全 文 ：蜜环菌抗杂分离及快速培养技术
邓明贵
(贵州省威宁县东风镇收发室 , 553103)
文章编号　1000-8357(2005)01-0022-01
蜜环菌分离有三种方法 ,其中子实体组织分离较容易 , 菌
索分离和菇本分离污染大 ,分离成功率极小。为此 , 笔者经几
年的试验 ,对抗杂药物进行筛选 , 采取特殊的培养技术提高了
分离成功率 ,并在此基础上探索出蜜环菌的快速培养技术 , 缩
短了制种周期。有效解决了生产上制种周期长造成的菌龄悬
殊 ,转管移植成活率低的难题。现将该技术简介如下:
1　培养材料
1.1　分离菌种　幼嫩的蜜环菌索和长有蜜环菌的菇木 。
1.2　培养基配方　①马铃薯 200g , 葡萄糖 18g , KH2PO4 3g ,
琼脂 22 ～ 24g。四环素粉 50mg , 水 1 000m L , pH 自然。 ②新
鲜豆腐 100g , 葡萄糖 18g , KH2PO 4 3g , 琼脂 22 ～ 24g , 四环素粉
50mg ,水 1 000mL , pH 自然。 ③其它适合蜜环菌生长的培养
基均可。
1.3　培养基制备　马铃薯切片煮沸 15 分钟后过滤 , 取滤液
加热 ,再加入琼脂充分熬化 , 最后加入葡萄糖 、KH2PO 4、四环
素三者的混合液 ,拌搅均匀 ,补水至 1 000mL , 趁热分装试管 、
塞上棉塞 , 置高压锅中在 1.1kg/ cm2 下灭菌 30min , 冷却后取
出摆斜面备用(最好采用三角瓶分装)。配方中放豆腐的要将
豆腐先煮一下 ,过滤取滤液 , 其余操作同前。此法制得的培养
基略带黑色 ,属正常现象 , 对菌丝生长无不良影响。
2　分离技术
2.1　培养基的处理　用作分离的培养基必须无冷凝水 , 以抑
制细菌的繁殖。处理方法:把培养基放在 40℃的温箱中烘烤
使冷凝水蒸发 ,或放置自然蒸发。
2.2　分离菌种的选择　菌索分离 , 选棕红色幼嫩的菌索;菇
木分离 ,选菌丝发育好 、木材结实未腐烂的种木 , 切取一小段 ,
让其自然风干后再用作分离 ,以减少杂菌的污染程度。
2.3　分离菌种的消毒　菌索分离 , 先用无菌水反复冲洗 , 用
无菌滤纸吸干后备用。注意不要弄破菌索表皮 , 以免杂菌孢
子从伤口处进入造成污染隐患。 菇木分离 , 切取菇木中心组
织块置四环素溶液中浸泡片刻 , 让菇木导管中渗入四环素溶
液杀灭细菌孢子。低浓度的四环素能抑制细菌的生长 , 但不
影响蜜环菌生命力。
2.4　接种培养　把处理好的菌索或菇木置无菌箱内接种。
菌索分离 ,把菌索放在 0.1%的升汞溶液中浸泡 15s(秒), 取出
用无菌水冲洗掉药液后 , 置 0.5%的四环素溶液中浸一下 , 取
出用无菌滤纸吸干 ,用无菌剪去掉菌索两端 ,保留 1 ～ 2cm 长 ,
每瓶接种 1 ～ 2 段。菇木分离法 , 用无菌水冲洗掉四环素药
液 ,再置 0.1%的升汞溶液中浸泡 1min ,取出后用无菌水洗净
药液 ,用无菌纸吸干后每瓶接入一小块菌种。 避光培养温度
控制在 18～ 20℃, 以低温抑制杂菌的萌发。
2.5　分离菌株纯化　当菌丝或菌索萌发生长至离接种块
1cm 以上时 ,在无菌条件下切取菌丝先端或菌索先端接种 , 观
察菌株是否纯化 , 若未纯化需再次纯化。
3　快速培养技术
3.1　菌种的选择　选择生长健壮 、菌龄短 、无杂的纯化菌种。
3.2　培养基的处理　培养基应随配随用 ,培养基上须有冷凝
水以利蜜环菌的接种。
3.3　接种培养　在无菌条件下切取菌丝或菌索 , 挑放在培养
基的冷凝水中 , 转动瓶(管)使接种块跑到裸露无培养基的玻
璃上时 ,用接种铲反复碾成碎末 ,使菌丝碎末充分与冷凝水混
合。塞上棉塞 ,转动瓶(管)使冷凝水均匀分布在培养基表面 ,
此法注意不要划破培养基表面 , 以利观察菌丝的生长。 接种
后避光培养 ,温度控制在 25℃, 1 周后菌丝长满斜面 , 即可用
于生产。
4　结　论
4.1　抗杂分离技术　①四环素和升汞的轮换使用可显著提
高分离成功率。四环素用量小(30mg/ L), 灭菌后效果不变 ,抑
制细菌效果极好 , 对菌比生长无不良影响 , 原料成本低 , 制作
方便。升汞抑制有害真菌效果好。 二者轮换使用可取长补
短。 ②低温培养利于蜜环菌菌丝生长而不利于杂菌的萌发。
③选用无冷凝水培养基更能抑制细菌的萌发。
4.2　快速培养技术　利用菌丝碎末在冷凝水中的流动性接
种 ,菌丝萌发快 , 萌发点多 ,菌龄一致 , 提前长满料面。此法适
用于母种 、原种及生产种的培养。
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食用菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　EDIBLE　FUNGI　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2005(1)