全 文 ：车前草药材的质量标准研究
何 洋 1 , 黄敬聪 2 , 叶奕芬3 , 李慧珊 2 , 李 萍 2 , 孙悦 2＊
(1.广东药学院中山校区 ,广东中山 528458;2.广东药学院 ,广东广州 510006;3.深圳市药品检验所 ,广东深圳 518057)
摘要　[目的 ]对车前草药材质量标准进行研究。 [方法]采用薄层色谱法对车前草进行定性鉴别 ,展开剂为乙酸乙酯 -石油醚(30～ 60
℃)-甲酸(10∶15∶1, V/V),显色剂为 1%氯化铝乙醇溶液;采用HPLC法测定车前草药材中木犀草素的含量 ,色谱柱为AlltechApoloC18
(4.6mm×250.0mm, 5μm),流动相为甲醇 -0.2%磷酸溶液(55∶45, V/V),流速为 1.0ml/min,检测波长为 349nm,柱温为 35 ℃。 [结
果]薄层色谱鉴别中 ,供试品色谱在与对照品、对照药材色谱相应的位置上 ,显示相同颜色的荧光斑点。木犀草素在 1.05 ～ 21.00μg/ml
浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),方法平均回收率为 99.60%, RSD值为 1.70%。 [结论]该方法准确、可靠、灵敏度
高、专属性强 ,可有效控制车前草药材的质量。
关键词　车前草;薄层色谱法;HPLC;木犀草素
中图分类号　S567　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)06-03332-02
StudyonQualityStandardforHERBAPLANTAGINIS
HEYangetal　(ZhongshanCampusofGuangdongPharmaceuticalUniversity, Zhongshan, Guangdong528458)
Abstract　[ Objective] TosupplementthequalitystandardforHERBAPLANTAGINIS.[ Method] TLCwasusedtoqualitativelyidentifythe
mainingredientsusingethylacetate-petroleumether(30-60℃)-formicacid(V/V, 10∶15∶1)asadevelopingagent.HPLCwasusedtoquantita-
tivelydeterminetheluteolincontentusingAltechApoloC18(4.6mm×250.0mm, 5μm)columnaschromatographiccolumnandacetonitrile-
0.2% phosphoricacidsolution(V/V, 55∶45)asthemobilephaseataflowrateof1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwas349nmandthe
columntemperaturewas35℃.[ Results]OnthesameplateofTLC, thereferenceandcontrolmedicinalmaterialwereonthesamepositioncor-
respondingtoparticularcolorinthespectrum.Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof1.05-21.00μg/ml(r=0.999 8)forluteolin.
Theaveragerecoveryrateofluteolinwere99.60%(RSD=1.70%).[ Conclusion] Themethodestablishedinthisstudyisreliable, accurate
andspecific, whichcanbeusedforthequalitycontrolofHERBAPLANTAGINIS.
Keywords　HERBAPLANTAGINIS;TLC;HPLC;Luteolin
基金项目　国家自然科学基金青年科学基金项目(81001600)。
作者简介　何洋(1980-),女 ,黑龙江伊春人 ,实验师 ,硕士 , 从事中药
质量标准与药动学的研究。
收稿日期　 2010-11-17
　　车前草 (HERBAPLANTAGINIS)为车前科植物车前
(PlantagoasiaticaL.)或平车前(PlantagodepresaWild.)的
干燥全草 ,具有清热利尿通淋 ,祛痰 ,凉血 ,解毒之功效 [ 1] ,收
载于《中国药典 》(2010年版),原质量标准以大车前苷为对
照和指标成分 ,对其进行薄层鉴别和含量测定。木犀草素具
有抗氧化 、抗菌和抗炎等功效 [ 2] ,笔者以木犀草素含量为指
标 ,对不同产地车前草进行薄层鉴别 ,并用 HPLC测定其含
量 ,补充完善车前草的质量标准 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象 。车前草药材 1(080908505),购自中山堂
药业有限公司;药材 2(090701),购自广东紫云轩药业有限公
司;药材 3(090710)、药材 4(080820),购自广州致信药业有
限公司;药材 5(20090502),购自中山中智大药房连锁有限公
司 。上述药材经鉴定均为药材正品。
1.1.2　主要试剂。木犀草素对照品(批号:111520-200504),
购自中国药品生物制品检验所;车前草对照药材(批号:
121543-200501),购自中国药品生物制品检定所;甲醇 ,色谱
纯;其他试剂均为市售分析纯;水为自制超纯水。
1.1.3　主要仪器。 Waters高效液相色谱仪 ,由美国 Waters
公司生产;KQ-500型超声波清洗器 ,由昆山市超声仪有限公
司生产;CP225D型电子天平 ,由德国 Sartorius公司生产。
1.2　方法
1.2.1　薄层鉴别。取车前草粉末 1.0 g,加入甲醇 25.0 ml,
超声 30 min,滤过 ,滤液蒸干 ,在残渣中加入甲醇 2.0 ml使其
溶解 ,作为供试品溶液。另取车前草对照药材 1.0 g,加入甲
醇 25.0ml,超声 30min,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣用甲醇 2.0 ml
溶解 ,作为对照药材溶液。取木犀草素对照品 ,加入甲醇制
成 0.2 mg/ml的溶液 ,作为对照品溶液。吸取上述 3种溶液
各 5 μl,按药典一部附录 VIB中方法分别点于同一硅胶 G薄
层板上 ,以乙酸乙酯 -石油醚(30 ～ 60 ℃)-甲酸(10∶15∶1)
为展开剂展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 1%三氯化铝乙醇溶液 ,置于
紫外灯(365nm)下检视。
1.2.2　含量测定。
1.2.2.1　HPLC条件。色谱柱为 AltechApoloC18柱(4.6
mm×250.0mm, 5 μm),流动相为甲醇 -0.2%磷酸溶液(V/
V=55∶45),流速为 1.0 ml/min,检测波长为 349 nm,柱温为
35 ℃,进样量为 20 μl。
1.2.2.2　对照品溶液制备。分别取木犀草素对照品适量 ,
加甲醇溶解 ,定容 ,摇匀 ,分别配制成浓度为 21.00 ml(储备
液Ⅰ)和 195.30 μg/ml(储备液 Ⅱ)的对照品溶液。
1.2.2.3　供试品溶液制备 。取车前草药材 1.50g,置于具塞
锥形瓶中 ,精密加入 80%甲醇溶液 25.0ml,密塞 ,称定重量 ,
超声处理 30 min(功率 500 W,频率 40 kHz),取出 ,放冷 ,再
称定重量 ,用 80%甲醇溶液补足减失的重量 ,摇匀 ,放置 ,取
上清液滤过 ,取续滤液 ,作为供试品溶液。
1.2.2.4　系统适应性试验 。分别取对照品溶液和供试品溶
液 ,按 “1.2.2.1”中色谱条件下进样 20 μl,理论塔板数按木
犀草素计算不低于 2 000,木犀草素色谱峰与相邻峰之间分
离度大于 1.5(图 1)。
1.2.2.5　方法学考察。。①标准曲线的绘制;分别精密量取对
照品储备液Ⅰ 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和 10.0ml,分别置于不
同的 10.0 ml量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得系列对照品
责任编辑　刘群燕　责任校对　李岩安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(6):3332-3333, 3373
　注:1～ 5:样品;6:木犀草素对照品;7:车前草对照药材。
　Note:1-5.Samples;6.Luteolin;7.StandardHERBAPLANTAGINIS.
图 1　各样品薄层色谱图
Fig.1　TLCChromatograms
溶液。按 “1.2.2.1”中色谱条件分别进样 20 μl。以对照品浓
度(x)为横坐标 ,相应对照品峰面积(y)为纵坐标 ,绘制标准
曲线。②精密度;取同一浓度对照品溶液 (浓度为 8.40
μg/ml),按 “1.2.2.1”色谱条件重复进样 6次 ,计算木犀草素
色谱峰面积的相对标准偏差值(RSD)。③稳定性;取同一供
试品溶液 ,分别于第 0、1、2、4、8 h进样分析 ,记录色谱图 ,计
算峰面积 RSD值。④重复性;取同一批号样品 5份 ,分别按
“1.2.2.3”中方法制备成供试品溶液 ,进样分析 ,记录色谱
图 ,计算峰面积 RSD值。⑤加样回收率试验;取已知含量的
供试品粉末(批号:090710)9份 ,每份 0.75 g,分别加入低 、
中 、高 3个浓度的对照品储备液Ⅱ,按 “1.2.2.3”中方法制备
成供试品溶液 ,每个浓度 3次重复 ,分别进样分析。
1.2.2.6　样品含量测定。取供试品粉末 ,按 “1.2.2.1”中方
法制备供试品溶液 ,分别进样分析 ,计算样品中木犀草素的
含量。
2　结果与分析
2.1　薄层鉴别结果　由图 1可知 ,供试品色谱中 ,在与对照
药材色谱和对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色的荧光
斑点。
2.2　方法学考察结果
2.2.1　标准曲线绘制结果。计算得木犀草素的回归方程为 y
=78 770x+167.3000, r=0.999 8,表明木犀草素在浓度为1.05
～ 21.00μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.2　精密度。计算得木犀草素色谱峰面积的 RSD值为
1.00%,表明仪器精密度良好。
2.2.3　稳定性。计算得木犀草素色谱峰面积 RSD值为
0.14%,表明样品溶液于室温下在 8h内稳定。
2.2.4　重复性。计算得木犀草素含量的 RSD值为 1.10%,
表明方法重复性良好。
2.2.5　加样回收率试验 。由表 1可知 ,木犀草素的平均回
收率为 99.60%, RSD值为 1.70%。
表 1　加样回收率试验结果
Table1　Resultsofrecoverytest(n=9)
编号
No.
样品量∥g
Samplingamount
加入量∥μg
Addedamount
测得量∥μg
Measuredamount
回收率∥%
Recovery
平均回收率∥%
Meanrecovery RSD∥%
1 0.757 8 39.060 0 101.200 0 101.90
2 0.759 1 39.060 0 101.300 0 101.70
3 0.758 5 39.060 0 101.200 0 101.50
4 0.759 1 78.120 0 138.600 0 98.60
5 0.750 5 78.120 0 138.300 0 99.20 99.60 1.70
6 0.750 3 78.120 0 138.400 0 99.30
7 0.754 3 117.200 0 176.000 0 98.00
8 0.757 4 117.200 0 176.1000 0 97.90
9 0.755 5 117.200 0 176.000 0 97.90
2.3　样品含量测定结果　由表 2可知 ,各药品中木犀草素
含量差异很大 ,其中药材 5中含量最高 ,药材 4中含量最低。
表 2　样品含量测定结果(n=3)
Table2　Resultsofcontentdeterminationofsamples(n=3)
样品编号
No.
平均含量∥μg/g
Averagecontent RSD∥%
1 175.20 0.50
3 55.85 0.17
3 81.09 0.31
4 19.47 0.96
5 196.90 0.29
3　结论与讨论
(1)将木犀草素对照品溶液 ,在 200 ～ 400 nm范围内进
行波长扫描 ,选择最大吸收波长 349 nm为检测波长。
(2)薄层色谱法中 ,预试验中用乙酸乙酯 、乙醇和甲醇作
为提取溶剂 ,结果表明 ,采用甲醇提取 ,干扰成分少。 HPLC
法中 ,曾用甲醇 、80%甲醇溶液为提取溶剂 ,结果表明 ,采用
甲醇提取 ,木犀草素色谱峰有干扰;以 80%甲醇溶液提取能
消除干扰。在提取过程中 ,曾尝试加盐酸水解药材 ,结果木
犀草素的含量没有明显的增加 ,故最后以 80%甲醇溶液为提
取溶剂 。
(3)在展开剂的选择上 ,根据木犀草素等黄酮类成分的
(下转第 3373页)
333339卷 6期　　　　　　　　　　　　　　　　何 洋等　车前草药材的质量标准研究
交换性钙比对照分别高 12.26%、15.43%,交换性镁比对照
分别高 26.15%、11.35%;各处理土壤有效铁 、锌 、硼含量以
生物菌剂 1.0 kg处理最高 ,比对照高;其次为生物菌剂 0.5
kg处理(表 3)。各处理试验中 ,以生物菌剂 1.0kg处理后土
壤中磷 、钾等有效养分较高 ,是由于生物菌剂中含有大量的
有益菌群 ,可改善土壤的物理性状 ,活化 、分解释放被土壤固
定的养分 ,促进苹果树根系对养分的吸收 ,同时降低土壤酸
化 ,抑制老果园重茬再植病的发生 。
表 3　不同土壤处理对富士苹果树根区土壤养分含量的影响
Table3　EffectsofdiferentsoiltreatmentsonnutrientcontentsinFujiappletreerootzonesoil
处理Treatment
有机质g/kgOrganicmater
全氮g/kgTotalN
速效磷mg/kgAvailableP
速效钾mg/kgAvailableK
交换性钙g/kgExchangeableCa
交换性镁mg/kgExchang-eableMg
有效铁mg/LAvailableFe
有效锌mg/LAvailableZn
有效硼mg/LAvailableBn
生物菌剂 0.5kg+根区土 14.03b 0.85b 24.11a 158a 2.910a 403.2b 60.31ab 4.0b 0.210bBiologicalagent0.5kg+rootzonesoil
生物菌剂 1.0kg+根区土 14.45a 0.81b 28.40a 163a 2.830a 456.8a 64.98a 5.2a 0.254aBiologicalagent1.0kg+rootzonesoil
干鸡粪 1.0kg+根区土 14.30a 1.03a 19.26b 149bc 2.417b 369.5c 52.86b 3.8b 0.132cDriedpoultrydroppings1.0kg+rootzonesoil
行间土 Inter-rowsoil 12.28c 0.74c 16.38bc 155ab 2.544b 362.2c 60.11ab 2.4c 0.125c根区土(CK)Rootzonesoil(CK) 13.62c 0.78c 12.44c 141c 2.521b 362.1c 48.68c 2.1c 0.123c
　注:同列后不同小字字母表示在 0.05水平存在差异。
　Note:Diferentlowercasesinthesamecolumnstandfordiferencesat0.05level.
3　结论与讨论
(1)各试验处理的苹果幼树生长发育均优于根区重茬土
壤处理的苹果幼树。其中以生物菌剂 1.0 kg处理效果最好 ,
与其他处理相比各项指标差异显著;其次为生物菌剂 0.5 kg
和行间土壤处理效果较好;干鸡粪 1.0kg处理与对照相比差
异不显著 ,其中干周增加量和新梢粗度略低于对照。说明生
物菌剂 1.0 kg处理解决果树重茬问题效果较好 ,干鸡粪处理
效果较差。
(2)从苹果树营养生长的角度来看 ,生物菌剂 1.0 kg处
理对老果园土壤重茬再植有较好的改良效果 ,苹果单叶重和
叶片叶绿素含量最高 ,叶片中氮 、磷 、钾含量最高 ,均在叶片
适宜值范围内 ,其次为行间土处理和生物菌剂 0.5 kg处理。
(3)不同的土壤处理对盆栽土壤的理化性状有不同的影
响 ,其中以生物菌剂 1.0 kg处理对土壤的影响较大 ,在盆栽
土壤为酸性的条件下 ,使土壤的 pH值提高了 0.42个单位;
提高土壤有机质的含量 ,活化了土壤中的矿质养分 ,提高了
土壤中有效性磷 、钾及交换性钙 、镁的含量 ,提高微量元素
铁 、锌 、硼的含量。
(4)试验结果表明 ,生物菌剂 1.0 kg处理对改良土壤 ,
促进树体生长 ,提高叶片中各项养分指标 ,增强树势 ,抑制土
壤重茬再植病有较好的作用 ,生物菌剂 0.5 kg处理和行间土
处理对克服苹果树土壤重茬也有一定的效果 ,但生物菌剂可
提高使用量来取得更好的效果 ,行间土处理浪费大量的人
工 ,成本较高 ,干鸡粪处理对克服土壤重茬效果不明显 ,不宜
采用。
参考文献
[ 1] 杜英杰 ,杨寿光 ,李向英,等.氯化钴处理土壤防治草莓土传病害的效
果和增产作用[ J].山东农业科学, 2007(4):98-99.
[ 2] 胡学博 ,曹坳程.太阳能消毒及其防治果树土传病害的研究进展[ J].
中国果树, 2001(5):44-45.
(上接第 3333页)
性质 ,选择乙酸乙酯 -石油醚 -甲酸系统 ,并且考察了不同
比例对薄层鉴别的影响 ,结果表明 ,乙酸乙酯 -石油醚(30 ～
60℃)-甲酸(V/V, 10∶15∶1)为展开剂时 ,效果最为理想。
(4)试验过程中 ,曾用甲醇 -0.1%磷酸溶液 、甲醇
-0.2%磷酸溶液 、甲醇 -0.3%磷酸溶液为流动相 ,结果以
甲醇 -0.2%磷酸溶液(55∶45, V/V)为流动相时 ,木犀草素
色谱峰与相邻色谱峰分离度大于 1.5,拖尾因子满足测定
要求。
该试验建立的薄层色谱法鉴别和高效色谱法准确可靠 、
灵敏度高 、专属性强 ,可有效控制车前草药材的质量 ,该研究
补充完善了车前草的质量标准。
参考文献
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 [ M] .北京:化学工业出版社,
2010:64.
[ 2] 杨颖,宋曙辉,徐桂花.木犀草素的生理功能、提取、纯化及应用的研究
[ J].食品工程, 2010, 37(1):19-23.
337339卷 6期　　　　　　　　　　　　　　　　张秉宇等　生物菌剂防治苹果树重茬效果的研究