全 文 ：基金项目:国家自然科学基金资助项目(20672146)
作者简介:冯薇 ,女 ,博士研究生　　研究方向:天然药物化学　　＊通讯作者:杨峻山 ,男 ,研究员 ,博士生导师　　研究方向:天然药物化学　
　Tel:(010)62899707　　E-mail:junshanyang@hotmail.com
·论　著·
木蹄层孔菌化学成分研究
冯薇 ,杨峻山＊(中国医学科学院-北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193)
摘要:目的　研究木蹄层孔菌 [ Fomesfomentarius(L.Ex.Fr.)] 的化学成分。方法　采用反复硅胶柱色谱法 、SephadexLH-
20柱色谱法等进行分离纯化 , 并通过化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果　从木蹄体积分数 95%乙醇提取物
中分离得到 6个化合物 , 其中 1个木脂素类化合物:泡桐素 (1);2个小分子芳香族化合物:原儿茶醛 (2), 4-(3, 4-二羟苯基)-
3-丁烯-2-酮 (3);3个甾类化合物:5α, 8α-过氧化麦角甾-6, 22-二烯-3β 醇 (4),麦角甾-7, 22-二烯-3β醇 (5), β-谷甾醇 (6)。
结论　化合物 1 ～ 4, 6均为首次从该真菌中分离得到。
关键词:木蹄层孔菌;化学成分;分离纯化;结构鉴定
中图分类号:R284　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)20-1528-03
StudiesonChemicalConstituentsofFomesfomentarius(L.Ex.Fr.)
FENGWei, YANGJun-shan＊(InstituteofMedicinalPlant, ChineseAcademyofMedicalSciences, PekingUnionMedicalColege,
Beijing100193, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　 TostudythechemicalconstituentsofFomesfomentarius(L.Ex.Fr.).METHODS　 Thecompounds
wereisolatedbychromatographyonsilicagelcolumn, sephadexLH-20 column, andtheirstructureswereelucidatedbyspectralanaly-
sis.RESULTS　Sixcompoundswereobtainedandidentifiedaspaulownin(1), protocatechualdehyde(2), 4-(3, 4-dihydroxyphe-
nyl)-but-3-en-2-one(3), 5α, 8α-epidioxyergosta-6, 22-dien-3β-ol(4), ergosta-7, 22-dien-3β-ol(5), β-sitosterol(6), respective-
ly.CONCLUSION　Compound1-4 and6 wereisolatedfromthefungusforthefirsttime.
KEYWORDS:Fomesfomentarius;constituents;isolationandpurification;structuredetermination
　　木蹄层孔菌 [ Fomesfomentarius(L.Ex.Fr.)]为
多孔菌科(Polyporaceae)层孔菌属 (Fomes)大型真
菌 ,又称木蹄 。多年生 ,多生于阔叶树干上 。广泛分
布于我国东北 、西南和西部等地区。药用有消积化
瘀作用 ,其味微苦 ,性平。木蹄作为民间药物历史悠
久 ,用于治疗食道癌 、胃癌 、子宫癌等 [ 1-2] 。其药用部
位为子实体 ,现代药理研究表明 ,木蹄粗提物具有抗
肿瘤 ,抗氧化 ,增强免疫功能等活性 [ 3-6] 。为了进一
步阐明其药效物质基础 ,我们对木蹄的化学成分进
行了研究。从其体积分数 95%乙醇提取物中分离
得到了 6个化合物 ,分别为泡桐素 (1),原儿茶醛
(2), 4-(3, 4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮 (3), 5α, 8α-
过氧化麦角甾-6, 22-二烯-3β醇 (4),麦角甾 -7, 22-
二烯-3β醇(5), β-谷甾醇 (6)。化合物 1 ～ 4, 6均
为首次从该真菌中分离得到。
1　仪器与材料
Fisher-Johns显微熔点测定仪 (温度未校正);
BrukerADVANCEII600型核磁共振仪 (TMS内
标)。薄层色谱硅胶 GF254(青岛海洋化工厂);柱
色谱硅胶(200 ～ 300目 ,青岛海洋化工厂);Sepha-
dexLH-20(瑞典 Amersham公司),试剂均为分析
纯。实验用药材于 2008年 4月购自安国(产自陕
西),由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研
究员鉴定为 Fomesfomentarius(L.Ex.Fr.)。
2　提取与分离
木蹄干燥子实体 10 kg,用体积分数为 95%乙
醇加热回流提取 2次 (2 h, 5 000 mL;2 h, 5 000
mL),得到浸膏 360 g,浸膏悬浮于蒸馏水中依次以
石油醚(60 ～ 90 ℃),氯仿 ,乙酸乙酯 ,正丁醇萃取 ,
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得石油醚层萃取物(92.0 g)和氯仿萃取物(110.0
g)。氯仿萃取物(110.0 g)经硅胶柱色谱 ,以石油
醚 -丙酮(100∶0※0∶100)梯度洗脱 ,得到 9个流分
(Fr.1 ～ Fr.9)。将 Fr.2(石油醚 -丙酮 =10∶1)再经
SephadexLH-20处理 ,以氯仿-甲醇洗脱得到化合
物 1(15 mg), 2(10mg), 3(32mg)。
石油醚层萃取物 (92.0 g)经石油醚 -乙酸乙酯
(100∶0※0∶100)梯度洗脱 ,得到 12个流分(Fr.1 ～
Fr.12), Fr.5(石油醚-乙酸乙酯 =8︰ 1)经石油醚-
乙酸乙酯(10∶1※4∶1)梯度洗脱 ,得化合物 4(12
mg), 5(6 mg)。 Fr.6(石油醚-乙酸乙酯 =6∶1)得到
化合物 6(85mg)。
3　结构鉴定
化合物 1:浅黄色固体 (三氯甲烷甲醇), mp
80 ～ 83 ℃, ESI-MS:m/z393 [ M+Na] +。1 H-NMR
(600MHz, CDCl3)δ:6.94(1H, d, J=1.2 Hz, 2′-
H), 6.91(1H, s, 2-H), 6.87(2H, m, 6-H, 6′-H),
6.85(1H, m, 5-H), 6.79(1H, d, J=8.4 Hz, 5′-H),
5.98(2H, s, -O-CH2 -O-), 5.96(2H, s, O CH2
O ), 4.84(1H, d, J=4.8 Hz, 7′-H), 4.81(1H, s,
7-H), 4.50(1H, dd, J=9, 8.9Hz, 9′b-H), 4.04
(1H, d, J=9 Hz, 9b-H), 3.91(1H, d, J=9 Hz, 9a-
H), 3.83(1H, dd, J=9, 6 Hz, 9′a-H), 3.04(1H, m,
8′-H);13C-NMR(150 MHz, CDCl3)δ:148.4(C-4),
148.2(C-4′), 148.1(C-3), 147.5(C-3′), 134.8(C-
1′), 129.4(C-1), 120.3(C-6), 120.0(C-6′), 108.8
(C-5), 108.4(C-5′), 107.6.2(C-2), 107.1(C-2′),
101.5(-O-CH2-O-), 101.3(-O-CH2-O-), 91.9(C-
8), 87.7(C-7), 86.0(C-7′), 75.0(C-9), 71.8(C-
9′), 60.6(C-8′)。以上波谱数据与文献[ 7]中的泡桐
素数据基本一致 。
化合物 2:白色针晶(甲醇), mp150 ～ 152 ℃,
ESI-MS:m/z137[ M-H] -。1H-NMR(600 MHz, Ace-
tone-d6)δ:7.36(1H, d, J=1.2 Hz, 2-H), 7.00(1H,
d, J=7.8 Hz, 5-H), 7.34(1H, dd, J=7.8, 1.2 Hz, 6-
H), 9.77(1H, s, 7-H);13 C-NMR(150 MHz, Acetone-
d6)δ:131.0(C-1), 115.1(C-2), 146.5(C-3), 152.4
(C-4), 116.1(C-5), 125.5(C-6), 191.3(C-7)。以上
波谱数据与文献 [ 8]中的原儿茶醛数据基本一致。
化合物 3:黄色针晶(甲醇), mp177 ～ 179 ℃,
ESI-MS:m/z177 [ M-H] -。1 H-NMR(600 MHz,
CD3OD)δ:2.33(3H, s, 1-H), 6.55(1H, d, J=16.2
Hz, 3-H), 7.52(1H, d, J=16.2 Hz, 4-H), 7.07
(1H, d, J=2.4 Hz, 6-H), 6.78(1H, d, J=8.4 Hz,
9-H), 6.98(1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, 10-H);13 C-
NMR(150 MHz, CD3 OD)δ:27.2(C-1), 201.7(C-
2), 125.0(C-3), 147.1(C-4), 128.0(C-5), 116.8
(C-6), 147.1(C-7), 150.2(C-8), 116.8(C-9),
125.0(C-10)。以上数据与文献 [ 9]报道的 4-(3, 4-
二羟苯基)-3-丁烯-2-酮数据基本一致 。
化合物 4:白色针状结晶 (氯仿-甲醇), mp
172 ～ 174 ℃, Libermann-Burchard反应呈阳性。 EI-
MS:m/z(%)428 [ M] + (10), 410 (12), 396
(100), 376 (13), 363 (50), 337 (25), 251(30)。1
H-NMR (600 MHz, CDCl3 ) δ:6.50 (1H, d,
J=8.4Hz, 6-H), 6.24(1H, d, J=8.4Hz, 7-H), 5.22
(1H, dd, J=8.4, 15Hz, 23-H), 5.14(1H, dd, J=8.4,
15Hz, 22-H), 3.97(1H, m, 3-H)以及 1.00, 0.91,
0.88, 0.82, 0.82, 0.83六个甲基信号。13C-NMR(150
MHz, CDCl3)δ:30.3 (C-1), 34.9 (C-2), 66.7(C-
3), 39.6(C-4), 82.3 (C-5), 135.4 (C-6), 131.0
(C-7), 79.6(C-8), 51.3(C-9), 37.2(C-10), 20.8
(C-11), 37.2 (C-12), 44.8 (C-13), 51.9 (C-14),
23.6 (C-15), 28.8 (C-16), 56.4 (C-17), 12.9 (C-
18), 18.2 (C-19), 39.9 (C-20), 21.1 (C-21),
135.6(C-22), 132.5(C-23), 43.0(C-24), 33.3(C-
25), 19.8 (C-26), 20.1(C-27), 17.8(C-28)。以上
数据与文献 [ 10]中的 5α, 8α-过氧化麦角甾 -6, 22-二烯-
3β醇基本一致 。
化合物 5:白色针状结晶 (氯仿-甲醇), mp
171 ～ 173 ℃。Libermann-Burchard反应呈阳性。 EI-
MS:m/z(%)400 [ M+2] (100), 398 [ M+ ] (45),
363(70), 271 (67), 255 (90), 213 (20), 157
(27), 109(35), 81(65)。1 H-NMR(600 MHz, Pyr-
d5)δ:5.20 ～ 5.30 (2H, m, 22-Hand23-H), 3.8
(1H, m, 3-H)以及 1.04, 0.96, 0.85, 0.82, 0.81,
0.59六个甲基信号。13C-NMR(150MHz, Pyr-d5)δ:
37.6(C-1), 31.6(C-2), 68.8(C-3), 38.1(C-4),
39.1(C-5), 29.6(C-6), 116.5(C-7), 138.1(C-8),
48.3(C-9), 35.4(C-10), 21.8(C-11), 39.2(C-12),
41.9(C-13), 54.6(C-14), 30.0(C-15), 28.6(C-
16), 54.8(C-17), 11.8(C-18), 14.1(C-19), 41.6
(C-20), 19.2(C-21), 130.6(C-22), 134.7(C-23),
42.0(C-24), 33.1(C-25), 19.9(C-26), 19.9(C-
27), 17.6(C-28)。以上数据与文献 [ 11]中的麦角甾-
7, 22-二烯-3β醇基本一致 。
化合物 6:无色针状结晶 , mp138 ～ 139 ℃, 10%
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硫酸乙醇溶液显红色;与 β-谷甾醇标准品共薄层 , Rf
值一致 , 确定化合物 6为 β-谷甾醇(β-sitosterol)。
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(收稿日期:2010-02-07)
基金项目:广州市中药现代化重大专项资助项目(2004Z1-E5011)
作者简介:姚志红 ,女 ,副教授　　研究方向:中药质量控制方法研究 、药代动力学研究　　＊通讯作者:姚新生 ,男 ,教授　　研究方向:中药及
天然药物的活性成分研究　　Tel:(020)85225849　　E-mailtyaoxs@jnu.edu.cn
3种市售中药复方制剂消炎利胆片的 HPLC指纹图谱研究
姚志红 1, 2 ,潘宇明 1, 2 ,戴毅 1, 2 ,陈妍 1, 2 ,屠风娟2, 3 ,高昊 1, 2 ,姚新生 1, 2, 3＊(1.暨南大学中药及天然药物研究所 ,广州 510632;
2.中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室 ,广州 510632;3.沈阳药科大学天然药物化学教研室 ,沈阳 110016)
摘要:目的　建立 3种市售中药复方制剂消炎利胆片的 HPLC指纹图谱 , 并对多批次产品的质量进行初步评价。方法　采用
C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 以乙腈-水(分别含体积分数 0.1%的甲酸)为流动相进行梯度洗脱 , 流速 1.00 mL·
min-1 , 检测波长 254nm, 柱温 25℃;建立消炎利胆片的 HPLC指纹图谱 , 通过比对各组方中药提取物的 HPLC图谱 ,确定消炎
利胆片 HPLC指纹图谱中主要色谱峰的组方中药来源;通过比对化学分离制得的对照品的保留时间 ,对部分主要色谱峰进行
明确化学指认;利用中药指纹图谱相似度评价系统对 3个厂家的 24批市售产品进行相似度评价。结果　所建立的消炎利胆
片指纹图谱具有较好的精密度 、重现性和稳定性 , 在可检出的 40个色谱峰中 , 31个色谱峰的组方中药来源得到明确 , 7个色谱
峰得到化学指认。相同厂家不同批次市售消炎利胆片指纹图谱的相似度不低于 0.954;3个厂家的 24批市售消炎利胆片指纹
图谱的相似度为 0.845 ～ 0.987, 然而 , 剪切图谱(脱水穿心莲内酯出峰前的指纹图谱 ,即 0 ～ 69 min)的相似度仅为 0.478 ～
0.896。结论　所建立的 HPLC指纹图谱表达了上述 3种市售消炎利胆片中多组分的整体特征 , 为评价市售消炎利胆片的质
量提供了可靠的实验数据。
关键词:消炎利胆片;中药复方制剂;高效液相色谱法指纹图谱
中图分类号:R284　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)20-1530-05
StudyonHPLCFingerprintofThreeTCM PrescriptionNamedXiaoyanlidanTabletinMarket
YAOZhi-hong1, 2 , PANYu-ming1, 2 , DAIYi1, 2 , CHENYan1, 2 , TUFeng-juan2, 3 , GAOHao1, 2 , YAOXin-
sheng1, 2, 3＊(1.InstituteofTraditionalChineseMedicine＆ NaturalProducts, JinanUniversity, Guangzhou510632, China;
2.GuangdongProvinceKeyLaboratoryofPharmacodynamicConstituentsofTCMandNewDrugResearch, Guangzhou510632, China;
3.DepartmentofNaturalProductsChemistry, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
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