全 文 ：第 24卷　第 1期
2005年 3月
延安大学学报 (自然科学版 )
Journa l o f Yanan Univ ersity( Na tural Science Edition)
Vo l. 24　 No. 1
Ma rch. 2005
陕北羊肚菌不同生长期酯酶同工酶的分析
任桂梅 , 陈国梁 , 高小朋 , 辛喜红 , 王　霞
( 延安大学 生命科学学院 ,陕西 延安 716000 )
摘　要:用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了编号为 M5、 M9两种羊肚菌在不同生长期及不同组织酯酶
( EST)同工酶 .结果表明: 同一菌种不同生长期及不同组织的酯酶同工酶酶谱均有明显的差异 .
关键词: 羊肚菌 ; 生长期 ; 酯酶 ; 同工酶
中图分类号: Q556+ . 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-602X( 2005) 01-0078-02
　　羊肚菌又称羊肚蘑 ,羊肚菜 ,是一种极珍稀的野生
食、 药 用 真 菌 . 分 类 学 上 属 于 子 囊 菌 亚 纲
( Ascomyco tina )盘 菌 目 ( Peziales ) 羊 肚 菌 科
( Mo rchel laceae )羊肚菌属 (Morchel la spp. ) .据报
道 [1 ]世界范围内有 20多种 ,我国境内有 12个种 ,主要
分布在西北、华中和西南地区 ,关于羊肚菌的研究迄今
已有一百多年的历史 .目前 ,人们已开始尝试利用同工
酶技术对羊肚菌进行分类鉴定 .但是对高等动植物进
行研究表明 [ 2] ,同工酶具有明显的发育阶段及组织特
异性 ,即在不同的发育阶段及不同组织中 ,同工酶的数
量、结构及活性往往存在着特有的变化 .了解掌握同工
酶的这种变化规律是正确应用同工酶分类鉴定的前
提 .如果不了解发育阶段及组织特异性 ,就可能把发育
阶段及组织特异性引起的酶谱变化混同为遗传学的参
数变化 ,从而导致错误的分析结果 .本试验通过对陕北
两种野生羊肚菌在不同生长期及不同组织中酯酶同工
酶的数量及活性的变化进行了初步分析 ,以便探索羊
肚菌在不同生长期及不同组织中酯酶同工酶的变化规
律 ,从而为同工酶技术在羊肚菌的分类、鉴定及生理生
化研究中提供参考依据 .
1　材料和方法
1. 1　材料
本试验使用的材料: M5为玉米培养基所制原种
(菌丝体浓密纯白 ,并形成菌核 ) , M5子实体 (见封三
图 3)在校园采集 , M9为木屑栽培袋菌筒 (菌丝体不
纯白 ,亦形成老幼大小不等的许多菌核 ) .均由延安
大学生命科学学院微生物学教研组提供 .
1. 2　仪器
80-2型离心机 (深圳市沙头角国华仪器厂 ) ;
DYY-2C型稳压电泳仪 (北京市六一仪器厂 ) ;
DYCZ-28C型夹心式垂直电泳槽 (北京市六一仪器
厂 )等 .
1. 3　方法
1. 3. 1　粗酶液制备　分别取 M5原种的菌丝体
( S)、菌核 ( H)、子实体 ( Z)、菌柄 ( B)、菌盖 ( G)以及
M9菌筒内的菌丝体 ( S)、老龄的大菌核 ( L )和幼龄
的小菌核 ( Y) ,按 1 /6( W /V )加入冷的 pH8. 0的
Tris-HCL缓冲液 ,于冰冷的研钵中磨碎 , 4000转 /
min离心 5 min,取上清液即为粗酶液 ,分装备用 .
1. 3. 2　电泳　采用聚丙烯酰胺凝胶电泳系统 ,浓缩
胶浓度为 3% ,分离胶浓度为 10% ,加样 30 ul,稳压
200 V,电泳 5～ 6 h,染色采用林彬 [3 ]等方法 .
2　结果与分析
2. 1　不同生长期酯酶同工酶酶谱
如图 1,图 2(见封三图 2)所示 , M5的 4个样品
中 , M5S、 M5H、 M5ZG、 M5ZB酶带数依次为 11、 7、 10、 3
条 ,其中酶带 a、 b、 c、 d、 k、 j为 M5 S、 M5H、 M5 ZG所共
有 ,说明它们有共同的遗传基础 ,且为其所编码的基
收稿日期: 2004 12 19
基金项目: 陕西省教育厅专项科研经费资助 ( 01 JK098).
作者简介: 任桂梅 ( 1956 ) ,女 ,陕西清涧县人 ,延安大学副教授 .
因从 M5的 S、 H到 ZG整个生长过程中始终表达 ,只
不过酶活有所差异 (从酶带着色强弱上区分 ) ,为其它
酶带所编码的基因则在 S、 H、 ZG不同生长期有不同
程度的表达; M9则在 S、 HY、 HL期酯酶同工酶酶带
数目少 ,其中 h带为三者所共有 .以上结果表明 , M5、
M9的酯酶同工酶在不同的生长期有所不同 .
2. 2　不同部位菌体组织中酯酶同工酶酶谱
从图 1～ 2中看出 , M5的 ZG与 ZB部位组织中
的酯酶同工酶酶谱有明显差异 .首先表现在数量上 ,
ZG有 10条酶带 , ZB只有 3条 ;其次二者共有的酶
带也仅有一条即 k带 ,表明二者在子实体阶段分化
程度很高 ,组织部位特异性明显 .
图 1　羊肚菌酯酶同工酶谱模式图
2. 3　不同菌种酯酶同工酶酶谱
从图 1～ 2中看出 , M5与 M9的 S、 H期酶带有
明显差异 , 不仅数量不同 ( M5S 11条 , M9S 3条 , M5H 7
条 , M9HL 3条 ) ,而且共有的酶带也很少 , S期仅 1
条 , H期 2条 ,表明二者是不同种羊肚菌 ,但二者
又有一定的亲缘关系 ,这与形态学分类结果是相吻
合的 .
2. 4　本实验还进一步对 M5S、 M5H、 M5 ZG、 M5 ZB、 M9S、
M9HL、 M9HY的 SOD同工酶进行了研究 ,结果显示反
应阴性 .
3　小结
( 1)利用酯酶同工酶对 M5、 M9及其它羊肚菌进
行分类鉴定、生理生化研究时 ,要严格注意所取材料
的生长期及取材部位的一致性 ,以提高分类鉴定的
可信度 .即使对那些生长期或组织部位特异性不明
显的同工酶研究时 ,也尽可能严格统一取样 ,这样做
可最大程度的减少可能产生的误差 ,从而提高实验
结果的重现性 .
( 2)在上述基础上 ,利用酯酶同工酶对 M5、 M9
进行分类及亲缘关系的鉴定也是切实可行的 .故可
进一步推广应用到其它羊肚菌及食用菌等分类鉴定
中 ,以便同形态、生化、遗传学等方法结合起来 ,对羊
肚菌及其它食用菌进行综合认证 .
( 3)因另有几种南泥湾野生羊肚菌菌种还在分
离纯化阶段 ,故本实验只对已分离纯化的编号为 M5
不同生长期及不同组织中 ES T、 SOD同工酶作了初
步分析研究 (由于没有采到 M9的子实体 ,故只对部
分生长期的同工酶作部分研究 ) ,为同工酶在羊肚菌
分类鉴定及生理生化研究中的应用提供有效的参考
依据 .
( 4)本试验仅对 M5、 M9不同生长期及不同组织
部位的 ES T, SOD同工酶做了研究 ,其它酶对 M5、
M9是否也有生长期及组织部位的特异性 ,有待于进
一步研究 .
参考文献:
[ 1]任桂梅 ,权洪生 .陕北南泥湾羊肚菌资源调查初报 [ J].延安大学学报 (自然科学版 ) , 1999, 18( 2): 58 61.
[ 2]程东升 ,潘学仁 .美味侧耳五种酶的同工酶谱在不同菌体组织中的变化 [ J].中国食用菌 , 1995, ( 6): 30 32.
[ 3]林彬 ,贾身茂 .羊肚菌菌丝体酯酶同工酶的检测 [ J].食用菌 , 1995, (增刊 ): 8.
〔责任编辑　李晓霞〕
Analysis on esterase isozyme of Morchella
in different growth stage
REN Gui-mei, CHEN Guo-liang, GAO Xiao-pen, XIN Xi-hong, WANG Xia
( Co lleg e of Life Science of Yanan Universi ty , Yanan 716000, China )
Abstract: Esterase isozyme of tw o Morchel la species w hich number of M5 , M9 in dif ferent g row th stag e and
tissue had been analy zed by using po lyacrylamide gel elect ropho resis. The resul ts indica te that there is
obvious dif ference o f enzyme-band o f the same specie.
Key words: M rochella; dif ferent grow th stag e ; esterase ; i so zyme
79第 1期　　　　　　　　　　　任桂梅 ,等:陕北羊肚菌不同生长期酯酶同工酶的分析