全 文 ：2013 年 7 月
第 4 期
浙 江 外 国 语 学 院 学 报
JOUＲNAL OF ZHEJIANG INTEＲNATIONAL STUDIES UNIVEＲSITY
July 2013
No． 4
收稿日期:2013 － 06 － 17
课题项目:浙江省大学生科技创新项目(2012Ｒ418003)
作者简介:李园(1991 －) ，女，浙江桐庐人，浙江外国语学院科学技术学院化学系应用化学专业 2009级本科生;倪筱莉(1990 －) ，女，
浙江杭州人，浙江外国语学院科学技术学院化学系应用化学专业 2009 级本科生;汪东琴(1989 －) ，女，浙江桐乡人，浙江外国语学院
科学技术学院化学系应用化学专业 2009 级本科生．
* 通讯作者:朱妙琴(1963 －) ，女，浙江永康人，浙江外国语学院科学技术学院化学系教授．
绞股蓝茶提取液中黄酮类物质测定方法改进
李 园，倪筱莉，汪东琴，朱妙琴*
(浙江外国语学院 科学技术学院，浙江 杭州 310012)
摘 要:为了改进植物提取液中黄酮类物质含量的测定方法，将过滤法及静置沉淀法应
用于测定过程中，并比较了这两种方法的测定结果．结果表明:(1)过滤法及静置沉淀法应用
于测定绞股蓝提取液中的黄酮类物质，能有效提高测量结果的稳定性，且准确度较高，重现
性良好．(2)与过滤法相比，静置沉淀法操作更为简单，准确性更高，稳定性更好．
关键词:绞股蓝;黄酮;过滤法;静置沉淀法
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:A 文章编号:2095 －2074(2013)04 －0016 －03
目前，植物提取物中黄酮类物质含量的测定一般采用传统的紫外分光光度法［1］、一阶分光光度
法［2］、高效液相色谱［3］(High Performance Liquid Chromatography，下文简称 HPLC)法和荧光法［4］857-859
等．而比色法是一些药典经常采用的测定方法．
HPLC法测定总黄酮含量需要知道所测物中最主要的物质成分，且需要相应的标准品进行对照，因而用
HPLC法测定植物提取液中总黄酮含量不太容易．紫外分光光度法简单易行，对设备要求低，因此它是测定
黄酮类物质含量最常用的方法．该法在测定过程中会出现一些红色絮状的螯合物，影响测定结果的稳定性，
因而有必要对其进行优化．刘江 和周荣琪［5］76-78将过滤法应用到植物提取液中黄酮含量测定，提高了测量
结果的稳定性，但操作步骤较麻烦．本文拟比较静置沉淀法和过滤法对绞股蓝茶提取物中黄酮类物质测定
结果的影响，从而为改进植物提取液中黄酮类物质含量的测定提供依据．
1 实验部分
1. 1 仪器与材料
仪器:CP1502 电子天平，DKS-24 电子恒温水浴锅，HY-3A 多功能振荡器(江苏金坛) ，UV-
1900PPU紫外可见分光光度计．
材料:绞股蓝茶(湖南南山) ，芦丁标准品(阿拉丁化学有限公司生产的芸香苷，含量为 98%)．其
它试剂均为分析纯．
1. 2 实验方法
1. 2. 1 测定原理及标准曲线的制作
硝酸铝(Al(NO3)3)显色法测定黄酮类物质含量的原理为:在中性或弱碱性及 NaNO2 存在的条件
下，黄酮类化合物与铝盐生成配合物，加入 NaOH 溶液后显红橙色，在 510nm 波长处有吸收峰且符合
比尔定律，以芦丁标准品定量．先用 NaNO2 还原黄酮，然后加入 Al(NO3)3 络合，最后加 NaOH 溶液使
黄酮类化合物开环，生成 2 -羟基查耳酮而显色．显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚
羟基部位，不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时不显色［6］．
参考文献［5］的方法，用 10mL移液管准确吸取 1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL、5. 0mL 的 11. 5mg /
100mL芦丁标准液分别置于 25mL 的比色管中． 用 50% 的乙醇溶液补充至约 5mL，分别加 5% 的
NaNO2溶液 0. 3mL，摇匀，放置 6min;再加 10%的 Al(NO3)3 溶液 0. 3mL，摇匀，放置 6min，最后加入
1mol /L的 NaOH溶液 4mL，用水稀释到 10mL，放置 20min，在 510nm 处测定过滤前后吸光度，以吸光
度 A为纵坐标，浓度 c(mg /mL)为横坐标，绘制标准曲线．
1. 2. 2 绞股蓝茶提取物中黄酮类物质的提取与测定
参考文献［4］方法，分别称取 2. 0g 绞股蓝茶于锥形瓶中，加入 10mL石油醚在 200Hz频率下振荡
30min脱脂、过滤．在滤渣中加入 50%的乙醇 30mL，振荡 30min，过滤，收集滤液于 100mL的容量瓶中．
重复此操作 3 次，将滤液合并于 100mL的容量瓶中，用 50%的乙醇定容至 100mL备用．按照 1. 2. 1 所
述方法测定绞股蓝茶提取物中黄酮类物质含量．
2 结果与讨论
2. 1 过滤前后芦丁标准曲线测定
按 1. 2. 1 方法，测得芦丁标准曲线数据见表 1．
表 1 芦丁浓度与吸光度之间的关系
浓度(mg /mL) 过滤前吸光度 过滤后吸光度 吸光度差值
0. 0115 0. 0143 0. 0134 0. 0009
0. 0230 0. 0245 0. 0235 0. 0010
0. 0345 0. 0336 0. 0328 0. 0008
0. 0460 0. 0439 0. 0418 0. 0021
0. 0575 0. 0517 0. 0511 0. 0006
过滤前标准曲线的回归方程:C1 = 1. 0080A1 － 0. 0066，相关系数为 Ｒ2 = 0. 9995，式中 C1 为芦丁浓
度(mg /mL) ，A1 为吸光度．过滤后的回归方程:C2 = 1. 2268A2 － 0. 0054，相关系数 Ｒ2 = 0. 9996．从表 1
数据知，滤纸的吸附作用对结果有一定影响，芦丁含量的测定结果比过滤前偏低．
2. 2 重复性和准确性的检验
用过滤法分别测定了绞股蓝茶提取物液中黄酮类物质的含量，结果见表 2．
表 2 过滤法测定绞股蓝茶提取物中类物质含量(mg /mL)
1 2 3 4 平均值 标准差 系变异数(%)
绞股蓝茶 0. 02656 0. 02689 0. 02681 0. 02721 0. 02640 0. 00023 0. 9
由表 2 可知，测定结果重现性较好，虽然表格中的数据浓度非常低，但是变异系数也是非常低的，
基本能够满足定量测定的要求．
另外，分别吸取了1. 5mL、2. 5mL、3. 5mL和4. 5mL芦丁标准液加入25mL比色管中，依照过滤法标准曲线的
测定方法，测定了其试液的吸光度，并与按回归方程:C2 =1. 2268A2 －0. 0054得到的计算值一同列入表3中．
表 3 标准曲线的准确度检验
芦丁溶液实际
浓度(mg /mL) 吸光度
按［C2—A2］方程
计算的浓度(mg /mL)
绝对误差
(mg /mL)
相对误差
(%)
0. 01725 0. 01650 0. 01784 0. 00059 3. 42
0. 02875 0. 03100 0. 02966 0. 00091 3. 17
0. 04025 0. 04090 0. 03776 0. 00252 － 6. 26
0. 05175 0. 05720 0. 05101 0. 00074 － 1. 44
71第 4 期 李 园，倪筱莉，汪东琴，朱妙琴:绞股蓝茶提取液中黄酮类物质测定方法改进
由表 3 可知，过滤法得到的标准曲线的准确度较高，能够满足实际的需要．
2. 3 静置沉淀法对芦丁测定的影响
在实验过程中，发现采用过滤法测定吸光度的工作量较大，所耗费的时间较长．观察到实验过程
中加入 NaOH，静置约 30min，螯合物会沉淀于比色管底部这一现象．因而实验中直接用吸管吸取上层
清液来测定吸光度．最后将待测液静置 30min，重新测定各个浓度试液的吸光度，结果见表 4．
表 4 芦丁浓度与吸光度之间的关系
浓度(mg /mL) 过滤后的吸光度 沉淀静置后的吸光度 吸光度差值
0. 0115 0. 0134 0. 0141 0. 0007
0. 0230 0. 0235 0. 0243 0. 0008
0. 0345 0. 0328 0. 0332 0. 0004
0. 0460 0. 0418 0. 0431 0. 0013
0. 0575 0. 0511 0. 0520 0. 0009
表 4 数据表明:采用静置沉淀法，消除了过滤法中滤纸的吸附作用，测定结果更加准确．根据静置
沉淀的吸光度值对应芦丁浓度可以得一条标准曲线，线性关系良好(见图 1)． 回归方程为:C3 =
1. 2150A3 － 0. 0060，相关系数 Ｒ2 = 0. 9995．
图 1 静置沉淀法得到的芦丁标准曲线
2. 4 过滤法和静置沉淀法测定结果比较
实验采用过滤法和静置沉淀法分别测定了两份绞股蓝茶提取物中黄酮类物质含量，结果见表 5．
表 5 过滤法和静置沉淀法测定结果比较
绞股蓝茶提取液 1中黄酮
类物质含量(mg /mL)
绞股蓝茶提取液 2 中黄酮
类物质含量(mg /mL)
过滤法 0. 02636 0. 02666
静置沉淀法 0. 03619 0. 03643
从表 5 中数据可以看出，过滤法测定结果比静置沉淀法测得结果稍低，可能的原因是滤纸的吸附
作用．
3 小 结
(1)过滤法和静置沉淀法应用于紫外分光光度法测定绞股蓝茶提取液中黄酮类物质含量，可以提
高测定的准确度，稳定性、重现性良好．
(2)与静置沉淀法比较，过滤法工作量较大，测定结果偏低．而静置沉淀法应用于紫外分光光度法
测定绞股蓝茶提取液中的黄酮类物质含量，操作简单、易行，准确度更高、稳定性更好．
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(下转第 22 页)
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Emulsifier Influence on the Stability of Wax Emulsion
HUANG Yicao，SHAO Guoqiang
(School of Science and Technology，Zhejiang International Studies University，Hangzhou 310012，China)
Abstract:With Span-80，Tween-80 and SDS as compound emulsifier，the effects of emulsifier choice，
dose and proportion were investigated． The experiment showed that stable PE wax emulsion could be prepared
at the emulsifier dose of 20%，emulsifying time of 90 min at 85℃ and stirring at 1000 r /min．
Key words:PE wax emulsion;emulsifier;
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
stability
(上接第 18 页)
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Developing the Method of Determining Total
Flavonoids in Gynostemma Tea Extract
LI Yuan，NI Xiaoli，WANG Dongqin，ZHU Miaoqin
(School of Science and Technology，Zhejiang International Studies University，Hangzhou 310012，China)
Abstract:The method of determining total flavonoids in Gynostemma tea extract was developed in this
theis． By using the method of filtering and static precipitation in the determination of total flavonoids in Gy-
nostemma tea extract，the result shows:(1)the two methods improve the stability of total flavonoids in Gy-
nostemma tea extract obviously． The precision and the repetition of results are fairly good;(2)the static pre-
cipitation method is more precise，stable and simple compared with the filtering method．
Key words:Gynostemma tea;total flavonoids;filtering method;static precipitation method
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