全 文 ：　［收稿日期］　２０１１－０７－２４；２０１１－１１－０１修回
　［作者简介］　于加平（１９７３－），男，讲师，从事分析化学和天然产物的教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｊｉａｐｉｎｇ０６０７＠ｔｏｍ．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１１）１２－０７８２－０２２６－０３
水蜡树果中多糖的提取纯化及其抗氧化性
于加平
（吉林农业科技学院 生物工程学院，吉林 吉林１３２１０１）
　　［摘　要］为探索水蜡树果中多糖的提取纯化方法及其体外抗氧化活性，采用水提醇沉法提取水蜡树果
中多糖，并考察了水蜡树果多糖对羟基自由基（·ＯＨ）、超氧自由基（Ｏ２－·）和ＤＰＰＨ自由基（ＤＰＰＨ·）的
清除效果。结果表明，水蜡树果多糖的含量为０．２２４ｍｇ／ｇ，方法回收率在９７．７０％～１００．５１％，ＲＳＤ 为
０．３７９％。说明，水蜡树果多糖具有很强的抗氧化活性，是天然的抗氧化剂，对疾病的治疗、食品领域及化妆
品产业均有开发利用价值。
［关键词］水蜡树果；多糖；提取；抗氧化性
［中图分类号］Ｓ６８７ ［文献标识码］Ａ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ
ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍＦｒｕｉｔ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ＹＵ　Ｊｉａ－ｐｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ，Ｊｉｌｉｎ１３２１０１，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＬ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍｆｒｕｉｔ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ａｎｄ
ｔｈｅ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｎ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ（·ＯＨ），ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｒａｄｉｃａｌ（Ｏ２－· ）ａｎｄ
ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ·）ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ
Ｌ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍｆｒｕｉｔ　ｗａｓ　０．２２４％．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９７．７０％～１００．５１％ ｗｉｔｈ　ＲＳＤｏｆ　０．３７９％．Ａｌ
ａｂｏｖｅ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｆ　Ｌ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍｆｒｕｉｔ　ｗａｓ　ａ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｗｉｔｈ　ｓｔｒｏｎｇ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ａｎｄ　ｉｔ　ｈａｄ　ｖａｌｕｅｓ　ｆｏｒ　ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｆｏｏｄ
ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ａｎｄ　ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ　ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ　ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　水蜡树（Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ　ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｕｍ Ｓ．Ｅｔ　Ｚ．）属
木犀科女贞属植物、落叶灌木［１］。我国水蜡树资源
非常丰富，主要分布于山东、江西、安徽、江苏、湖南、
陕西等地，具耐干旱、结果率高、收效大等优点，目前
主要用作城市绿化，其果实大部分被废弃。水蜡树
的枝叶具有清热解毒、消肿止痛的功效［２］。目前，有
关水蜡树活性成分的研究主要是齐墩果酸、氨基酸
和微量元素［３］，而有关水蜡树果中多糖的研究却鲜
见报道。据现代药理和临床研究表明，多糖具有很
强的生物活性，是一种免疫调节剂，它能激活免疫细
胞，提高机体的免疫功能［４］。除此之外，多糖还具有
抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗菌抗病毒、保护肝
脏等保健作用［５－７］。为进一步研究水蜡树药用价值，
笔者以水蜡树果为原料，对水蜡树果中多糖进行提取
纯化，并对其抗氧化性进行了研究，可为水蜡树的进
一步研究和开发利用提供理论依据和数据支持。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 水蜡树果 采自吉林农业科技学院校园
内，经专家鉴定为水蜡树果。阴干、低温烘干处理为
干品。
１．１．２ 仪器 ＪＡ１２０３Ｎ型电子天平，上海精密科
学仪器有限公司；ＤＹＦ－５００型摇摆式高速万能粉碎
机，江阴市万达药化机械有限公司；ＵＶ－１６００型紫
外可见分光光度计，北京普析；ＳＨＢ－ＩＩＩＡ型循环水
真空泵，郑州长城科工贸易有限公司；ＤＨＧ－９２４０Ａ
型电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；
ＨＨ－Ｓ型水浴锅，江苏省金坛市正基仪器有限公司。
１．１．３ 试剂 乙醚、无水乙醇、浓硫酸、苯酚、水杨
酸、葡萄糖、Ｔｒｉｓ、盐酸、邻苯三酚、Ｈ２Ｏ２、硫酸亚铁、
氯仿、正丁醇、ＤＰＰＨ、氢氧化钠，以上试剂均购于沈
阳市新宇化工试剂厂，均为分析纯。
１．２ 方法
１．２．１ 水蜡树果多糖的提取与纯化 取２００ｇ水
蜡树果粉末，用乙醚进行脱脂脱色，然后于１Ｌ蒸馏
水中煮沸４ｈ，间歇搅拌，过滤，滤渣用同样方法水
提４次，合并提取液，将提取液减压浓缩至３００ｍＬ。
将浓缩液ｐＨ 调为８．０，然后滴加 Ｈ２Ｏ２脱色，直至
色素完全除去，再用ｓｅｖａｇｅ法［８］去除蛋白，再经离
　贵州农业科学　２０１１，３９（１２）：２２６～２２８
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
心机离心分离，得上清液。将上清液于流动水中透
析４８ｈ，透析液减压浓缩，透析液中加９５％的乙醇
（使含醇量达８５％以上），于冰箱中静置过夜。离心
分离，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗２次，真
空干燥至恒重，即得精制水蜡树果多糖。
１．２．２ 水蜡树果多糖含量的测定
１）标准曲线的绘制。采用苯酚－硫酸法［９］，以
葡萄糖为标准样品，精密称取１０５℃干燥至恒重的
无水葡萄糖标准品２５ｍｇ，置于２５０ｍＬ容量瓶中，
加蒸馏水至刻度，配成０．１ｍｇ／ｍＬ的标准溶液。分
别移取上述标准溶液０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、
０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ和０．７ｍＬ，依次加水，使最
终体积均为１ｍＬ。另取 Ｈ２Ｏ　１ｍＬ做空白试验，每
支试管加１０％苯酚溶液１ｍＬ，摇匀。然后每支试管
中迅速加入浓 Ｈ２ＳＯ４５ｍＬ，并放入冷水中冷却（摇
５ｍｉｎ后放置３５ｍｉｎ），摇匀。在４９０ｎｍ处测定吸光
度，绘制标准曲线，得回归方程：Ｃ＝０．６２４　Ａ－
０．０２１，ｒ＝０．９６７（ｎ＝５）。
２）换算因子ｆ的计算。称取１．２．１中所得纯
化多糖１ｍｇ，定容至５０ｍＬ，使浓度Ｃｓ＝０．０２ｍｇ／
ｍＬ。精确量取１ｍＬ按标准曲线绘制方法测定吸光
度，得Ａ＝０．０５７，代入回归方程得Ｃｆ＝０．０１５，校正
因子ｆ＝Ｃｓ／Ｃｆ＝１．３３。
３）水蜡树果多糖含量的测定。准确称取５．００ｇ
水蜡树果粉末，按照１．２．１的提取方法提取多糖，再
按标准曲线绘制方法测定吸光度Ａ，将Ａ代入回归
方程得Ｃ。根据下列公式计算得多糖的含量ｍ。
ｍ／（ｍｇ／ｇ）　＝Ｖ
·Ｃ·Ｆ
Ｗ
式中，Ｖ 为提取液的体积，Ｃ为样品液中所含多
糖量（ｍｇ），ｆ为校正因子，Ｗ 为水蜡树果样品质量
（ｇ）。
４）回收率和精密度检验。为了考察方法的可
靠性，精密称取水蜡树果样品５份（每份１．０００ｇ），
分别加入一定量纯化的水蜡树果多糖，按３）方法进
行测定。
１．２．３ 水蜡树果中多糖的抗氧化性研究
１）对 ＤＰＰＨ·自由基的清除率。准确称取
１．８１ｍｇ的ＤＰＰＨ，用无水乙醇定容至２５ｍＬ（避光
保存），取１０ｍＬ用无水乙醇稀释２倍得到浓度为
０．１μｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ溶液。吸取０．１ｍＬ浓度分别
为 ０、０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．４０ｍｇ／ｍＬ、０．６０ｍｇ／ｍＬ、
０．８０ｍｇ／ｍＬ的多糖溶液，置于干燥试管中，并向各
试管中分别加入２ｍＬ　ＤＰＰＨ溶液，轻轻摇匀，在黑
暗中放置２０ｍｉｎ，以８５％乙醇为空白，在５１７ｎｍ处
测定吸光度值。每个试样作３次平行试验，取平均
值。按下式计算清除率。
Ｐ／％＝（１－Ａｉ－ＡｊＡ０
）×１００
式中，Ａ０为０．１ｍＬ　８５％乙醇溶液加 ２ｍＬ
ＤＰＰＨ溶液的吸光度值，Ａｉ为０．１ｍＬ多糖溶液加
２ｍＬ　ＤＰＰＨ溶液的吸光度值，Ａｊ为０．１ｍＬ样液加
２ｍＬ　８５％乙醇溶液吸光度值，Ｐ为清除率。
２）对超氧阴离子自由基的清除率。分别取４．５
ｍＬ　５０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液（ｐＨ＝８．２）于５
支试管中，置于２５℃水浴中预热２０ｍｉｎ，取出后立
即分别加入１ｍＬ浓度为０、０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．４０ｍｇ／
ｍＬ、０．６０ｍｇ／ｍＬ 和０．８０ｍｇ／ｍＬ 的多糖溶液和
０．４ｍＬ　２５ｍｍｏｌ／Ｌ邻苯三酚溶液，混匀后于２５℃水
浴中反应５ｍｉｎ，立即加入８ｍｍｏｌ／Ｌ　ＨＣｌ　１ｍＬ终止
反应，于４２０ｎｍ处测定吸光度值Ａｉ，空白对照以相
同体积蒸馏水代替样品，每个试样做３次平行试验，
取平均值。根据所测吸光度值，计算各种不同浓度
的水蜡树果多糖对抗氧化剂的清除率。按下式计算
清除率。
Ｐ／％＝（Ａ０－ＡｉＡ０
）×１００
式中，Ａ０为邻苯三酚溶液吸光度值，Ａｉ为样液
吸光度值，Ｐ为清除率。
３）对羟基自由基的清除率。取６支试管，分别
加入 浓 度 为 ６ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｆｅ２＋ －水 杨 酸－乙 醇 溶 液
１ｍＬ，再 向 试 管 中 分 别 加 入 １ｍＬ 浓 度 为 ０、
０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．４０ｍｇ／ｍＬ、０．６０ｍｇ／ｍＬ 和
０．８０ｍｇ／ｍＬ的多糖溶液，加蒸馏水至５ｍＬ，再分别
加入６ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２Ｏ２１ｍＬ，１０ｍｉｎ后以蒸馏水为参
比，于５１０ｎｍ处测定吸光度值。每个试样做３次平
行试验，取平均值。按下式计算清除率。
Ｐ／％＝（Ａ０－ＡｉＡ０
）×１００
式中，Ａ０为Ｆｅ２＋ －水杨酸－乙醇溶液吸光度值，
Ａｉ为样液吸光度值，Ｐ为清除率。
２ 结果与分析
２．１ 水蜡树果中多糖的含量
根据１．２．１方法提取水蜡树果多糖，然后按
１．２．２方法测定水蜡树果中多糖的含量，测得其中多
糖的含量为０．２２４ｍｇ／ｇ。
２．２ 水蜡树果中多糖的抗氧化性
２．２．１ 水蜡树果中多糖对ＤＰＰＨ·的清除率 水
蜡树果多糖对ＤＰＰＨ·有很强的清除作用，随着水
蜡树果多糖浓度的增加，对ＤＰＰＨ·的清除作用越明
显。多糖对ＤＰＰＨ·的清除活力随多糖浓度的增加
而增强，但随着浓度增加，清除率增加变缓（表１）。
２．２．２ 水蜡树果中多糖对Ｏ２－·的清除率 水蜡
树果多糖对Ｏ２－·也有很强的清除作用，５种浓度
的水蜡树果多糖对Ｏ２－·的清除率均随浓度的增加
而增大，即有一定的剂量效应。随着水蜡树果多糖
浓度的增加，对Ｏ２－·的清除作用越明显（表１）。
·７２２·　第１２期 于加平　水蜡树果中多糖的提取纯化及其抗氧化性研究
表１ 水蜡树果多糖对ＤＰＰＨ·、Ｏ２－·和·ＯＨ的清除率
　　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ
Ｌ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍｆｒｕｉｔ　ｔｏ　ＤＰＰＨ·，
Ｏ２－·ａｎｄ·ＯＨ
多糖浓度／（ｍｇ／ｍＬ）
Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
清除率／％Ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｒａｔｅ
ＤＰＰＨ· Ｏ２－· ·ＯＨ
０．００ ０．００ ０．００ ０．００
０．２０　 ５３．５３　 ６１．１２　 ６６．３２
０．４０　 ６１．２７　 ７３．０３　 ７９．８８
０．６０　 ８２．１０　 ８２．０１　 ８８．２３
０．８０　 ８９．０６　 ９０．９９　 ９８．８８
２．２．３ 水蜡树果中多糖对·ＯＨ的清除率 水蜡
树果多糖对羟基自由基也有很强的清除作用，随着
水蜡树果多糖浓度的增加，对羟基自由基的清除作
用越明显，即清除率与多糖的用量存在一定的量效
关系（表１）。
２．３ 回收率与精密度
由表 ２ 可 见，加 标 回 收 率 在 ９７．７０％ ～
１００．５６％，相对标准偏差（ＲＳＤ）为０．３７９％。说明，
该方法具有很好的精密度和准确度，此方法可行。
表２ 水蜡树果多糖含量测定的回收率和精密度（ｎ＝５）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　Ｌ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｉｌｕｍｆｒｕｉｔ
编号
Ｎｏ．
取样量／ｇ
Ｓａｍｐｌｉｎｇ
ａｍｏｕｎｔ
多糖含量／ｍｇ
Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ
加入纯化多糖量／ｍｇ
Ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ
ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
测定值／ｍｇ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｖａｌｕｅ
回收率／％
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ＲＳＤ／％
１　 １．０００　 ０．２２４　 ０．１３２　 ０．３５８　 １００．５６　 ０．３７９
２　 １．０００　 ０．２２４　 １．１５２　 １．３５６　 ９８．７３
３　 １．０００　 ０．２２４　 ０．３１８　 ０．５４４　 １００．３１
４　 １．０００　 ０．２２４　 ０．７１８　 ０．９２９　 ９８．６０
５　 １．０００　 ０．２２４　 ０．３２７　 ０．５３８　 ９７．７０
３ 小结
由试验结果可知，水蜡树果中多糖的含量为
０．２２４ｍｇ／ｇ，水 蜡 树 果 多 糖 对 ＤＰＰＨ 自 由 基
（ＤＰＰＨ·）、超氧阴离子（Ｏ２－ ·）和羟基自由基
（ＯＨ·）均有显著的清除效果，因此，水蜡树果多糖
具有较强的抗氧化性，是一种天然的抗氧化剂，对疾
病的治疗及化妆品产业均有开发利用价值。
目前，水蜡树主要用作城市绿化树种，其果大部
分被废弃。本研究可为水蜡树资源在药用价值等方
面的进一步开发和利用奠定理论基础和数据支持。
［参 考 文 献］
［１］ 于加平，常 序，代春梅．原子光谱法测定水蜡树果中
微量元素的含量［Ｊ］．贵州农业科学，２００９，３７（１２）：
１６９－１７０．
［２］ 周立新，丁 怡．水蜡树化学成分的研究［Ｊ］．中国中
药杂志，２０００（９）：５４１－５４３．
［３］ 李英霞，彭广芳，林慧彬，等．水蜡树源的开发利用
［Ｊ］．时珍国药研究，１９９７（１）：９３－９４．
［４］ 于加平，常 序，李文渊．超临界ＣＯ２处理黄花忍冬果
后多糖的提取及含量的测定［Ｊ］．西南农业学报，
２０１０，２３（１）：１８１－１８３．
［５］ 李雪华，龙盛京，谢云峰，等．龙眼多糖、荔枝多糖的分
离提取及其抗氧化作用的探讨［Ｊ］．广西医科大学学
报，２００４，２１（３）：３４２－３４４．
［６］ 浦跃武，王金全．玛咖多糖的抗氧化性研究［Ｊ］．安徽
农业科学，２００９，３７（２８）：１３０８３－１３０８５．
［７］ 刘晔玮，邸多隆，葛 斌，等．锁阳多糖提取工艺的研
究［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００６（１８）：１００７－１００９．
［８］ 李 玲，陈常秀．大枣多糖的分离及抗氧化性研究
［Ｊ］．科学研究，２００９，３０（９）：４９－５１．
［９］ 赵宝发．迎春花多糖提取工艺研究［Ｊ］．文山师范高等
专科学校学报，２００８（９）：１０６－１０９．
（责任编辑：刘　海）
·８２２· 　　　　　　　　　　　　 　　　　　贵 州 农 业 科 学 ２０１１，３９卷