全 文 ：Mycosystema
菌 物 学 报 15 November 2009, 28(6): 776-782

jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2009 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.






基金项目：国家十一五科技支撑计划（No. 2006BAK10B06）；国家 863 项目（No. 2007AA06Z323）；国家质检总局课题（No. 2008IK236）；天津市科
技支撑项目（No. 06YFGZNC00700）
*Corresponding author. E-mail: mgl@nankai.edu.cn
收稿日期: 2008-10-06, 接受日期: 2008-12-24

雀麦上雀麦腥黑粉菌 Tilletia bromi 的分子检测
廖芳 1,2 赵磊 1 罗加凤 2 黄国明 2 刘跃庭 2 李明刚 1*
1南开大学生命科学学院 天津 300071
2天津出入境检验检疫局 天津 300456


摘 要：雀麦是重要的牧草，近年来进口量激增。寄生于雀麦上的腥黑粉菌共有 4 种，即小麦矮腥黑穗菌 Tilletia controversa
（TCK）、雀麦腥黑粉菌 T. bromi、T. bolayi 和小麦网腥黑穗菌 T. caries（TCT），根据冬孢子形态难以直接区分这些种类。本
文在形态、自发荧光和萌发生理三方面的比较研究基础上，依据 beta-微管蛋白 tub2基因序列设计一套引物，转化为特异SCAR
分子标记，建立了雀麦上 T. bromi 的菌丝基因组 DNA 的特异 PCR 检测方法和冬孢子的套式特异 PCR 检测方法，为病害提
供了快速、可靠的检测方法。
关键词：SCAR 分子标记，套式 PCR，分子检测

Molecular detection of Tilletia bromi on brome grasses
LIAO Fang1, 2 ZHAO Lei1 LUO Jia-Feng2 HUANG Guo-Ming2 LIU Yue-Ting2 LI Ming-Gang1*
1College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China
2Tianjin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Tianjin 300456, China
Abstract: Brome grasses are economically and ecologically important forage grasses, and have been frequently introduced into
China these years. The smut fungi Tilletia spp. are important pathogens on these grasses and have greatly endangered grass
production. There are four Tilletia species, i.e. T. controversa (TCK), T. bromi, T. bolayi and T. caries (TCT), infecting these grasses.
It is difficult to separate them from each other based on the characteristics of their teliospores. In this study, the morphology,
autofluorescence and germination behavior of teliospores were determined and four species, T. bromi, TCK, TCT and T. fusca with
similar characteristics were selected for further analysis. Based on the nucleotide difference of a beta-tubulin tub2 gene, a molecular
marker that is sequence characterized amplified region (SCAR) was developed specifically for PCR detection of T. bromi by using
the DNA samples from either the mycelia or the teliospores isolated from brome grasses. The method developed in this study can be
quickly and reliably employed in quarantine analysis.
Key words: sequence characterized amplified region (SCAR) marker, nested-PCR, molecular detection

DOI:10.13346/j.mycosystema.2009.06.012
Vol.28 No.6 777
http://journals.im.ac.cn/jwxtcn
雀麦Bromus L.属于禾本科牧草，其中无芒雀麦
B. inermis Leyss是耐干早、耐寒冷、抗逆性较强的
优良牧草，营养丰富、适口性好，被誉为“禾草饲
料之王”。 腥黑粉菌Tilletia Tul. & C. Tul.是雀麦上
重要的真菌病害，严重影响雀麦的品质和产量。根
据Durán & Fisher（1961）、Vánky（1985，1994）
和美国农业研究所植物分类学和真菌实验室
《Genus Tilletia in the United States》的报道，侵染
雀麦的网状腥黑粉菌有4种，分别是小麦矮腥黑穗
菌T. controversa Kühn、雀麦腥黑粉菌T. bromi
(Brockm.) Brockm.、T. bolayi H. Zogg和小麦网腥黑
穗菌T. caries (DC) Tul.，T. bolayi冬孢子堆呈棕黑色
条状，存在于植株叶片上，不侵染子房，并且冬孢
子呈多角不规则形（Piepenbring 2001），与T. bromi、
TCT、TCK易于区别，而T. bromi、TCT、TCK冬孢
子形态非常相似（周卫川和吴宇芬 1994；Pimentel
et al. 2000a, b），亲缘关系较近（Castlebury 2005；
McDonald 2000），T. bromi和TCK冬孢子两者萌发同
样要求低温，担孢子可以互相融合，由于田间杂交
和杂交后代的分离，某些菌系主要形态学特征存在
交叉重叠（Boyd & Carris 1997；Carris & Gray
1994），干扰了检测鉴定工作。
禾草腥黑粉菌T. fusca Ellis & Everh.在腥黑粉
菌属中是一个较为复杂的复合种（Hoffmann &
Meiners 1971），Guillemette（1988）通过萌发生理
和细胞学特性将寄生在反曲早熟禾Poa reflexa
Vasey & Scribn.上的腥黑粉菌从集合种T. fusca中独
立出来成为一新种T. togwatii Guillemette。Boyd &
Carris（ 1997，1998）通过寄主专化性、形态比较、
初生担孢子细胞核数目、RAPD及核糖体 rDNA
PCR-RFLP等指标分析，阐述了侵染乌尔披草属
Vulpia spp. C.C. Gmel的专化型和侵染雀麦属
Bromus spp.的专化型存在差异，建议将T. fusca分为
两个独立的种，即侵染Vulpia的T. fusca和侵染
Bromus的T. bromi，但二者冬孢子除网格数目、大小
略有差异外，形态上较难区分。
2002年至今，本课题研究人员曾先后3次从来
自加拿大的无芒雀麦、3次从美国干燥花 -霞草
Gypsophila oldhamiana Miq.中夹带的雀麦Bromus
sp.中截获T. bromi，在形态、自发荧光现象和萌发
生理三方面与TCK进行了比较研究，同时针对T.
bromi与TCK、TCT、T. fusca的冬孢子形态上相似的
特点，寻找、获得T. bromi与3个近似种在特异基因
序列上的差别，即特异的SCAR分子标记，建立了
雀麦上T. bromi的快速、特异、灵敏的分子检测方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料：腥黑粉菌冬孢子和菌丝来源于天
津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心植检
实验室，其中LMC425、LMC415、LMC55、LMC353、
LMC94和LMC360为交流的冬孢子，其它为本室近
年所截获的冬孢子，LMC55和TCK4、TCK9、TCT3、
TCT5由于年代久远或者保存方法不当不能培养出
菌丝，其它菌株都能由冬孢子培养出菌丝；Lou1、
Lou2、Lou3分别为本室于2004、2005、2007年在美
国干燥花-霞草携带的雀麦Bromus sp.上发现的T.
bromi，作为冬孢子形态和萌发生理研究材料。供试
材料的相关信息见表1。
1.1.2 试剂：自行配制席尔氏液和0.25%的次氯酸钠
溶液，PCR扩增相关试剂均为大连宝生物（TaKaRa）
工程公司产品，菌株基因组DNA提取采用上海生工
生物工程有限公司纯化试剂盒（编号SK1252）。
1.2 方法
1.2.1 引物的设计：根据O’Donnell & Cigelnik
（1997）针对镰刀菌Fusarium spp. beta-微管蛋白基
因（β-tubulin）设计、合成的引物TF（5′-AACTGCATT
CTGGGGACGT-3′）和TR（5′-TGCATTCTGGGGAC
GTAGTTG-3′），在低严谨条件下扩增得到约800bp
和600bp两条较明显的带，切取600bp条带回收，克
隆并送往上海英骏生物技术有限公司测序，再在引
物对TF/TR内侧设计引物tubkF1/tubkR1，扩增片段
约为400bp，将菌丝基因组DNA的扩增片段克隆测
序，用Clustal X（version 1.8）软件对所扩增的序列
进行比对，然后根据分析结果在引物tubkF1/tubkR1
内侧设计T. bromi区别于TCK、TCT和T. fusca的特异
引物BBSF/BBSR，扩增片段约250bp，建立T. bromi
的SCAR分子标记技术，并应用于口岸检测。使用
自行设计的 IGS1序列的外套通用引物 IGSUF1/
IGSUR1和内套通用引物NIGSUF1/NIGSUR1作为扩

778 Mycosystema
表1 供试材料的拉丁名、代码、寄主及来源
Table 1 Latin name, code, host and origin information of tested Tilletia spp.
序号
No.
代码
Code
拉丁名
Latin name
寄主
Host
年份
Year
来源
Origin
备注
Remark
1 LMC425 Tilletia bromi Bromus tectorum L. 2004 美国 USA 菌丝 Mycelium
2 LMC415 Tilletia bromi Bromus japonicus Thunb. ex Murr. 2004 美国 USA 菌丝 Mycelium
3 LMC55 Tilletia bromi Bromus japonicus 1991 美国 USA 冬孢子 Teliospore
4 Tb6 Tilletia bromi Bromus inermis L. 2002 加拿大 Canada 菌丝 Mycelium
5 Tb10 Tilletia bromi Bromus inermis 2002 加拿大 Canada 菌丝 Mycelium
6 Tb13 Tilletia bromi Bromus inermis 2002 加拿大 Canada 菌丝 Mycelium
7 LMC353 Tilletia controversa Triticum aestivum L. 1996 美国 USA 菌丝 Mycelium
8 LMC94 Tilletia controversa Bromus marginatus Rostk. 1991 美国 USA 菌丝 Mycelium
9 Xia5 Tilletia controversa Triticum aestivum 2004 美国 USA 菌丝 Mycelium
10 TCK4 Tilletia controversa Triticum aestivum 1996 美国 USA 冬孢子 Teliospore
11 TCK9 Tilletia controversa Triticum aestivum 1988 加拿大 Canada 冬孢子 Teliospore
12 LMC360 Tilletia caries Triticum aestivum 1989 美国 USA 菌丝 Mycelium
13 TCT1 Tilletia caries Triticum aestivum 2002 中国 China 菌丝 Mycelium
14 TCT3 Tilletia caries Triticum aestivum 1995 阿根廷 Argentina 冬孢子 Teliospore
15 TCT5 Tilletia caries Triticum aestivum 1992 美国 USA 冬孢子 Teliospore
16 LMC307 Tilletia fusca Vulpia microstachys (Nutt.) Munro 1995 美国 USA 菌丝 Mycelium
17 Lou1 Tilletia bromi Bromus sp. 2004 美国 USA
霞草携带
Isolated from Gypsophila oldhamiana
18 Lou2 Tilletia bromi Bromus sp. 2005 美国 USA
霞草携带
Isolated from Gypsophila oldhamiana
19 Lou3 Tilletia bromi Bromus sp. 2007 美国 USA
霞草携带
Isolated from Gypsophila oldhamiana

增过程质量监测，IGSUF1/IGSUR1 的扩增片段约为
900bp，NIGSUF1/NIGSUR1 用于冬孢子的套式扩
增，扩增片段约为 700bp，相关引物序列见专利（申
请号：200810053815.0）。引物由上海英骏生物技术
有限公司合成。
1.2.2 冬孢子形态观察和形态测定：雀麦种子个体
较小，健康种子与菌瘿通过肉眼较难区别，在体视
镜下检查菌瘿。用解剖针刺破菌瘿，挑取少许冬孢
子置于滴有席尔氏液的玻片上，放置12h后，100倍
油镜下观察。
1.2.3 萌发试验：在500µL的离心管中加入适量
0.25%的次氯酸钠溶液，挑取一定数量的冬孢子放
入，涡旋振荡器混和，消毒50s后，3,000r/min离心
1min，立即用微量加样器吸去上清液，混和与离心
处理时间不超过3min，加无菌水离心清洗两次，将
冬孢子沉淀物转至3%水琼脂平板上培养，每一培养
温度重复3个培养皿。培养条件：5℃、10℃、15℃、
20℃，连续光照。
1.2.4 DNA的提取与冬孢子的挑取：将上述经萌发继
续培养20d的菌落，用无菌水冲洗至马铃薯葡萄糖
琼脂培养基（PDA）上，15℃光照下继续培养30－
45d后，将菌落挑出，称取50mg菌丝，采用上海生
工基因组DNA纯化试剂盒（编号SK1252）提取菌
丝DNA。提取的基因组DNA溶于70µL TE缓冲液中。
其余菌丝置于-70℃保存。
载玻片上放置1mm见方的盖玻片，其上滴约
0.5µL 10× PCR缓冲液，用解剖针刺破菌瘿，挑取3
－10个左右冬孢子置10× PCR缓冲液中，盖上近似
大小的盖玻片，用镊子轻轻摩擦盖玻片，显微镜下
确认孢子破裂后将叠合的两片盖玻片一起放入含
Vol.28 No.6 779
http://journals.im.ac.cn/jwxtcn
4.5µL 10× PCR缓冲液的PCR管底部，盖上管盖，以
不添加冬孢子仅含PCR缓冲液作为阴性对照。
1.2.5 PCR检测体系的建立：对11个菌株的菌丝基因
组DNA通用引物IGSUF1/IGSUR1和T. bromi的特异
引物扩增，反应体系均为20µL，通用引物扩增体系
包含10× PCR缓冲液2.0µL（其中含有终浓度为
1.5mmol/L的MgCl2），浓度各为2.5mmol/L的4种
dNTP混合液0.4µL，20mmol/L的两条引物各为
0.2µL，0.2µL Taq DNA聚合酶（5U/µL），0.5µL模
板DNA（约为40ng），加无菌水至20µL，以外套通
用引物IGSUF1/IGSUR1扩增片段的克隆质粒作为
阳性对照，以无菌水为模板作为阴性对照。反应条
件为：94℃预变性5min，然后94℃变性30s，63℃
复性30s，72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延
伸7min。特异引物的扩增体系同通用引物的扩增，
不设置阳性对照，引物换成BBSF/BBSR，循环参数
变为94℃预变性5min，然后94℃变性30s，57℃复
性30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸7min。
1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色及成像观察。
1.2.6 冬孢子套式PCR检测体系的建立：挑取15个菌
株3至数个冬孢子进行套式扩增（见1.2.4）。第一轮
的反应体系为50µL：浓度各为2.5mmol/L的4种
dNTP混合液0.5µL，20µmol/L的引物（ IGSUF1/
IGSUR1和tubkF1/tubkR1）每条各为0.5µL，0.5µL
Taq DNA聚合酶（5U/µL），模板和PCR缓冲液计为
5µL，加无菌水至50µL，采用IGSUF1/IGSUR1扩增
片段的克隆质粒作为阳性对照，只添加PCR 缓冲液
为模板作为阴性对照，循环参数同1.2.5通用引物的
扩增，退火温度改为60℃，循环数25个。第二轮的
反 应 体 系 为 20µL ： 内 套 通 用 引 物 NIGSUF1/
NIGSUR1的扩增的反应体系同1.2.5通用引物的扩
增体系，NIGSUF1/NIGSUR1，模板为第一轮扩增
产物1µL，设置阳性对照和阴性对照，循环参数为
94℃预变性5min，然后94℃变性15s，60℃复性15s，
72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸7min；特
异引物BBSF/BBSR的扩增反应体系同1.2.5，引物换
为BBSF/BBSR，模板为第一轮扩增产物1µL，只设
置阴性对照，循环参数为94℃预变性5min，然后
94℃变性15s，55℃复性15s，72℃延伸30s，35个循
环，最后72℃延伸7min。1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴
化乙锭染色并观察目的大小条带的有无。
2 结果与分析
2.1 病原菌形态特征及萌发特性
2004、2005、2007 年在美国干燥花-霞草夹带
的雀麦中发现的 T. bromi 菌瘿间形态差异较大，平
均网脊高度 0.9－2.1µm，网目数 4－9 个，自发荧
光率 0%－96%。图 1－图 3 显示出 3 种具有代表性
的菌瘿类型。类型 1 的菌瘿冬孢子呈黄褐色，球形
或近球形，直径 18－21µm，网脊 1.2－1.6µm，网
目大，每一直径上的网目数仅有 4－5 个，自发荧
光率 96%，这些特征与 TCK 非常相似，但萌发温
度有差异，T. bromi 冬孢子在 10℃光照下培养 30d、
5℃和 15℃光照培养下 35d 才能萌发（图 1）；类型
2 为典型的 T. bromi，菌瘿冬孢子呈棕褐色，球形或
近球形，直径 20－24µm，网脊 1.0－1.4µm，每一
直径网目数 5－7 个，荧光率 89%，10℃光照培养
下 7d 萌发，5℃光照培养下 14d 萌发（图 2）；类型
3 的菌瘿冬孢子呈棕褐色，不规则球形、多角形和
方形，直径 19－24 × 21－29µm，网脊低，0.5－
1.0µm，网目较多，每一直径 5－9 个，不产生自发
荧光，5℃、10℃、15℃培养 90d 仍不能萌发（图 3）。

图 1 菌瘿类型 1冬孢子网脊、网目、自体荧光及萌发（10×40）
Fig. 1 The ridge, aperture, and autofluorescence and germination characteristics of teliospores from type 1 soralium (10×40).
780 Mycosystema

图 2 菌瘿类型 2冬孢子网脊、网目及萌发（10×40）
Fig. 2 The ridge, aperture and germination characteristics of teliospores from type 2 soralium (10×40).


图 3 菌瘿类型 3冬孢子网脊、网目（10×40）
Fig. 3 The ridge and aperture of teliospores of from type 3 soralium
(10×40).
2.2 菌丝基因组DNA PCR分子检测体系的建立
对 11 个菌株的菌丝基因组 DNA 进行通用引物
IGSUF1/IGSUR1 扩增，外套通用引物扩增的片段约
为 900bp，阳性质控和所有的菌丝基因组 DNA 呈阳
性扩增，阴性对照无相应产物（图 4）。对 11 个菌
株的菌丝基因组 DNA 进行特异引物 BBSF/BBSR
的扩增，以添加无菌水作为阴性对照。特异引物扩
增的片段约为 250bp，只有 LMC425、LMC415、
Tb6、Tb10、Tb13 显示特定大小的目的条带（图 5）。
2.3 冬孢子套式PCR检测体系的建立
对 15 个菌株 3 至数个冬孢子进行外套通用引
物的套式扩增，然后使用内套通用引物扩增的片段
约为 700bp，阳性质控和所有的菌株冬孢子经 2 轮
扩增均能得到特定大小的目的片段，阴性对照无相
应产物（图 6）。特异引物扩增的片段约为 250bp，
只能从 T. bromi 菌株 LMC425、LMC415、LMC55、
Tb6 和 Tb13 中扩增出特定大小的目的条带（图 7）。


图 4 菌丝基因组DNA通用引物的扩增
泳道1－12分别为阳性质粒、菌株LMC425、LMC415、Tb6、Tb10、Tb13、
LMC353、Xia5、LMC94、LMC360、TCT1、LMC307；13为阴性对照，
M为2000bp DNA ladder Marker.
Fig. 4 PCR amplification of the mycelial genomic DNA using universal
primers IGSUF1/IGSUR1. Lanes 1－12 represent positive cloning
plasmid, the strains of LMC425, LMC415, Tb6, Tb10, Tb13, LMC353,
Xia5, LMC94, LMC360, TCT1and LMC307 respectively; Lane 13:
Negative control; M: 2000bp DNA ladder Marker.


图 5 菌丝基因组DNA特异引物的扩增
泳道1－5分别为菌株LMC425、LMC415、Tb6、Tb10、Tb13；6－11分
别为菌株LMC353、Xia5、LMC94、LMC360、TCT1、LMC307；12为
阴性对照，M为2000bp DNA ladder Marker.
Fig. 5 PCR amplification of the mycelial genomic DNA using specific
primers BBSF/BBSR. Lanes 1－5 represent strains LMC425, LMC415,
Tb6, Tb10 and Tb13 respectively; Lanes 6－11 represent strains
LMC353, Xia5, LMC94, LMC360, TCT1 and LMC307 respectively;
Lane 12: Negative control; M: 2000bp DNA ladder Marker.

Vol.28 No.6 781
http://journals.im.ac.cn/jwxtcn

图 6 冬孢子通用引物套式PCR扩增
泳道1－16分别为阳性质粒、菌株LMC425、LMC415、LMC55、Tb6、
Tb13、LMC353、Xia5、LMC94、TCK4、TCK9、LMC360、TCT1、TCT3、
TCT5、LMC307；17为阴性对照；M为2000bp DNA ladder Marker.
Fig. 6 Nested-PCR amplification of teliospores genomic DNA using
universal primers NIGSUF1/NIGSUR1. Lanes 1 － 16 represent
positive cloning plasmid, the strains of LMC425, LMC415, LMC55,
Tb6, Tb13, LMC353, Xia5, LMC94, TCK4, TCK9, LMC360, TCT1,
TCT3, TCT5 and LMC307 respectively; Lane 17: Negative control; M:
2000bp DNA ladder Marker.

图7 冬孢子特异引物套式PCR扩增
泳道1－5分别为菌株LMC425、LMC415、LMC55、Tb6、Tb13；泳道6
－15分别为菌株LMC353、Xia5、LMC94、TCK4、TCK9、LMC360、
TCT1、TCT3、TCT5、LMC307；16阴性对照；M为2000bp DNA ladder
Marker.
Fig. 7 Nested-PCR amplification of teliospores genomic DNA using
specific primers BBSF/BBSR. Lanes 1－5 represent the strains of
LMC425, LMC415, LMC55, Tb6 and Tb13 respectively; Lanes 6－15
represent the strains of LMC353, Xia5, LMC94, TCK4, TCK9,
LMC360, TCT1, TCT3, TCT5 and LMC307 respectively; Lane 16:
Negative control; M: 2000bp DNA ladder Marker.
3 讨论
近年来，随着我国城市园林绿化建设及农牧业
发展的需求，境外的草种大量进入我国，雀麦作为
优良的牧草和保土植物，每年约有 3,000 多吨引入
国内。雀麦上腥黑粉菌是该草种检疫性真菌病害的
重要对象之一。腥黑粉菌属主要依据形态学、萌发
生理、细胞学等方面的特性以及寄主专化性这些传
统方法进行分类。但冬孢子的萌发培养耗时费事，
萌发是否成功受材料新鲜程度、材料多少、培养条
件等诸多因素制约，不能做到快速检测鉴定。SCAR
标记技术因其具有稳定性高、重复性好，成本低廉，
操作简单方便等特点，已经广泛应用于农作物的品
种鉴定、基因定位、真菌鉴定等方面（唐利华等
2008）。本研究针对 T. bromi 与 TCK、TCT、T. fusca
冬孢子形态上相似的特点，用分子生物学方法，获
得 T. bromi 区别于 3 个近似种 TCK、TCT 和 T. fusca
的特异 SCAR 分子标记。使用该分子不仅能够检测
菌丝基因组 DNA，而且可以利用冬孢子 DNA 套式
扩增实现对 T. bromi 冬孢子的快速、可靠检测，整
个过程在一个工作日内完成，可有效地应用于口岸
检测。
目前，腥黑粉菌属冬孢子分子检测做得较为成
功的是T. indica和T. walkeri，实现了单孢子检测（易
建平等 2003），但二者冬孢子直径平均要比本研究
所涉及的四种腥黑粉菌大 10µm，在体视显微镜下
挑取和破碎更小的冬孢子困难更大，本研究改进了
前人破碎冬孢子的方法，经过多次试验，较成功地
提取和破碎了 4 种腥黑粉菌的冬孢子，但是由于个
体微小，不能保证所有的冬孢子成功破碎，而且冬
孢子由于年代或保存方法的缘故可能已经死亡，所
以要挑取 3－10 个冬孢子来进行处理，亦进行了单
孢检测研究，但是成功率不高，约在 20%－30%之
间（结果未显示）。本研究建立的检测方法灵敏度
能够达到单孢水平，而且对直径为 20µm 左右冬孢
子破碎的微操作进行了有益的尝试，为其它具相近
大小的冬孢子微操作提供借鉴。
随着草业国际化引种频繁，T. bromi 通过口岸
传入我国的风险越来越大。2002 年至今，天津检验
检疫局曾先后 3 次在来自加拿大的无芒雀麦 B.
inermis、3 次在美国干燥花-霞草中夹带的雀麦
Bromus sp.中截获 T. bromi，这几批干燥花种子萌发
率超过 95%，T. bromi 冬孢子萌发率超过 50%，说
明经加工处理的干燥花传带危险性有害生物可能
性仍很大。本研究将 3 次干燥花-霞草中截获的 T.
bromi 冬孢子根据形态、自发荧光和萌发生理上的
差异分成三大类型，至于造成这种差异的原因需要
进一步从分子生物学角度进行研究，另外类型 3 在
782 Mycosystema
3 个温度梯度都不能萌发可能由于冬孢子失活或者
该类型冬孢子的萌发生理与前 2 类存在较大差异所
致，因而在所设定的温度范围内不能萌发。本研究
建立了雀麦腥黑粉菌 T. bromi 快速准确分子检测方
法并应用于口岸检测，能有效保护我国的牧草生产
和城市绿化。

[REFERENCES]
Boyd ML, Carris LM, 1997. Molecular relationships among varieties of
the Tilletia fusca (T. bromi) complex and related species.
Mycological Research, 101(3): 269-277
Boyd ML, Carris LM, 1998. Evidence supporting the separation of the
Vulpia- and Bromus-infecting isolates in the Tilletia fusca (T.
bromi) complex. Mycologia, 90(6): 1031-1039
Carris LM, Gray PM, 1994. The ability of Tilletia fusca to hybridize
with the wheat bunt species under axenic conditions. Mycologia,
86(1): 157-163
Castlebury LA, Carris LM, Vánky K, 2005. Phylogenetic analysis of
Tilletia and allied genera in order Tilletiales (Ustilaginomycetes;
Exobasidiomycetidae) based on large subunit nuclear rDNA
sequences. Mycologia, 97(4): 888-900
Durán R, Fischer GW, 1961. The genus Tilletia. Pullman Press,
Washington. 138
Guillemette MK, 1988. Tilletia togwatii, a new bunt species from Poa
reflexa. Mycologia, 80(3): 273-285
Hoffmann JA, Meiners J, 1971. Host specialization in the complex
species Tilletia fusca. Phytopathology, 61(3): 225-227
McDonald JG, Wong E, White GP, 2000. Differentiation of Tilletia
taxa by rep-PCR genomic fingerprinting. Plant Disease, 84(10):
1121-1125
O’Donnell K, Cigelnik E, 1997. Two divergent intragenomic rDNA
ITS2 types within a monophyletic lineage of the fungus Fusarium
are nonorthologous. Molecular Phylogenetics and Evolution, 7(1):
103-116
Piepenbring M, 2001. New species of smut fungi from the neotropics.
Mycological Research, 105(6): 757-767
Pimentel G, Peever TL, Carris LM, 2000a. Genetic variation among
natural populations of Tilletia controversa and T. bromi.
Phytopathology, 90(4): 376-383
Pimentel G, Carris LM, Peever TL, 2000b. Characterization of
interspecific hybrids between Tilletia controversa and T. bromi.
Mycologia, 92(3): 411-420
Tang LH, Xiao Y, Bian YB, 2008. ISSR fingerprint analysis and SCAR
marker of major cultivated strains of Auricularia auricula in
China. Mycosystema, 27(2): 243-251 (in Chinese)
Vánky K, 1985. Carpathian Ustilaginales. Symbolae Botanicae
Upsalienses, 24(2): 129-144
Vánky K, 1994. European smut fungi. Gustav Fischer Verlag Press,
Germany. 570
Yi JP, Tao TD, Yin LP, Shen YF, Pan LW, Zheng JZ, 2003. Detection
for single teliospore of Tilletia indica and Tilletia walkeri. Journal
of Nanjing Agricultural University, 26(2): 42-46 (in Chinese)
Zhou WC, Wu YF, 1994. Studies on the identification of Tilletia fusca
and the distinction of T. fusca from T. controversa. Journal of
Fujian Academy of Agricultural Science, 9(3): 16-21 (in Chinese)

[附中文参考文献]
唐利华，肖扬，边银丙，2008. 中国黑木耳主要栽培菌株 ISSR 指纹分
析及 SCAR 标记. 菌物学报，27(2): 243-251
易建平，陶庭典，印丽萍，沈禹飞，潘良文，郑建中，2003. 小麦印度
腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测. 南京农业大学学报，
26(2): 42-46
周卫川，吴宇芬，1994. 禾腥黑粉菌鉴定及与小麦矮腥黑粉菌的鉴别研
究. 福建省农科院学报，9(3): 16-21