全 文 ：食用菌学报 2010.17(1):65 ～ 68
收稿日期:2009-12-29 原稿;2010-01-28 修改稿
基金项目:德国 Bundesministr ium fǜ r Forschungund Technologie , Bonn 科研基金资助项目(编号:SFB366)的部分
研究内容
作者简介:贾　薇(1971-), 女 , 1993 年毕业于郑州轻工业学院 , 副研究员 , 主要从事药用真菌活性成分研究 ,发表
主笔论文 20 篇。 　E-mail:jiawe i@saas.sh.cn
文章编号:1005-9873(2010)01-0065-04
姬松茸子实体多糖 ABMB3 对小鼠免疫功能的影响
贾　薇1 , 2 , 严淑玲2 , 樊　华2
(1国家食用菌工程技术研究中心 , 农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室 ,上海市农业遗传育种重点开放
实验室 , 上海市农业科学院天然药用资源研究与开发中心 , 上海市农业科学院食用菌研究所 ,上海 201106
2柏林夏洛蒂医科大学分子生物学和生物化学研究所 ,德国柏林)
摘　要:姬松茸(Agaricus blazei)子实体经沸水提取 、乙醇沉淀 、DEAE-Sepharose Fast F low 和 Sephacryl S-
300HR 层析获得多糖 ABMB3 , 研究表明:200 μg/mL ABMB3 可以刺激小鼠淋巴细胞分泌免疫球蛋白 G
(Immunoglobulin G , IgG)、I gM 以及细胞因子白细胞介素 6(Inter leukin 6 , IL-6)、干扰素(I nter feron , IFN)
、 IL-2 和 IL-4 , 说明 ABMB3 可以提高小鼠的免疫功能。
关键词:姬松茸;多糖;免疫活性
　　姬松茸(Agaricus blazei )属于担子菌亚门
(Basidiomyco tina)、层菌纲(Hymenomycetes)、
伞菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇
属(Agaricus),是一种美味的食 、药用真菌。姬
松茸含有多种生物活性物质 ,具有防癌抗癌 、降
血脂 、改善动脉硬化 、防治糖尿病和增强人体免
疫力等功效[ 1] 。
研究证明姬松茸提取物具有提高免疫力和
抑制肿瘤的功能 , 如 ITO 等发现 ,从姬松茸子实
体中提取的 1 ,6- -D-葡聚糖具有抑制 S-180 小鼠
腹水瘤细胞生长的功效[ 2] ;OHNO等发现姬松茸
子实体的碱性提取物具有很好的抑制 S-180小鼠
腹水瘤细胞增长的作用 ,而且证明高分支的 1 , 3-
-D-葡聚糖在抗肿瘤过程中起重要作用 [ 3] ;
NAKAJIMA 等研究发现姬松茸子实体沸水提取
物不但具有刺激小鼠 T 细胞和巨噬细胞分泌白
细胞介素 1β(Interleukin-1β , I L-1β)和 IL-6的
作用 , 而且能 刺激 小鼠产 生大 量抗 体[ 4] 。
MIZUNO 等研究发现从姬松茸中提取的水溶性
和水不溶性 -葡聚糖是主要的抗肿瘤组分[ 5 , 6] 等。
本文主要探讨姬松茸子实体多糖 ABMB3 对小
鼠淋巴细胞免疫球蛋白以及细胞因子分泌的
影响 。
1　材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品来源
　　姬松茸(A.blazei)子实体购于福建省古
田镇 。
1.1.2 实验动物
　　Balb/c 小鼠 , 8-10 周龄 , 雌雄不拘 , 购自
Zentralinsti tut fǜr Versuchstierzucht
(Hannover), 由柏林自由大学医学院动物房
饲养 。
1.1.3 试剂
　　羊抗鼠 Ig 多克隆抗体 、小鼠 IgG 和 IgM
(Pharmingen 公司);脂多糖 (LPS)(Calbio chem
公司);植物血凝素(PHA)(Sigma 公司);DEA E-
Sepharo se Fast F low 和 Sephacryl S-300H R(GE
公司);培养基 RPM I1640(Biochrom KG 公司),
热灭活的小牛血清(Kraeber 公司), 牛血清白蛋
白(BSA)(Sigma 公司), 青霉素(Boehringer
Mannheim 公司)、链霉素(Glutamine Me rck 公
司);Alamar Blue试剂 、IgG 、IgM 、IL-4 、IL-6 、IL-
2和 IFN- 各检测试剂盒(R&D公司);磷酸盐
缓冲液(PBS)等其它常用化学试剂均为 Sigma公
司的产品 。
食　用　菌　学　报 第 17 卷
1.2 方法
1.2.1 ABMB3的获得
　　将 1 kg 姬松茸子实体分别用 40 L 蒸馏水
100 ℃提取 3次 ,每次 1 h ,滤布过滤 ,合并滤液浓
缩后 ,用 10 000分子量透析袋透析。袋内大分子
部分过 DEAE-Sepharose Fast F low 柱 ,用 NaCl
(0 ～ 2 mo l/L)梯度洗脱 ,盐相成分 2过凝胶柱
Sephacryl S-300HR ,经离子色谱检测 ,半乳糖与
葡萄糖比例为 1∶5的组分为多糖 ABMB3。冷
冻干燥后溶于 PBS 中 ,配成 2 mg/mL 的 ABMB3
溶液 ,20 000 g 离心 30 min除菌后备用。
1.2.2 小鼠脾淋巴细胞的制备
　　小鼠脾淋巴细胞的制备按参考文献[ 7]的方
法进行。
1.2.3 ABMB3作用浓度筛选
　　分 别 测 定 浓 度 为 10 、 50 、 200 、 500 、
1000 μg/mL ABMB3对小鼠脾淋巴细胞的增殖
率 ,以筛选其作用浓度 , 按参考文献[ 7] 的方法
进行 。
1.2.4 免疫球蛋白的测定
　　将 180 μL淋巴细胞悬浮液(2 106个/mL)
加至 96 孔板中 , 分别加入 20 μL 2 mg/mL
ABMB3 、500μg/mL LPS 、60 μg/mL PHA ,以等
体积的 PBS 溶液做阴性对照 ,于 37 ℃、5% CO2
的条件下培养 2 ～ 14 d 。从第 2 天开始隔天取
样 ,上清液-20 ℃保存备用 。
将 100 μL 浓度为 0.2 μg/mL 的羊抗鼠 I g
多克隆抗体 加入到 96孔板中 ,锡箔纸覆盖 4 ℃
过夜 ,用 0.1%的 Tween PBS 溶液洗涤 5 次 ,加
入含 1%BSA的 PBS溶液室温培养 1 h封闭掉
非特异性的抗体结合位点 ,洗涤 5次后 ,分别加
入 100 μL 样品 、IgG 标准样品培养 2 h ,用 IgG
检测试剂盒测定免疫球蛋白含量 ,操作步骤按说
明书进行。
I gM的测定步骤同上。
1.2.5 细胞因子的测定
　　将 180 μL淋巴细胞悬浮液(2 106个细胞/
mL)加至 96孔板中 ,分别加入 20 μL 2 mg/mL
ABMB3 、500μg/mL LPS ,以等体积的 PBS 作阴
性对照 ,在 37 ℃、5% CO2的条件下分别培养 2 、
4 、6 d ,吸取 50 μL上清液 ,分别用检测试剂盒测
定 I L-2 、 IL-4 、 I L-6 和 IFN- 的含量 ,操作步骤
按说明书进行。
2　结果与分析
2.1 ABMB3作用浓度
　　从图 1 可以看出 , ABMB3 的浓度为 50 ～
500 μg/mL时具有明显的刺激淋巴细胞增殖的作
用 ,本研究选用 200μg/mL的 ABMB3作为试验
浓度 。
图 1　不同浓度 ABMB3 刺激小鼠脾淋巴细胞增殖率
Fig.1　Effect of ABMB3 concentration on mouse
spleen lymphocyte proliferation
2.2 ABMB3对 IgG 、IgM分泌的影响
从图 2 、3可以看出 , ABMB3(200 μg/mL)刺
激小鼠淋巴细胞 2 d 后 , IgG 开始大量分泌 ,第 8
天达到高峰 ,之后开始下降。 IgM则是从第 4天
开始大量分泌 ,第 10天达到高峰。
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第 1 期 贾　薇 ,等:姬松茸子实体多糖 ABMB3 对小鼠免疫功能的影响
2.3 ABMB3对细胞因子分泌的影响
　　从图 4 、5可以看出 , ABMB3(200 μg/mL)与
小鼠淋巴细胞一起培养 , 第 2 天 I L-6的分泌量
最大 、I FN-γ第 2天开始分泌量增加 ,第 4天分泌
量最大。I L-2 、I L-4分泌量见图 6 、7。
3　讨论
　　IgG 是人和动物血清中含量最高的免疫球蛋
白 ,是动物自然感染和人体免疫所产生的主要抗
体;IgM 在体内最早产生 ,持续时间最短 ,在抗感
染免疫的早期起着十分重要的作用[ 8] 。ABMB3
(200 μg/ml)刺激小鼠淋巴细胞后大量分泌 IgG
和 IgM ,表明 ABMB3 可以显著激活小鼠免疫
系统 。
T辅助细胞(T helper cell , Th)根据其产生
细胞因子的不同分为 Th 1 和 Th 2 两大亚群。
Th 1细胞分泌 IFN-γ和 IL-2 ,Th 2细胞分泌 I L-
4 、I L-6等细胞因子[ 9] 。本研究结果显示 ,姬松茸
子实体活性组分 ABMB3 能激活小鼠脾淋巴细
胞分泌 I L-6 、I FN- 、 I L-2 和 I L-4 等 , 说明
ABMB3可以通过刺激淋巴细胞中的 T 辅助细胞
分泌细胞因子来调节免疫作用 。
本试验为 ABMB3 的免疫机制研究提供参
考 ,还需要进行深入探讨 ,如对巨噬细胞 、自然杀
伤细胞(Natural Killer cells , NK cells)、人淋巴
细胞的作用等。
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[本文编辑] 　王瑞霞
Effect of a Polysaccharide Fraction from Agaricus blazei
Fruit Bodies on Mur ine Immunological Funct ions
JIA Wei
1 , 2＊ , YAN Shuling2 , FAN Hua2
(1National Research Center for Edible Fungi Biotechnology and Engineer ing , Key Laboratory of Applied Mycological
Resources and Utilization , Ministr y of Agriculture , People s Republic of China;Key Laboratory of Agricultural Genetics
and Breeding of Shanghai;Research Center of Natural Medicinal Resources , I nstitute of Edible Fungi , Shanghai Academy
of Agr icultur al Sciences;2 Institut fǜr Molekularbiologie und Biochemie , Charite Universitä t –Medicine Berlin ,
Arnimallee 22 , D-14195 Berlin , Germany)
Abstract:A polysacchar ide fr action , ABMB3 , was obtained from f ruit bodies of Agaricus blazei following
extr action with boiling water , ethanol precipita tion , ion exchange chromatography (DEAE-Seph arose Fast
Flow) and gel filtr ation chromatograph y(Sephacryl S-300H R).ABMB3 at a concentr ation of 200 μg/mL
improved mur ine immunological f unctions by enh anc ing levels of IgG , I gM , IL-6 , IFN , IL-2 and IL-4.
Key words:Agaricus blazei ;polysacchar ide;immunological f unction
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