全 文 :秦岭产宜昌蛇菰生药学特征与抗氧化活性研究
孙 晓1,郭耀武2,刘 越2,王国海2
(1.陕西中医学院,陕西 咸阳 712046;2.陕西省食品药品检验所,陕西 西安 710065)
摘要:目的 对秦岭产宜昌蛇菰的生药学特征进行鉴别研究,为品种鉴定提供参考依据;对宜昌蛇菰体外抗氧化活性进行研
究,为有效利用其资源提供参考依据。方法 对原植物形态、性状、根茎、鳞叶、横切面显微进行鉴别研究;借助紫外分光光度
法,通过比较 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除率,评价宜昌蛇菰各部位不同溶剂提取物的体外抗氧化活性。结果 宜
昌蛇菰的茎横切面表皮以内为薄壁组织,外韧性维管束散在,无明显皮层、中柱以及髓部分化;鳞叶横切面可见主脉维管束散
在,无栅栏组织、海绵组织的分化,呈现等面叶的特征。宜昌蛇菰各部位不同溶剂提取液在实验质量浓度范围内,各提取物抗
氧化能力均随其质量浓度升高而增强。结论 宜昌蛇菰花茎和鳞叶横切面初生构造的特征,对其品种鉴定提供参考依据。
宜昌蛇菰根茎、鳞叶、花均具有明显抗氧化活性,三者间无明显差异,故提示其应全株入药。
关键词:宜昌蛇菰;秦岭;生药学;抗氧化活性
doi:10. 3969 / j. issn. 1009 - 6469. 2015. 07. 006
Pharmacognostical characteristics and antioxidation ability of
Qinling Balanophora henryi
SUN Xiao1,GUO Yao-wu2,LIU Yue2,et al
(1. Shaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang 712046,China;
2. Shaanxi Institute For Food and Drug Control,Xi'an 710065,China)
Abstract:Objective To identify the pharmacognostical characteristics of Qinling Balanophora henryi to provide a reference for spe-
cies identification,and to study the antioxidation ability of Balanophora henryi so as to provide references for its efficient use.Methods
We observed the morphology,properties,rhizome,squamous leaves and the cross-sectionmicrostructure of the original plant,and com-
pared the DPPH clearance rates with UV spectrophotometry to evaluate the extracts of each part in different solvents of Balanophora
henryi. Results From the cross-sectional view,basic parenchyma was within the stem,the outer vascular bundles were randomly dis-
tributed,and there was no obvious difference in cortex,column and medullary. Squamous leaf cross-section showed the main vein vascu-
lar bundles scattered. There was no obvious differentiation in palisade tissue and spongy tissue. Isobilateral leaf characteristics could be
seen. Different solvent extracts from various parts were within the experimental concentration range. Antioxidant capacity increased with
the increasing concentration of extracts. Conclusion Primary structure characteristics of cross-section of stem and leaf can provide ref-
erence for the identification of Balanophora henryi,the stem,leaves and flowers of which have significant antioxidant activity. There were
no significant differences among the three parts,which suggested that the whole plant could be used as medicine.
Key words:Balanophora henryi;Qinling;pharmacognostics;antioxidant activity
基金项目:秦巴特色中药的资源开发与质量研究(No 2013KTCQ03 -14)
通信作者:郭耀武,男,主任药师,硕士生导师,研究方向:中药资源与开发利用,E-mail:125296860@ qq. com
[7] Edwards DA,Hanes J,Caponetti G,et al. Large porous particles for
pulmonary drug delivery[J]. Science,1997,276(5320):1868 -1871.
[8] 赵 趁,陈爱政,王士斌,等.超临界二氧化碳流体技术制备多
孔微球研究进展[J].科学通报,2012,57(36) :3459 - 3466.
[9] 钦富华,胡 英,高建青. 多孔 PLGA 微球的应用研究进展
[J].广东药学院学报,2012,28(3) :351 - 355.
[10] Oh YJ,Lee J,Seo JY,et al. Preparation of budesonide loaded por-
ous PLGA microparticles and their therapeutic efficacy in a murine
asthma model[J]. J Control Release,2011,150(1) :56 - 62.
[11] 韩 飞,赵志冬,王跃生,等.肺部吸入制剂评价方法的研究进
展[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(11) :303 - 306.
[12] 陈 润,吴琼珠,平其能. 肺部给药微粒研究近况[J]. 药学进
展,2008,32(11) :499 - 504.
[13] 林 丽,黄 华,张 涛,等.伊潘立酮长效缓释微球的制备及
体外释药特性研究[J].第三军医大学学报,2014,26(3) :274
- 277.
[14] 戎 堃,刘彬丽,李木子,等.不锈钢膜乳化法制备 PLGA 微球
的初步研究与评价[J]. 中国中药杂志,2014,39(7) :1229 -
1233.
(收稿日期:2014 - 12 - 23,修回日期:2015 - 02 - 15)
·5421·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2015 Jul;19(7)
蛇菰是具有地方特色的民间草药。据《本草纲
目》记载,蛇菰又称“葛花菜”、“葛乳”,李时珍曰
“诸名山皆有之,惟太和山采取,云乃葛之精华也。
秋霜浮空,如芝、菌涌生地,其色赤脆,盖盖蕈类
也”[1]。蛇菰属植物为全寄生植物,寄主多分布在
海拔 500 ~ 2 600 m的多种林木,植株大多在中秋前
后露出地面,生长季节性强,生长期短,资源稀
少[2 - 3]。文献记载多分布于江西、湖北、湖南、广西、
四川、云南、台湾、福建等省区。本文研究所采的宜
昌蛇菰,是首次在秦岭北坡发现。文献报道蛇菰属
植物具有保肝补肝[4],益肾壮阳[5],止血生肌[6],调
经活血,清解酒毒之功效[7],近年来发现其还具有
抗疲劳,抗衰老[8 - 9],抗氧化活性[10]。本文对蛇菰
属宜昌蛇菰的生药学特征做了系统观察;同时采用
1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分析法对其体外
抗氧化活性进行研究[11],对指导宜昌蛇菰的药用研
究具有积极意义。
1 材料与试剂
宜昌蛇菰,2013 年 9 月采于陕西秦岭北坡周至
县境内,经郭耀武主任药师鉴定为宜昌蛇菰;水合
氯醛、稀甘油均为分析纯;维生素 C 标准品(批号:
100425 - 201103) ,购于中国食品药品检定研究院;
DPPH,Sigma-Aldrich 公司;水(纯化水) ,石油醚,乙
酸乙酯,正丁醇,无水乙醇等,均为分析纯。
德国赛多利斯 Sartorius BP 系列天平;奥林巴斯
双目生物显微镜。UV2550 -紫外分光光度计,日本
岛津公司;电热套;旋转蒸发仪,德国 Heidolph公司。
2 宜昌蛇菰生药学研究
2. 1 药材性状 宜昌蛇菰,植株矮小成圆柱状,顶
端膨大类圆形,根茎褐红色,表面粗糙外被鳞苞片,
红色。花雌雄异株,雄花花被裂片 3 片;聚药雄蕊,
花药 3 个;质地较脆,易折断,气微,味甘、苦。
2. 2 显微鉴别
2. 2. 1 茎横切面 表皮细胞单列,类圆形体积较
小,排列紧密。表皮内侧几乎全部为基本薄壁组
织,无皮层、中柱和髓部的分化。薄壁细胞呈类圆
形或椭圆形,直径 35 ~ 90 μm,排列较疏松。外韧型
维管束散在,形成层不明显,油细胞散在于薄壁细
胞中。见图 1。
2. 2. 2 鳞叶横切面 弯曲呈新月形。表皮细胞 1
列,排列紧密。叶肉组织无栅栏组织和海绵组织的
分化,薄壁细胞类圆形,直径 43 ~ 129 μm,维管束散
偏向于上表皮一侧,横切面观呈现类似等面叶的特
征,这可能与植株生长在林下阴湿环境有关,区别
与一般双子叶植物异面叶特征。见图 2。
图 1 宜昌蛇菰横切面图(40 ×10 倍)
注:1.表皮;2.皮层;3.韧皮部;4.木质部。
图 2 宜昌蛇菰叶横切面图(40 ×10 倍)
注:1.上表皮;2.皮层;3.维管束;4.下表皮。
2. 2. 3 根部切面 根部呈不规则团块,与寄主紧
密连接。切面可见寄主的组织,薄壁细胞类圆形,
维管束散在,无明显特征规律。
3 宜昌蛇菰各部位不同溶剂提取物抗氧化活性测
定比较
3. 1 样品处理 药材晾干,手工分成根、茎叶、花
三部分,各自粉碎,用 75%乙醇回流提取 3 次,每次
2 h,提取液旋转蒸发至无醇味,得宜昌蛇菰乙醇提
取物水溶液[12]。各部位水溶液依次用石油醚萃取
至无色得到石油醚层萃取液,乙酸乙酯萃取至无色
·6421· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2015 Jul;19(7)
得到乙酸乙酯层萃取液,正丁醇萃取至无色得到正
丁醇层萃取液。将各萃取液合并后旋转蒸发至成
浸膏状,分别转移到蒸发皿中,置烘箱中干燥,干燥
后得到各固体待测样品,保存于干燥器中备用。
精密称定各待测样品 50 mg,维生素 C 标准品
50 mg,分别用无水乙醇溶解定容至 50 mL 容量瓶
中,配制成质量浓度为 1 g·L -1的储备溶液。
DPPH是稳定的自由基,当有自由基清除剂存
在时,由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失,
其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系,因此
广泛用于定量测定生物试样和食品的抗氧化能
力[13 - 14]。精密称取 DPPH 100 mg,无水乙醇溶解并
定容至 100 mL棕色容量瓶,配制成质量浓度为 1 g·
L -1的 DPPH储备试液。无水乙醇稀释到所需各个浓
度,并做吸收曲线,结果表明 DPPH在 517 nm处有最
大吸收。在 0. 005 ~ 0. 150 g·L -1间线性良好,线性
方程:Y =15. 893 93X +0. 000 01,r2 =0. 999 97。
3. 2 各部位提取物抗氧化性活性测定 将各待测
样品储备液 1 g·L -1分别用无水乙醇稀释到所需
各浓度,分别精密吸取 2 mL 各浓度待测样品溶液,
分别加入到 2 mL质量浓度为 0. 08 g·L -1的 DPPH
试液中,室温避光反应 10 min,于 517 nm 平行测三
次取平均值,得到各个样品不同浓度的溶液吸光度
Ai;同法以无水乙醇为空白加入到 DPPH试液中,测
得空白吸光度 A0;同法用无水乙醇代替 DPPH 试液
与样品反应测得样品本地吸光度 Aj。同法用维生
素 C代替样品作为阳性对照。得到各个数据求出
DPPH清除率,并进一步计算其自由基清除率 IC50
值。见表 1。
清除率 =
A0 - (Ai - Aj)
A0
× 100%
表 1 宜昌蛇菰各部位提取物对 DPPH的清除率 /%
样品
质量浓度 / g·L -1
0. 005 0. 01 0. 025 0. 05 0. 1 0. 15
花乙酸乙酯提取物 27. 6 48. 8 91. 6 93. 5 95. 3 95. 7
茎叶乙酸乙酯提取物 26. 1 49. 4 92. 3 93. 9 94. 1 94. 3
根乙酸乙酯提取物 26. 0 48. 4 91. 6 92. 8 93. 1 93. 7
花正丁醇提取物 16. 3 26. 2 57. 1 91. 8 93. 6 94. 2
茎叶正丁醇提取物 15. 1 22. 2 56. 5 87. 9 93. 1 93. 9
根正丁醇提取物 17. 5 30. 5 60. 7 91. 5 94. 1 94. 6
维生素 C 23. 4 49. 1 95. 7 96. 3 96. 5 96. 6
3. 3 实验结果与小结 各浓度实验结果差异显
著,具有统计学意义。结果表明宜昌蛇菰各部位提
取物对 DPPH 的清除效果随浓度增大而呈增大趋
势,但当样品浓度到达一定浓度后,对 DPPH清除率
虽然也随浓度增大而增加,但是逐渐趋于平缓。同
一溶剂条件,宜昌蛇菰花、茎叶、根等三部位对 DP-
PH清除作用无明显差异。宜昌蛇菰同一部位用不
同溶剂萃取,所得提取物对 DPPH 清除效果有明显
差异,乙酸乙酯提取物活性和维生素 C 相似,正丁
醇提取物活性小于维生素 C,乙酸乙酯提取物活性
大于正丁醇提取物活性。
4 讨论
秦岭产宜昌蛇菰的茎与鳞叶横切面显示其具
有初生构造的特征,茎横切面表皮以内为基本薄壁
组织,无皮层、中柱和髓部的分化,维管束不规则散
在,茎特征与单子叶植物茎的显微构造类似,可能
与其生长周期较短,仅保留初生生长有关;叶肉组
织中无海绵组织和栅栏组织的分化,这些均区别于
双子叶植物异面叶特征,可能与其阴暗潮湿的生长
环境有关。借助于这些结构特征,对以后宜昌蛇菰
的品种鉴定提供参考依据。
秦岭产宜昌蛇菰具有明显的体外抗氧化活性,
且各部位活性相当,故提示其药用部位应为全株入
药。不同溶剂间的抗氧化活性比较有所差异,本实
验的抗氧化活性成分多聚集在乙酸乙酯层,提示提
取时应选择合适溶剂,尽可能完全溶出所需成分。
参考文献:
[1] 米长忠,周卫华,彭英福,等.湘西产筒鞘蛇菰生态环境及寄主
植物初探[J].湖南中医药大学学报,2011,31(11) :38 - 39.
[2] 陈吉炎,李 聪,王雪芹,等.蛇菰属药用植物的种类与研究进
展[J].时珍国医国药,2010,21(8) :2032 - 2034.
[3] 陈吉炎,李 聪,张路路,等. 疏花蛇菰的生药鉴别[J]. 中药
材,2010,33(9) :1395 - 1397.
[4] 周卫华,石慧娟,杨梅松竹,等.蛇菰水提物对大鼠酒精性肝损伤
的保护作用[J].中国老年学杂志,2012,10(32):4438 -4440.
[5] 覃大保,米长忠,杨 力,等.筒鞘蛇菰壮阳作用的研究[J].中
国民族医药杂志,2014,4(4) :45 - 46.
[6] 侯钦云,戴 忠,程显隆,等. 5 中蛇菰的化学成分比较研究
[J].药物分析杂志,2009,29(5) :697 - 701.
[7] 陆应彩,彭 霞,台海川,等.傣药思茅蛇菰薄层色谱鉴别[J].
中国民族医药杂志,2011,11(11) :38.
[8] 何 玲,高 辉,李春艳. 筒鞘蛇菰多糖抗疲劳作用研究[J].
怀化学院学报,2011,30(11) :43 - 45.
[9] 侯文斌,周丽丽,周卫华.蛇菰水提物对自然衰老小鼠的抗衰
老作用研究[J].中国民族民间医药,2012,21(3) :33.
[10] 王 慧,张红岐,邬昊洋,等.筒鞘蛇菰提取物及松柏苷的抗氧化
作用研究[J].三峡大学学报(自然科学版),2009,31(3):99 -101.
[11] 刘长龙,雷 慧,赵其秀,等.杨树芽提取物清除 DPPH 自由基
的作用[J].安徽医药,2013,17(7) :1091 - 1093.
[12] 杨黎江,路金荣,王晓娟,等.蛇菰多糖的提取及测定[J].昆明
学院学报,2010,32(3) :44 - 46.
[13] 邓 靖,莫正昌,汲广全,等.蛇菰提取物体外抗氧化活性研究
[J].食品科学,2010,31(5) :23 - 25.
[14] 成利娟,苏 涌,杨 翠,等.小麦胚芽油体内外抗氧化作用的
研究[J].安徽医药,2013,17(8) :1289 - 1291.
(收稿日期:2014 - 12 - 20,修回日期:2015 - 02 - 28)
·7421·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2015 Jul;19(7)