全 文 ：食用菌学报２０１３．２０（１）：８９～９２
收稿日期：２０１３－０１－１２原稿；２０１３－０２－０４修改稿
基金项目：国家科技支撑课题（编号：２０１３ＢＡＤ１６Ｂ０８－０２）的部分研究内容
作者简介：张　忠（１９８３－），男，２０１１年毕业于上海大学化学系有机化学专业，硕士，研究实习员，主要从事药用真
菌的研究与开发。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｑｉｎｇｊｉｕ２００３＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
文章编号：１００５－９８７３（２０１３）０１－００８９－０４
金耳多糖含量测定方法
张　忠，唐庆九＊，周　帅，张劲松，杨　焱，刘艳芳，唐传红
（上海市农业科学院食用菌研究所，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心，
国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海２０１４０３）
摘　要：以苯酚－硫酸法测定多糖含量，比较分析金耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａ　ａｕｒａｎｔｉａ）子实体样品的预处理效果和多糖提取
方法。确定样品经预处理即８５％乙醇中超声（室温，３０　ｍｉｎ）洗涤２次，在料液比１∶５００（ｇ／ｍＬ），提取温度１００℃，
提取时间２　ｈ的优化提取条件下，测定多糖含量准确性高、重现性好、结果可靠，适用于金耳多糖含量的测定。
关键词：金耳；多糖；子实体
　　金耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａ　ａｕｒａｎｔｉａ），隶属于担子菌纲
（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ），银耳目（Ｔｒｅｍｅｌａｌｅｓ），与其伴
生菌毛韧革（Ｓｔｅｒｅｕｍ　ｈｉｒｓｕｔｕｍ）菌丝共同形成大
型担子果，担子果呈脑状、金黄色，故又名黄金银
耳、脑耳等，是一种名贵的食、药用真菌［１］。金耳
胶质细腻，清润可口，具有化痰、止咳、定喘、调
气、平肝阳之功效，具有很高的营养价值［２，３］。据
文献报道，金耳多糖主要具有增强免疫、降血糖、
降血脂、抗肿瘤、抗血栓等作用［４，５］。
多糖作为金耳的主要生理活性成分之一，受
到了国内外学者越来越多的关注［６，７］。但是对金
耳多糖含量测定方法的研究却少有报道。与其
它药用真菌相比，金耳中多糖含量丰富［８］，采用
一般食用菌多糖处理方法得到的提取液非常粘
稠，不适用于多糖含量测定，因此有必要优化金
耳多糖测定的样品预处理和多糖提取的方法。
根据文献报道［９，１０］，食用菌中含有影响多糖
含量测定的干扰物质如海藻糖等，笔者尝试先去
除干扰物质，再进行含量测定，并进行方法学考
察，以建立精确的金耳多糖含量测定方法，为合
理开发和利用金耳资源奠定基础。
１　材料与方法
１．１原料
　　云南野生金耳（Ｔ．ａｕｒａｎｔｉａ）子实体（Ｔ１）购
自云南天之蕈野生食用菌有限公司，四川人工栽
培金耳子实体（Ｔ２）购自攀枝花彝人菌物有限公
司，西藏野生金耳子实体（Ｔ３）购自西藏波密农
牧资源有限公司。
１．２试剂与仪器
　　５０％ ＮａＯＨ溶液，德国 Ｍｅｒｃｋ公司；葡萄糖
（标准品），美国Ｓｉｇｍａ公司；色谱级甲醇，美国
Ｄｉｋｍａ公司；分析纯无水乙醇、分析纯苯酚和
９８％浓硫酸，国药集团药业股份有限公司。
Ｄｉｏｎｅｘ　ＩＣＳ２５００型离子色谱仪（戴安Ｄｉｏｎｅｘ
ＩＣＳ２５００系统，包括：ＧＳ５０四元梯度泵、ＬＣ３０柱
温箱、ＥＤ５０Ａ电化学检测器、脉冲安培检测器）、
ＣａｒｂｏＰａｃ　ＭＡ１阴离子交换柱，美国戴安公司；
Ｗａｔｅｒｓ　６００高效液相色谱仪（２９９６型二极管阵列
检测器），美国 Ｗａｔｅｒｓ公司；Ｓｙｎｅｒｇｙ　ＨＴ９６孔板
酶标仪，Ｂｉｏ－ＴＥＫ公司。
１．３金耳子实体的预处理
　　样品Ｔ１置于烘箱６５℃干燥２４ｈ后，再经过
粉碎机粉碎成１００目细粉，得样品“Ｔ１－１”。准确
称取１００．００ｍｇ样品Ｔ１置于５０ｍＬ离心管中，
加入 ８５％ 乙醇 ２５ ｍＬ，充分混匀，室温超声
３０ｍｉｎ，过滤；滤渣再经８５％乙醇洗涤１次置于
烘箱６５℃干燥后得样品“Ｔ１－２”待用。
１．４预处理前后金耳子实体多糖含量测定
１．４．１葡萄糖标准曲线的绘制
　　葡萄糖标样于１０５℃下干燥至恒重后，参照
文献方法［１１］于４９０ｎｍ处测定吸光度值，绘制标
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2013.01.010
食　用　菌　学　报 第２０卷
准曲线。
１．４．２总糖含量测定
　　分别称取预处理前、后云南金耳子实体样
品“Ｔ１－１”和“Ｔ１－２”１００ｍｇ，置于５０ｍＬ离心管
中，加蒸馏水２５ｍＬ，摇匀，静置１ｈ，然后放入
１００℃的恒温水浴锅提取２ｈ，取上清液１．０ｍＬ
放入２．０ｍＬ离心管中，１３４００　ｇ离心１０ｍｉｎ，取
上清液加蒸馏水稀释至０．１ｍｇ／ｍＬ左右作为
供试液。准确量取供试液１．０ｍＬ置于１５ｍＬ
试管中，采用苯酚硫酸法［１１］测定总糖含量，重复
３次。
１．４．３甘露醇、海藻糖、阿糖醇含量测定
　　分别取样品供试液“Ｔ１－１”和“Ｔ１－２”１ｍＬ，
去离子水定容至２５ｍＬ。样品悬浮液稀释２０
倍，过０．２２μｍ 微孔滤膜上机测定。采用周
帅［１２］等建立的高效阴离子色谱法进行糖醇和寡
糖的测定。
１．５金耳子实体多糖提取条件的优化
１．５．１提取时间
　　样品“Ｔ１－２”分别加热提取１、２和３ｈ，料液
比为１∶１００，其它提取条件和测定方法同１．４．２，
考察不同提取时间对金耳子实体多糖含量测定
的影响。
１．５．２提取温度
　　样品“Ｔ１－２”分别在６０、８０和１００℃的恒温
水浴锅中加热提取，料液比为１∶１００，其它提取条
件和测定方法同１．４．２，考察不同提取温度对金
耳子实体多糖含量测定的影响。
１．５．３料液比
　　样品“Ｔ１－２”加蒸馏水至料液比分别为１∶５０、
１∶１００、１∶２５０和１∶５００ｇ／ｍＬ，其它提取条件和测
定方法同１．４．２，考察不同料液比对金耳子实体
多糖含量测定的影响。
１．６方法学考察
１．６．１稳定性实验
　　 准确吸取 １．４．２中“Ｔ１－２”样品供试液
１．０ｍＬ，用苯酚硫酸法分别在样品放置１、１０、
３０、６０、９０和１２０ｍｉｎ时测定吸光度，平行测定６
次，计算ＲＳＤ值，考察稳定性。
１．６．２精密度实验
　　准确吸取标准样品液１ｍＬ（０．０４ｍｇ／ｍＬ），
用苯酚硫酸法连续 ６ 次测定吸光度，计算
ＲＳＤ值。
１．６．３重现性实验
　　取同一批样品“Ｔ１－２”，平行制备供试液６
份，测定其多糖含量。
１．６．４加样回收率实验
　　取同一批样品“Ｔ１－２”５份，每份５０ｍｇ，按
照样品所含多糖量的１００％加入葡萄糖标准品
进行提取，取样测定多糖含量并计算标准品回
收率。
１．７不同地域金耳子实体多糖含量测定
　　分别称取８５％乙醇预处理过的云南、四
川、西藏金耳子实体干品粉末（Ｔ１－２，Ｔ２－２，
Ｔ３－２）１００ｍｇ，在优化的提取条件下进行提
取，采用苯酚－硫酸法测定不同地域金耳子实
体多糖含量。
２　结果与分析
２．１预处理前后金耳子实体多糖含量测定结果
２．１．１葡萄糖标准曲线的绘制
　　葡萄糖标准溶液浓度与吸光度的归方程为ｙ
＝０．０９８３ｘ －０．０１１９（ｙ：标样浓度，ｘ：吸光度），
Ｒ２＝０．９９８９，线性范围为０．９３～３９．９３μｇ／ｍＬ。
２．１．２预处理前后金耳子实体糖含量
　　乙醇预处理前后的云南金耳子实体的多糖
含量分别为３３．６８％和２９．１４％，两者相差４％左
右（表１）；未经处理的金耳子实体中，阿糖醇、海
藻糖、甘露醇总含量达６．８７％；其中，海藻糖含量
２．５９％，经过８５％乙醇处理后，大部分干扰物质
海藻糖被除去（表１），剩余部分不影响多糖含量
的测定。结果表明，经过８５％乙醇预处理，样品
中的海藻糖等还原糖基本除去，测得的总糖含量
可视为多糖含量。
２．２多糖提取条件
　　由图１可知，随着提取时间的延长，金耳子
实体的多糖含量实测值升高，但２ｈ后，多糖含量
增幅不明显（图１－Ａ）；在供试提取温度范围内，随
着提取温度的升高，金耳子实体的多糖含量测定
值升高，在１００℃时，含量测定值达到最高（图１－
Ｂ）；在试验范围内，金耳子实体的多糖含量随着
料液比的提高而升高，料液比为１∶５００时，多糖
含量测定值最高（图１－Ｃ）。
综合上述实验结果，金耳子实体多糖含量测
定的最佳提取条件为提取时间２ｈ，提取温度
１００℃，料液比１∶５００（ｇ／ｍＬ）。
０９
第１期 张　忠，等：金耳多糖含量测定方法
表１　预处理前后金耳子实体中总糖和可溶性糖含量
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｏｔａｌ　ａｎｄ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　Ｔ．ａｕｒａｎｔｉａｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ
样品
Ｓａｍｐｌｅ＊
成分Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（％）
总糖
Ｔｏｔａｌ　ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
阿糖醇
Ａｒａｂｉｔｏｌ
海藻糖
Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ
甘露醇
Ｍａｎｎｉｔｏｌ
Ｔ１－１　 ３３．６８±０．６７　 １．９７±０．０１　 ２．５９±０．０５　 ２．３１±０．０３
Ｔ１－２　 ２９．１４±０．８９　 ０．０２±０．０１　 ０．７７±０．０１　 ０．０９±０．０１
＊Ｔ１－１：Ｙｕｎｎａｎ　ｗｉｌｄ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ（ｐｕｒｃｈａｓｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｎａｎ　Ｔｉａｎｚｈｉｘｕｎ　Ｗｉｌｄ　Ｍｕｓｈｒｏｏｍ　Ｃｏ．Ｌｔｄ），ｗｅｒｅ　ｄｒｉｅｄ　ａｔ　６５℃ｆｏｒ　２４　ｈ　ａｎｄ
ｇｒｏｕｎｄ　ｔｏ　ａ　ｐｏｗｄｅｒ　ｔｏ　ｐａｓｓ　ａ　１００　ｍｅｓｈ　ｓｉｅｖｅ；Ｔ１－２：Ｔ１－１　ｓａｍｐｌｅ（１００　ｍｇ）ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ　ｉｎ２５　ｍＬ８５％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ
（ＫＱ－６００Ｐ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｃｌｅａｎｅｒ，６００　Ｗ）ｆｏｒ　３０　ｍｉｎ　ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，Ａｆｔｅｒ　ｃｏｌｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｏｌｉｄ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｂｙ　ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ｗａｓ
ｒｅｐｅａｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｏｌｉｄ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｗａｓ　ｄｒｉｅｄ　ａｔ　６５℃ｔｏ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　ｗｅｉｇｈｔ
图１　提取条件对金耳子实体多糖含量测定的影响
Ｆｉｇ．１　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｔ．ａｕｒａｎｔｉａ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
２．３方法学考察
２．３．１稳定性、精密度、重现性实验
　　稳定性、精密度和重复性实验中多糖含量的
ＲＳＤ值分别为０．０９％、０．５０％和３．７１％，说明运
用建立的方法测定金耳中多糖含量，稳定性、精
密度和重复性均良好。
２．３．２加样回收率实验
　 　 加样回收率结果表明，标样回收率在
９５．１３％～９９．６２％之间，平均回收率为９７．２３％，
ＲＳＤ值为１．７６％，说明该方法对多糖检测特异性
良好。
２．４不同地域金耳子实体多糖含量测定
　　对不同来源的金耳子实体的多糖含量进行
测定，四川金耳子实体的多糖含量最高，为
４０．５５％，云南金耳子实体的多糖含量为３４．５％，
西藏金耳子实体的多糖含为３７．０４％。
３　小结
　　由于金耳比一般食用菌中多糖含量要高得
多，可达４０％，提取液粘度大，因此，最佳提取条
件中的料液比高达１∶５００，同时发现运用８５％乙
醇也可以有效去除金耳中影响多糖含量测定的
干扰物质。实验证明建立的测定方法简便快捷、
准确性高、重现性好、测定结果可靠，可用于金耳
中多糖含量的测定。
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Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　Ｔｒｅｍｅｌｌａ　ａｕｒａｎｔｉａ
Ｆｒｕｉｔ　Ｂｏｄｉｅｓ　Ｕｓｉｎｇ　Ｐｈｅｎｏｌ－ｓｕｌｆｕｒｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｍｅｔｈｏｄ
ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｏｎｇ，ＴＡＮＧ　Ｑｉｎｇｊｉｕ＊，ＺＨＯＵ　Ｓｈｕａｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎｇｓｏｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｙａｎ，
ＬＩＵ　Ｙａｎｆａｎｇ，ＴＡＮＧ　Ｃｈｕａｎｈｏｎｇ
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Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ，Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒ＆Ｄ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
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ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｒｅｍｅｌａ　ａｕｒａｎｔｉａ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｙ
［本文编辑］　于荣利
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