全 文 ：第 38卷 第 7期 东　北　林　业　大　学　学　报 Vol.38 No.7
2010年 7月 JOURNALOFNORTHEASTFORESTRYUNIVERSITY Jul.2010
1)黑龙江省青年基金项目(QC2009C52)。
第一作者简介:何淼 , 女 , 1975年 9月生 , 东北林业大学园林学
院 ,副教授。
通信作者:张启翔 ,男 , 北京林业大学 , 教授。 E-mail:zqx@bjfu.
edu.cn。
收稿日期:2009年 11月 30日。
责任编辑:任俐。
神农香菊组织培养和植株再生 1)
何　淼　董春艳　冯　博
(东北林业大学 ,哈尔滨, 150040) 　　　
张启翔
(北京林业大学)
　　摘　要　以神农香菊(Dendranthemaindicumvar.aromaticum)带腋芽的茎段为外植体 ,研究不同种类和质量浓
度生长调节物质对神农香菊茎段萌发以及再生的影响。结果表明:神农香菊茎段萌发的最佳诱导培养基为 MS+6-BA
0.1mg· L-1 +NAA0.1mg· L-1 ,萌发率为 90%;神农香菊茎段增殖最佳培养基为 MS+6-BA0.3mg· L-1 +NAA
0.1mg· L-1 ,增殖倍数为 4.1;最佳生根培养基为 MS+NAA0.3mg· L-1 ,生根率为 100%。
关键词　神农香菊;外植体;组织培养;植株再生
分类号　Q943.1;S682.1+1TissueCultureandPlantletRegenerationofDendranthemaindicumvar.aromaticum/HeMiao, DongChunyan,FengBo(SchoolofLandscapeArchitecture, NortheastForestryUniversity, Harbin150040, P.R.China);ZhangQixiang(BeijingForestryUniversity)//JournalofNortheastForestryUniversity.-2010, 38(7).-64 ～ 66
Anexperimentwasconductedtostudytheeffectsofdiferentconcentrationsandtypesofgrowthregulatorsontheger-minationandregenerationofDendranthemaindicumvar.aromaticumusingthestemsegmentswithaxilarybudsasex-plants.Resultsshowthattheoptimalculturemediumforthestem-inducedgerminationofD.indiumvar.aromaticumisMS
supplementedwith0.1mg/L6-BAand0.1mg/LNAA, withagerminationrateof90%;theoptimalmediumforthepro-liferationofD.indicumvar.aromaticumistheMScontaining0.3mg/L6-BAand0.1mg/LNAA, withamultiplicationcoeficientof4.1;theoptimalmediumforrootingisMSwith0.3mg/LNAA, witharootingrateof100%.Keywords　Dendranthemaindicumvar.aromaticum;Explants;Tissueculture;Plantregeneration
　　菊科菊属野生种中有一种新资源植物神农香菊 ,其花 、叶
及根均具有浓郁的香气 , 金秋时节千枝万朵 , 金黄一片 ,婀娜
多姿 , 散发出浓郁的馨香 , 民间常以其花 、叶阴干作香囊 [ 1] 。
目前国内菊科植物的组织培养研究较多 [ 2-5] , 而对神农香菊
的组织培养和植株再生研究较少 [ 6-7] , 以茎段为外植体再生
途径研究未见报道。 本研究以神农香菊茎段为外植体 ,建立
神农香菊的再生体系 。
1　材料与方法
试验于 2008年 12月份— 2009年 6月份在东北林业大学
园林学院组织培养实验室进行。 以神农香菊(Dendranthema
indicumvar.aromaticum)带腋芽的茎段作为试验材料。
无菌材料的获得:先用自来水将外植体表面冲洗干净 ,
再用洗涤剂溶液浸泡 15 ～ 30 min, 同时用毛刷不断搅动 , 并
用毛刷蘸洗涤剂溶液仔细轻轻地刷洗 ,以将外植体表面污垢
清洗干净为准 , 最后用流动的自来水冲洗 2h。洗净后放于
超净工作台上用 75%的酒精消毒 30s, 用无菌水冲洗 3次 , 然
后用 2%和 5%次氯酸钠消毒 10 ～ 20min,之后用无菌水冲洗
6 ～ 8次 , 置于无菌滤纸上将多余的水分吸干 , 备用。
初代培养:将外植体接种于以 MS为基本培养基添加不
同质量浓度 6-BA、NAA和 2, 4-D组合的初代培养基上 ,每处
理接种 30个外植体 ,光照培养 , 每隔 15d更换 1次培养基 , 培
养条件为温度(25±1)℃, 光照每天 12h, 光强为 2 000lx, 20d
后统计萌发率。
增殖培养:将萌发的腋芽接种到添加不同质量浓度 6-BA
(0 ～ 1.0mg· L-1)的培养基上 , 每处理接种 30个外植体 , 培
养条件为温度(25±1)℃,光照每天 12h, 光强为 2 000lx。 30
d后统计增殖倍数。
生根培养:将其幼苗接种到不同质量浓度 NAA和 6-BA
的培养基上 , 每处理接种 30个外植体 ,培养条件为温度(25±
1)℃,光照每天 12h,光强为 2 000 lx。 20 d后统计平均单苗
根数 、根长 、生根率和移栽成活率。
表 1　不同质量浓度 6-BA、NAA、 2, 4-D组合对神农香
菊茎段萌发的影响
植物生长调节剂
质量浓度 /mg· L-1
6-BA NAA 2, 4-D
外植体数 /
个
萌发率 /
% 长势
0 0 0 30 23.3 叶较小
0.1 0 0 30 36.7 叶较小
0.2 0 0 30 50.0 叶较小
0.3 0 0 30 46.7 绿色 、健壮
0.1 0.1 0 30 90.0 绿色 、健壮
0.2 0.1 0 30 63.3 绿色 、健壮
0.3 0.1 0 30 76.7 绿色 、健壮
0.1 0 0.1 30 60.0 黄绿色 、柔弱
0.2 0 0.1 30 53.3 黄绿色 、柔弱
0.3 0 0.1 30 50.0 叶较小 、柔弱
0.1 0 0.2 30 30.0 叶较小 、柔弱
0.2 0 0.2 30 43.3 叶片发黄
0.3 0 0.2 30 26.7 叶片发黄
　　注:所有数据为培养 20d时的统计值。
2　结果与分析
2.1　神农香菊茎段诱导和培养基的筛选
将带腋芽的茎段接种到初代培养基上 ,培养 10d左右 ,各
培养基中的腋芽均有不同程度的萌发 ,并随着培养天数的增
加 ,逐渐伸长生长, 在培养 20d时 ,接种在不同培养基上的茎段
腋芽萌发率和长势见表 1和图 1。采用不同质量浓度 6-BA诱
导时 ,腋芽萌发率最高可达 50%, 且普遍长势较弱;当采用不
同质量浓度 6-BA和 NAA组合诱导时 ,腋芽萌发率差异较大 ,
其中 NAA为 0.1 mg· L-1时腋芽萌发率普遍较高 , 可达
90%, 且腋芽长势良好;采用不同质量浓度的 2.4-D诱导时 ,
腋芽萌发率最高为 60%, 且叶片普遍黄化。综上所述 , 最适腋
芽萌发培养基为 MS+6-BA0.1mg·L-1 +NAA0.1mg· L-1。
2.2　分化及继代培养
将新萌发的腋芽接种到不同质量浓度 6-BA和 0.1mg· L-1
NAA的增殖培养基上 , 培养 15d后 , 所有腋芽基部开始有丛
生芽萌发。接种 30d后 , 各培养基上腋芽的增殖倍数和生长
情况见表 2和图 2。 在不添加 6-BA的配方中 , 增殖倍数低 ,
仅为 1.2, 且长势较弱;6-BA质量浓度为 0.4 ～ 0.6mg· L-1
时 ,腋芽增殖倍数均较高 , 分别为 8.7、6.6、 6.1倍 , 但丛生芽
细长柔弱 , 部分出现黄化现象 ,大部分不能长成正常植株;当
6-BA质量浓度为 0.3mg· L-1时 , 虽然增殖倍数较低 ,但是丛
生芽呈绿色 ,长势健壮;将 6-BA质量浓度增加到 0.8 ～ 1.0mg
· L-1时 ,出现黄化 , 增殖倍数下降。综上所述 , 最适增殖培养
基为 MS+6-BA0.3mg· L-1 +NAA0.1mg· L-1。
图 1　神农香菊茎段腋芽在不同培养基上的萌发情况(20d)
A.培养基为MS;B.培养基为 MS+6-BA 0.1mg· L-1 +NAA0.1mg· L-1;C.培养基为 MS+6-BA0.3mg· L-1 +NAA0.1mg· L-1;D.培
养基为 MS+6-BA0.1mg· L-1 +2, 4-D0.1mg· L-1;E.培养基为MS+6-BA0.1mg·L-1 +2, 4-D0.2mg· L-1;F.培养基为MS+6-BA0.
1mg· L-1。
图 2　神农香菊腋芽在不同培养基上的分化情况(30d)
A.培养基为 MS+NAA0.1mg· L-1;B.培养基为 MS+6-BA0.1mg· L-1 +NAA 0.1mg· L-1;C.培养基为 MS+6-BA0.3mg· L-1 +
NAA0.1mg· L-1;D.培养基为 MS+6-BA0.5mg· L-1 +NAA0.1mg· L-1;E.培养基为 MS+6-BA 0.8mg· L-1 +NAA 0.1mg·
L-1;F.培养基为 MS+6-BA1.0mg· L-1 +NAA0.1mg· L-1。
65第 7期　　　　　　　　　 　　　　　　何　淼等:神农香菊组织培养和植株再生
表 2　不同质量浓度 6-BA和 NAA组合对神农香菊茎段增殖的影响
植物生长调节剂质量
浓度 /mg· L-1
6-BA NAA
增殖倍数 生长状况
0 0.1 1.2(36/30) 黄绿色 ,柔弱
0.1 0.1 2.4(73/30) 绿色 ,柔弱
0.2 0.1 3.7(111/30) 绿色 ,健壮
0.3 0.1 4.1(122/30) 绿色 ,健壮
0.4 0.1 8.7(261/30) 绿色 ,柔弱
0.5 0.1 6.6(198/30) 部分黄化 ,柔弱
0.6 0.1 6.1(182/30) 部分黄化 ,柔弱
0.8 0.1 5.0(151/30) 黄化
1.0 0.1 2.3(70/30) 黄化
　　注:所有数据为培养 30d时的统计值(增殖倍数为继代后芽数 /
继代前芽数)。
2.3　诱导生根及移栽
将分化出较健壮的芽切成 1 ～ 2cm长的茎段 , 接种到生
根培养基上 , 诱导生根。 10 d后 , 所有茎段切口膨大 , 并出现
绿色突起 , 接种 20d后 ,在不添加 6-BA的两个配方中生根率
普遍较高 , 最高可达 100%,但根的长度 、数量稍有差别 ,其中
MS+NAA0.3mg· L-1培养基中根最长 , 达 5.8 cm, 数量最
多 ,达 10条且根最粗壮 , 在其他配方中 , 根较细长柔弱 , 生根
率较低。
当根长为 5 ～ 6cm时 , 将其移栽至已灭菌的基质中 [ V(草
炭土)∶V(珍珠岩)=2∶1] 20d统计结果:在不添加 6-BA的
配方中移栽成活率均较高 , 最高可达 86.7%。其他均较低 ,
详见表 3和图 3。
表 3　不同质量浓度 NAA和 6-BA组合对神农香菊生根和移栽的影响
植物生长调节剂质量
浓度 /mg· L-1
NAA 6-BA
生根率 /
%
平均根长 /
cm
平均根数 /
条
移栽成活
率 /%
0.1 0 73.3 2.1 6 63.3
0.3 0 100 5.8 10 86.7
0.1 0.01 100 6.1 13 73.3
0.3 0.01 93.3 7.2 18 70.0
0.1 0.05 86.7 6.3 6 53.3
0.3 0.05 56.7 5.9 7 30.0
　　注:所有数据为培养 20d时的统计值。
图 3　神农香菊在不同培养基上的生根情况(30d)
A.培养基为 MS+NAA0.3mg· L-1;B.培养基为 MS+NAA0.3mg· L-1 +6-BA0.01mg·L-1;C.培养基为MS+NAA0.3mg· L-1 +
6-BA0.05mg· L-1。
3　小结
本试验以带腋芽的茎段为外植体建立神农香菊再生体
系 , 研究结果表明:加入 NAA可以提高腋芽的萌发率 ,当加入
2, 4-D时会对腋芽萌发产生副作用 , 造成褐化或者死亡;在增
殖培养中随着 6-BA的质量浓度增加增殖倍数逐渐增加 ,
当 6-BA质量浓度达到 0.3mg· L-1时增殖倍数最高 ,再随着
6-BA质量浓度的增加则增殖倍数会降低 , 且长势较弱 ,甚至
出现黄花现象 , 这可能与培养条件有关(如:湿度 、温度等)。
再生苗在 MS+NAA0.3 mg· L-1培养基上的生根率可
达 100%,在混合基质 [ V(草炭土)∶V(珍珠岩)=2∶1]中移
栽成活率达 86.7%, 实现了快速繁殖和再生体系的建立。但
目前还存在一定的问题 , 如:神农香菊组培苗徒长和较弱的问
题一直没有得到根本解决 ,其壮苗的优化体系也有待研究。
参　考　文　献
[ 1] 　刘启宏 ,张树藩.神农架菊属一新变种 [ J].武汉植物学研究 ,
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66 　　　　　　　　　东　北　林　业　大　学　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　第 38卷