全 文 ：食用菌学报1 9 99.3 ( 6 ):3 1 一1 6
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羊肚菌多糖 M P E一 SPI 分离纯化及性质鉴定 `
魏 芸 张天佑 张 妹 刘庆辉
( 北京市新技术应用研究所 , 北京 1 (X刃3 5)
摘 要 羊肚菌 〔Mo hcr e l必 esc u len at ( L
.
) eP sr
.
)〕多糖具有降血脂及抗肿瘤功能。 从羊肚菌
培养液中得到分子量 10 0 00 一 10 0 0 万的多糖 M E P 一 SP , 采用 D EAE 一纤维素离子交换柱及
块p h一 C L 一 6 B柱 , 以水为洗脱液 ,分离得水溶性多糖 M五P 一 SP I 。 实验结果表明 , 州田 P 一 SP I是一种由木糖 、 葡萄糖 、阿拉伯糖和半乳糖 (摩尔比 29 : 24 : 61 : 3 9) 残基为重复单元组成的杂多糖 ,
分子量约为 n 50 。 从红外光谱 ( IR )及核磁共振氢谱 ( ’ HN M服 )看出主链包括 p一毗喃糖昔键 。
关键词 羊肚菌 ; 多糖 ; 分离纯化 ; 性质鉴定 ; 多糖组成分析
自日本人千原川 19 70 年报道从香菇中分离出一种抗肿瘤多糖而轰动整个医学药物界之
后 ,全世界掀起了一股从食用菌中寻找抗肿瘤药物的热潮 。
羊肚菌是一种低温型大型食药兼用菌 ,在我国的《广菌谱》和《本草纲目》中 , 就被列人 “ 菜
部” ,称为羊肚菜 。 其肉质脆嫩香甜可口 ,是食用菌中的珍品之一 , 同时具有增强免疫力 、抗肿
瘤 、 防衰老等作用 。 食用菌多糖具有独特的生物学特性 , 日益受到重视 ,本试验对羊肚菌多糖
进行了分离纯化 ,并对纯化的 M E P 一 SP I 多糖进行分析鉴定 。
1 实验部分
1
.
1 试荆和实验材料
I )E A E 一纤维素 (二乙氨乙基纤维素 , 简称 D E 一 5 2 )为 W h at ~ 公司产品
;已知分子量的
葡聚糖 ( D ex tr an )及标准多糖为 is g m a 公司产品 ; se p h~
e
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一 6 B 为 P ha mr ac i a 公司产品 ;其
他均为国产试剂 。 实验材料取自北京市食品研究所 ,天然羊肚菌菌种经液体培养得到菌丝体 ,
菌丝体通过液体深层发酵制成营养液 ,再通过超过滤法得到羊肚菌粗多糖川 。
.1 2 仪器
日本岛津 U V 2 5 0 l PC 紫外分光光度计 ,高效液相色谱仪 W a t e sr 6 0 0 , t j l t r a h y d r o g e l ZX() 0
和 u h r ha y d r o g e l 50 色谱柱串联 , w at e sr 41 0 型示差折光检测器 , 12 29 型高效毛细管电泳仪 ,
岛津 cG 一 g A 气相色谱仪 , 弹性石英毛细管柱 25 m x 0
.
3
1
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X 0
.
25 拜m , 王 一 54 及凝胶渗透
色谱 ( G P )C 仪器 ( 自制 ) 。
1
.
3 多精提取及分离纯化
按文献〔2〕提取粗多糖 N IE P ,取分子量为 10 00 一 盆0 00 万的粗多糖 M E P 一 SP 10 mg
收稿 日期 : 1 99 9一 0 6 一 15初稿 ; 19 9 9 一 0 8 一 0 9修改稿
, 北京市科研院所科技开发基金资助项目。 本研究得到北京市食品所宋淑敏教授大力支持 ,谨此致谢
DOI : 10. 16488 /j . cnki . 1005 -9873. 1999. 03. 003
4 1食 用 菌 学 报 6卷
溶于 lmL去离子水中 ,通过 DE A E 一纤维素柱 ( 1〕E 一 52 , O H 型 )用去离子水洗脱 , 15 m L /管收
集 。 苯酚 一 硫酸法检测多糖峰位 ,合并单一峰多糖 。 冷冻干燥后 ,样品溶于 l m L 蒸馏水中 ,过
段 p h~
e C L 一 6 B 柱 ,用苯酚 一硫酸法检测多糖峰位 ,收集有多糖部分的洗脱液 ,冷冻干燥 ,得
到一种白色棉絮状单一多糖 ( M E P 一 SP I ) 。 M E P 一 SP I 经 K B r 压片 ,红外光谱分析及核磁共
振氢谱分析 ( ’ H N M R ) 。
1
.
4 纯度鉴定及分子且测定
本实验用高效液相色谱法鉴定多糖纯度并测定其分子量 。 流动相为 0 . lmo l/ L 磷酸盐缓
冲液 ,流速为 0 . 6m日m ion
1
.
5 高效毛细管电泳及气相色谱分析
M王:P 一 s P I 10 gtn 溶于 l m L l mo l/ L 硫酸中 ,封管水解 10 h , 中和 , 离心 , 上清液与 a 一蔡胺衍生后进行高效毛细管电泳 ( H P CE )分析 。 混和单糖标准采用同样方法衍生后进行分析 。 高
效毛细管电泳实验条件 : 电压 18 K V , 电流 46 M A ,紫外检测波长 254 mn ,硼砂缓冲液 10 0~ UL , p H 10 . 0 。 气相色谱分析时 ,将水解物及各种单糖制成三甲基硅烷衍生物 (3J 。
2
.
1
结果
多旅的纯化
2
.
1
.
1 采用 DE 一 52 纤维素离子交换柱和 反p h~
e c L 一 6B 凝胶柱进一步纯化得到多糖
( M王: P 一 SP I )
。 图 1 为多糖在 D E 一 52 纤维素离子交换柱上的洗脱曲线 。
2
.
1
.
2 M E P 一 sP I 在 w a t er s 高效液相色谱仪 (砚 t har y dogr el 20 0 和 lU t ar h州 r o g e 1 50 色谱柱串联 )上洗脱为单一峰 (图 2 ) 。
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圈 1 羊肚苗多桩在 D膝52 上的洗脱曲线
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圈 2 州压护 . S P I 凝胶沙通色谱洗脱曲钱
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2
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1
.
3 高效液相色谱法测定了两种多糖的分子量 , 以标准葡聚糖分子量对数对保留时间作
图 , 查得 M E P 一 SP I 分子量为 1 50 0( 图 3 ) 。
2
.
1
.
4 经高效毛细管电泳测定 , M E P 一 SP I 含四种单搪 ,分别为木糖 、葡萄梢 、阿拉伯糖 、半乳
糖 (图 4 ) 。
3期 魏 芸等 :羊肚菌多糖 ME E S PI分离纯化及性质鉴定 15
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图 3 高效液相色谱对 M l :-P S P I 分子 . 的翻定
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5 经气相色谱分析 , M E P 一 SP I 有四种单糖 , 分别为木糖 、葡萄糖 、 阿拉伯糖 、半乳糖 , 它
们的摩尔比为 2 9 : 2 4 : 6 1 : 3 9 (图 5 ) 。
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2
.
2 多精结构初步分析
1 6食 用 菌 学 报 6卷
羊肚菌多糖 M EP一 P SI紫外光谱显示 , 在 2 60 ~ 和 280 nm 处未见蛋白质及核酸的特征吸收峰。 元素分析结果为含碳 39 . n % , 含氢 8 . 98 % ,不含氮 。 红外光谱显示 , 在 4 00 c0 m 一 ’
一 6 5 0 c m 一 ’ 区内具有多糖类物质的一般特征 。 在 3 3 5 c0 m 一 ’ 的吸收峰是游离 O H 的伸缩振动
峰 ,在 1 0 2 4 c m 一 ’ 和 1 O3 9 c m 一 ’ 为毗喃糖环的醚键 C 一 O 一 C 振动吸收峰 ;而毗喃环的对称伸缩
振动在 sl o mr 一 ’ 出现吸收峰 ;在 89c0 m 一 ’ 附近有 俘一 糖昔键的特征吸收峰阁 ,而在 84 c0 m 一 ’ 处
没有 a 一糖昔键的特征 吸收峰 。
在 M E P 一 SP I 核磁共振氢谱中有 料 . 8 2 P m 的共振信号 , 即 C , 质子区的信号峰在 5 .
即 pm 以下 ,进一步证明糖昔键为 日型川 。 在 鸽 . 4 9即m 处代表环上 2 位质子的信号 5[J 。
3 结论
本文对从 M E P 一 SP 精制所得羊肚菌多糖 M E P 一 SP I 的结构组成仅作了初步分析 , M E P
一 S IP 是由四种单糖缩合而成 、具有 俘一毗喃糖昔键 、分子量为 1 15 0 的杂多糖 。
参 考 文 献
吴锦文 . 天然生理活性物质香菇多糖和灵芝多糖的国内外研究进展 . 江苏食用菌 , 19 95 , l 6( 5) : 3 一 34 .
邹作华 ,宋淑敏 , 王熊等 . E F 一 1 食用菌多糖的分离提纯与结构研究 .食品科学 , 19 95 , 16( 4) : 43 一 46 .
何进 ,张声华 . 构祀多糖的分离纯化及组成研究 . 中国药学杂志 , 19% , 31 ( 12) : 7 16 一 720 .
梁忠岩 , 张翼伸 . 长白山松杉灵芝子实体水溶性多糖的分离鉴定与结构研究 . 生物化学与生物物理学报 ,
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,
54 ( 12 )
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