 10 个不同产地的金盏菊进行总
黄酮的含量测定。
编
号
采收时间 采收地点
总黄酮
含量
(%)
平均
值
(%)
1 2013. 03. 08 郫县新民场镇 3. 47
2 2013. 02. 15 宜宾县赵场 2. 29
3 2013. 03. 08 郫县唐元镇 2. 81
4 2013. 03. 08 郫县太平村 2. 77
5 2013. 03. 21 彭州丽春镇合江村 4. 78
6 2013. 03. 21 彭州君平街 2. 25
7 2013. 02. 28 成都中医药大学温江校区 3. 34
8 2013. 03. 10 双流县牧马山 3. 00
9 2013. 04. 12 金林湾花市 2. 55
10 2013. 02. 26 湖北宜昌 4. 44
3. 17
2. 4 同一产地不同采收期金盏菊总黄酮的含量测
定
按最优工艺对同一产地不同采收期的金盏菊进
行总黄酮的含量测定。
编号 采收时间 含量 (%) 生长状态
1 2013. 02. 28 3. 19 花蕾期
2 2013. 03. 15 3. 58 初花期
3 2013. 03. 31 3. 02 盛花期
4 2013. 04. 15 2. 59 盛花期
5 2013. 04. 30 1. 71 果期
6 2013. 05. 15 2. 96 果熟期
( 下转第 7 页)
·3·
第 3 期 李晨晨 等 正交试验法优化美洲大蠊糖蛋白的提取工艺
13. 38，13. 53，13. 43 mg /g;蛋白质含量为 18. 81，
19. 37，19. 41 mg /g，表明该提取工艺合理、稳定、
可行。
3 讨论
良好的提取工艺是中药更好发挥药效的前提，
本实验以蛋白质和多糖含量为指标，运用单因素、
正交实验对水提的工艺条件进行优化;而干膏得率
也是提取过程中的重要评价指标，因此将美洲大蠊
糖蛋白含量，干膏得率分别作为考察指标，这样可
以更为全面、准确地优化提取工艺。
进行单因素考察可知，溶剂量对指标性成分影
响不大，提取时间选用 0. 5，1，1. 5，2 h 来考察
时间对指标成分的影响，结果表明提取 1 h 指标性
成分基本已全部提取，提取 2 h 指标性成分有减小
的趋势，可能是随着时间的推移，药材有反吸附蛋
白质类成分的可能，因此提取时间过长不仅耗时，
而且可能导致指标性成分减少。提取次数对指标性
成分的影响较大，最佳提取次数为 3 次。在单因素
的基础上采用正交试验，结合生产实际情况，确定
最佳提取工艺为 :提取 3 次，1 h /次，溶剂量为
12 倍量。
采用热回流法提取美洲大蠊糖蛋白，收率高，
操作简单、对设备要求低等优势。本实验以蛋白质
和多糖含量、干膏得率为指标进行优化，结合单因
素和正交试验，得到最佳提取工艺，优选的工艺稳
定可行，为美洲大蠊的进一步开发提供参考。
参考文献
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的研究 ［D］． 广东海洋大学，2008．
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北京:中国医药科技出版社，2010:附录 53-54．
(收稿日期:2013-11-21 责任编辑:薛红
檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵
)
( 上接第 3 页)
3 讨论
本文综合考察了溶剂浓度、提取方法、温度、
时间、料液比等因素对金盏菊总黄酮提取率的影
响，确定了最佳提取工艺，即 60%乙醇，料液比 1
∶ 50，温度 90℃，回流提取 1. 5 h。
在最佳提取工艺基础上，对 10 个不同产地的
金盏菊进行了总黄酮含量测定，其含量为 2. 25%
～4. 78%。其中以彭州丽春镇合江村所采样品中总
黄酮含量最高，彭州君平街所采样品中总黄酮含量
最低，其他产地总黄酮含量参差不齐，可能与其生
长环境及采收期等因素有关。
文献记载四川地区金盏菊采收期为春夏季，但
实地调查发现金盏菊怕热，不宜在夏季生长。故课
题组对金盏菊采收期考察时间选为春季。通过实验
发现，金盏菊黄酮含量在初花期时最高，这可作为
金盏菊质量控制的参考依据。
金盏菊资源丰富，药用历史悠久，既是国际传
统药又是民间药，但其药用价值尚未得到合理开发
利用。本文重点研究了金盏菊总黄酮的提取工艺以
及测定了不同产地产及同一产地不同采收期金盏菊
总黄酮的含量，为金盏菊的进一步开发利用提供了
科学的依据。
参考文献
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(收稿日期:2013-08-19 责任编辑:薛红)
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