全 文 ：【实验研究】
盒子草多糖抑菌活性研究
陈艳1 ,林瑞新2 ,杨淑莉2 ,高志玲1
(1.白城市医学高等专科学校 ,吉林 白城　137000;　2.吉林大学第二医院 ,吉林 长春　130041)
中图分类号:R96　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1672-9153(2009)12-1240-02
第一作者简介:陈艳(1974～ ),女 ,博士 ,讲师 ,研究方向:糖生物学。
　　摘要:[目的] 测定盒子草粗多糖的抑菌活性。[ 方法]采用滤纸片抑菌圈实验法测定盒子草多糖抑菌效果;进而采用
试管法测定盒子草多糖的最低抑菌浓度(M IC)。[结果] 盒子草多糖对实验菌有明显的抑制作用 , 其中对黑曲霉和枯草
杆菌抑制作用最强 ,MIC=0.25 mg/ ml ,而对青霉和马青霉作用很弱 , MIC=4 mg/ml。[ 结论] 盒子草多糖具有一定的抑
菌活性。
关键词:盒子草;多糖;真菌;细菌;抑菌浓度
Study on the antibacterial activity of Actinostemma tenerum polysaccharides/ CHEN Yan , LIN Rui-xin , Y ANG Shu-li ,
et al.(Baicheng Medical Col lege , Baicheng , 137000 , J i lin , China)
Abstract:[ Objective] To analy ze the antibacte rial activities o f Actinostemma tene rum poly saccharide s.[ Methods] The
antimicrobial activities Actinostemma tene rum po ly saccharides we re de te rmined w ith filter paper disk method;and the
minimal inhibitory concentr ations (MIC)of Actinostemma tenerum poly saccharides w ere determined with Tube me thod.
[ Results] The result showed as follow ing:The tw o fung i of A spe rgillus nig er(M IC=0.25 mg/ml)and Penicillium chry-
sogenum (MIC=0.5 mg/ ml)w ere both inhibited by Ac tino stemma tenerum po ly saccharides , but the inhibition to Penicil-
lium sp.and Penicillium marneffei were same w eake r ,M IC=4 mg/m l.Actino stemma tene rum polysaccharide s could inhib-
it bo th of two bacteria and it was mo re obvious inhibito ry to Bacillus subtilis with the MIC w as 0.25 mg/ml , and to Esche-
richia coll.with the MIC w as 0.5 mg/ ml.[ Conclusion] Actinostemma tenerum po ly saccharides has definite antimicrobial
activity.
Key words:Actino stemma tenerum Griff;Po ly saccharide;Fungus;Bacteria;Antimicrobial activ ity
　　盒子草为葫芦科植物盒子草(Actino stemma
tenerum Griff.)的全草 。《本草纲目》记载 ,有小毒 ,主
治水肿 、疳积 、蛇咬伤 。经初步药理实验显示其水煎液
具有增强小鼠免疫功能 、抑制血小板聚集等作用。已
有研究[ 1 ～ 3]显示多糖具有抑菌作用 ,我们于 2008年 3
月至 2009年 7 月以盒子草为原料 ,提取了盒子草多
糖 ,研究了其对几种常见细菌和霉菌的抑制作用 ,并测
定了其最小抑菌浓度 。
1　实验部分
1.1　材料　盒子草:为葫芦科植物盒子草(Actinos-
temma tenerum Griff.)的全草 。产地:吉林松原。
1.2　供试菌种　细菌:大肠杆菌(Escherichia co ll),
枯草杆菌(Bacil lus subti li s)。真菌:黑曲霉(A spergi l-
lus nige r),青霉(Penicillium sp.),产黄青霉(Penici lli-
um chry sogenum), 马青霉(Penicillium marneffei)。
为东北师范大学生命科学学院微生物实验室保存
菌种 。
1.3　实验方法
1.3.1　盒子草多糖的制备　盒子草经 100 ℃热水浸
提 、滤布过滤 、残渣二次热水浸提 、滤布过滤 、合并上
清 、旋转蒸发浓缩 、80%乙醇沉淀 、Sevag 法脱蛋白 、二
次醇沉 、冷冻干燥得棕褐色盒子草粗多糖 。采用硫酸-
苯酚法测定多糖含量[ 4] 。
1.3.2　培养基的配制　按文献[ 5] 的方法配制牛肉膏
蛋白胨琼脂培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
1.3.3　菌悬液制备　在超净台里将转接后生长良好
的菌种试管斜面注入适量无菌水(约 5 m l),接种环轻
刮菌落 ,摇晃 ,置璇涡混合器混匀。
1.3.4　滤纸片扩散法测定抑菌效果　将多糖在 90 ℃
的烘箱中 ,放置 30 min , 灭菌 ,用无菌水配成 10.0 、
5.0 、2.5 、1.25 mg/ml的盒子草粗多糖溶液备用。
用打孔器将干净的滤纸制成直径为 0.5 cm 的小
圆纸片 ,干热灭菌后 ,分别浸入不同浓度的多糖溶液
中 ,使其充分吸收 ,备用。在无菌条件下 ,用已灭菌的
培养基制成平板 ,待冷却凝固后 ,在超净台里用移液器
取 0.1 ml菌悬液注入平板 ,用三角耙涂布均匀 ,每种
菌设置 2个重复平板 。
用无菌镊子夹取浸泡处理过的滤纸片贴在上述含
菌平皿上 , 每个平皿贴 2片 ,每一浓度的滤纸片间隔
·1240· 　预防医学论坛　2009年 12月第 15卷第 12期　　　　　　　　　　　　　　Prev Med Trib , Vol.15 , No.12 , Dec.2009　
DOI :10.16406/j.pmt.issn.1672-9153.2009.12.038
一定的距离 ,并以浸泡过无菌水的滤纸片作为对照。
每一种菌种做 2个平行样。放入(倒置)培养箱中培
养 ,细菌 37 ℃,真菌 28 ℃。细菌培养 24 h 后观察结
果 ,真菌 72 h后取出量取抑菌圈直径 ,观察结果。
1.3.5　试管法　根据滤纸片法所得的结果 ,参照文献
采用试管法对各受试菌种进行最低抑菌浓度测定
(M IC)。培养基以每管总体积 5 m l分装于试管(18
mmⅸ180 mm)中 ,在 120 ℃、0.1 Mpa条件下灭菌 20
min ,当灭菌培养基冷却至 50 ℃左右时 ,无菌操作加
入样品充分混匀 ,倍比稀释成 8.0 、4.0 、2.0 、1.0 、0.5 、
0.25 mg/ml的盒子草多糖溶液 ,无菌水做对照 ,分别
制成斜面 。取生长良好的受试菌划线接种于斜面上。
细菌放于 37 ℃温箱中。于 24 h观察菌落生长状态。
真菌放于 28 ℃温箱中 ,于 72 h后观察结果 。设置重
复组 。目测并以下列标准记录:菌完全无生长“ -” ;菌
生长迟缓 ,形成的菌落很小“ +” ;菌生长比较快形成菌
落较大“ ++”。取完全不生长管最低样品浓度为最低
抑菌浓度(MIC)。
2　结果
2.1　不同浓度盒子草多糖抑制效果　用无菌水配制
10.0 、5.0 、2.5 、1.25 mg/ml的多糖溶液 ,采用滤纸片
扩散法测定抑菌圈。结果见表 1 。
表 1　滤纸片法测定盒子草多糖的抑菌活性
多糖浓度/(mg/ml) 10 5 2.5 1.25 0.625 0.312 5
抑菌圈直径(mm)青霉 5.8±0.14 -　　 -　　 -　　 -　　 -
　　　　　　　　马青霉 5.7±0.19 -　　 -　　 -　　 -　　 -
　　　　　　　　黑曲霉 15.0±0.14 13.9±0.010 11.3±0.11 9.5±0.23 7.4±0.37 -
　　　　　　　　　产黄青霉12.8±0.19 9.3±0.045 8.4±0.29 7.6±0.32 6.5±0.33 -
　　　　　　　　　大肠杆菌12.0±0.20 9.3±0.017 7.8±0.32 6.5±0.21 5.4±0.27 -
　　　　　　　　　枯草杆菌17.8±0.34 14.0±0.030 13.6±0.28 12.1±0.35 11.0±0.15 -
　　　　　　　　无菌水 - - - - - -
　　注:“ -”表示无抑菌圈。
2.2　最低抑菌浓度(M IC)的测定[ 2] 　用无菌水配制
10.、8.0 、6.0 、4.0 、2.0 、1.0 、0.5 mg/ml的盒子草多糖
溶液 ,采用试管法测定样品 MIC ,取完全不生长管最
低样品浓度作为最小抑菌浓度 。结果见表 2。
表 2　盒子草多糖最低抑菌浓度(MIC)
供试菌种
多糖浓度/(mg/ml)
0.062 5 0.125 0.25 0.5 1 2 4 8
M IC/
(mg/ml)
青霉 ++ ++ + + + + - - 4
马青霉 ++ ++ + + + + - - 4
黑曲霉 + + - - - - - - 0.25
产黄青霉 + + + - - - - - 0.5
大肠杆菌 + + + - - - - - 0.5
枯草杆菌 + + - - - - - - 0.25
3　讨论
盒子草多糖对细菌 、真菌都有一定的抑制效果。
在真菌中 ,盒子草多糖对黑曲霉的生长抑制最强 ,在
10 mg/ml时 ,抑菌圈是(15.0 ±0.14)mm;产黄青霉
的生长也受到抑制 ,在 10 mg/ml时有抑菌圈 ,(12.8
±0.19)mm;但其他两种 ,青霉和马青霉的生长受盒
子草多糖的影响不显著 ,只是在 10 mg/ml时有抑菌
圈 ,分别为(5.8±0.14)mm 和(5.7±0.19)mm 。对
于两种细菌 ,盒子草多糖都能够抑制它们的生长 ,其中
对枯草杆菌的抑制作用更强 ,在 10 mg/ml时 ,抑菌圈
达到(17.8±0.34)mm 。对大肠杆菌抑制作用稍弱 ,
抑菌圈为(12.0±0.20)mm 。实验浓度内 ,随着浓度
的增大 ,盒子草多糖对于黑曲霉 、产黄青霉 、大肠杆菌
和枯草杆菌的抑菌效果均呈上升趋势。
盒子草多糖对各种菌类的最低抑菌浓度不同 。在
试验浓度内 ,对大肠杆菌的最小抑菌浓度(0.5 mg/
ml)高于枯草杆菌(0.25 mg/ml);而真菌中 ,对黑曲霉
和产黄青霉的最低抑菌浓度在实验浓度内 ,分别是
0.25和 0.5 mg/ml。
以上结果说明盒子草多糖对细菌和真菌都有不同
的抑制作用 ,而且都有选择性 ,其机理还有待进一步
探讨 。
参考文献:
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[ 4] 李芙蓉 ,吕博.刺五加多糖的微波提取及含量测定[ J].新疆中医
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[ 5] 国家质量监督检验检疫总局职业技能鉴定指导中心组编.食品微
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(收稿日期:2009-10-26　本文编辑:褚遵华)
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