全 文 ：·论著 · 文章编号:1007-8738(2011)06-0700-02
海枫藤水煎液对小鼠免疫功能的影响
岑晓江 , 侯思名 , 樊传章 , 翟书华 (昆明学院生命科学与技术系 , 云南 昆明 650214)
收稿日期:2011-02-07;　接受日期:2011-03-31
基金项目:云南省教育厅重点科学研究基金项目(08Z0077)
作者简介:岑晓江(1973-), 女 , 云南昆明人 , 讲师 , 硕士
E-mail:xiaojiangcen@yahoo.cn
[摘 要 ] 　目的:观察海枫藤水煎液对小鼠免疫功能的影响。
方法:采用碳粒廓清法 、 2, 4-二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟
发型超敏反应法和正常小鼠免疫器官测定法。 结果:海枫藤
水煎液 2.5 g/kg能明显降低碳粒廓清指数(K)和吞噬系数
(a), 抑制单核巨噬细胞的吞噬功能;10.0、 5.0、 2.5g/kg均
能显著降低小鼠耳廓肿胀度 , 抑制二硝基氟苯(DNFB)诱导
的小鼠迟发型超敏反应;对正常小鼠的脾系数和胸腺系数无
明显影响。结论:提示海枫藤水煎液对非特异性免疫和细胞
免疫有抑制作用 , 而对正常小鼠的免疫器官系数无明显影响。
[关键词 ] 海枫藤水煎液;免疫功能;碳粒廓清;迟发型超敏
[中图分类号 ] R285.5　　　[文献标识码 ] B
　　海枫藤(MarsdeniaoficinalisTsiangetP.T.Li)
为被子植物门 , 双子叶植物纲萝藦科 Asclepiadaceae
牛奶菜属 MarsdeniaR.Brown藤本植物的全草[ 1] 。
生于海拔 2200 ～ 2300 m的山地树林中 , 攀援于树
上 , 性微苦 , 药用部位全草 , 主产于西南地区和台湾
省 。在彝族地区特别是哈尼族地区常用于治疗风湿 、
关节炎等病症 [ 2] 。有关海枫藤的免疫功能研究国内
鲜见报道 , 本实验以小鼠为研究对象 , 对海枫藤水煎
液进行免疫功能的初步探讨。
1　材料和方法
1.1　材料　SPF级 ICR小鼠 , 体质量 18 ～ 23 g, 雌雄各半 ,
来源于昆明医学院实验动物中心 , 生产许可证:SCXK(滇)
2005-0008。海枫藤水煎液 , 取海枫藤茎叶干燥粉碎物 1 000 g
加水 1.2 L浸泡过夜后文火煎煮沸 1 h, 经 3次煮提后 , 合并
煮提液 , 浓缩至 250 mL, 即得棕褐色浸膏 , 每毫升(mL)相当
于生药 4 g, 置 4℃冰箱保存 , 备用。实验时充分混匀 , 用纯
化水稀释成不同浓度供小鼠灌胃用。 醋酸泼尼松片 , 每片
5 mg, 广东南国药业有限公司 , 070301;2, 4-二硝基氟苯
(DNFB), 分析纯 , 中国医药(集团)上海化学试剂公司 ,
F20020726;丙酮 , 分析纯 , 天津市 福晨 化学试 剂厂 ,
200703110;印度墨水 , 北京西中化工厂 , 020501。 AL104型
电子分析天平 , 梅特勒 -托利多仪器(上海)有限公司;
JJ2000型电子天平 , 常熟双杰测试仪器厂;722分光光度计 ,
上海精密科学仪器有限公司。
1.2　方法
1.2.1　小鼠碳粒廓清实验　取 18 ～ 23 g小鼠 55只 , 雌雄各
半 , 按性别和体质量随机分为 5组:空白对照组;阳性对照醋
酸泼尼松 10mg/kg组;海枫藤水煎液 10.0、 5.0、 2.5 g/kg剂
量组;每组 11只 , 分组及给药情况见表 1。连续灌胃 7 d, 末
次灌胃后 30 min, 按 0.1 mL/10 g小鼠尾静脉注射浓度为 100
mL/L印度墨水(注:中剂量组有 1只静脉注射失误), 分别于
注射后 2、 12min用毛细管于小鼠眼眶静脉丛取血 20 μL, 放
入加有 2 mL的 1 g/L碳酸钠溶液的试管中 , 立即摇匀 , 用
722分光光度计于波长 680nm处测定吸光度(A)。颈椎脱臼
处死小鼠取肝 、脾 、 胸腺称质量 , 按公式计算廓清指数(K)、
吞噬系数(a)和脏器系数 [ 3] 。 K=(lgA
1
-lgA
2
)/(t
2
-t
1
)=
(lgA1 -lgA2)/10;α=K1/3 ×体质量 /(肝质量 +脾质量)
1.2.2　2, 4-二硝基氟苯(DNFB)致小鼠迟发性超敏反应实验
　取 18 ～ 23g小鼠 66只 , 雌雄兼用 , 分组及给药情况见表 2。
除模型对照组灌服纯水外 , 其余各组给药方法同 2.1。连续
灌胃给药 7 d, 分别于给药第 1、 2天灌胃后 30min, 于小鼠腹
部均匀涂抹 1g/LDNFB(丙酮∶麻油 =1∶1)50μL, 于第 7天灌
胃后 30min, 于小鼠右耳两面均匀涂抹 10 g/LDNFB20 μL进
行攻击 , 24 h后脱颈椎脱臼处死小鼠 , 取耳 , 用直径 8 mm的
打孔器将左右耳片同部位等面积切下 , 计算肿胀度和抑制
率 [ 4] 。
1.2.3　小鼠免疫器官系数测定　取 18 ～ 20 g小鼠 50只 , 雌
雄各半 , 分组及给药情况同 2.1。末次给药后 30min, 脱臼处
死小鼠 , 剖取胸腺和脾脏称重 , 计算脏器系数 [ 5] 。 脏器系数
=脏器质量 /体质量 ×10。
1.2.4　统计学分析　数据以 x±s或百分率(%)表示 , 选择
SPSS11.5统计软件 , 正态分布且方差齐的数据采用 t检验 ,
方差不齐用秩和检验。
2　结果
2.1　对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响　连续 7 d给予小
鼠海枫藤水煎液 10.0、 5.0、 2.5g/kg, 3个剂量组能降低正常
小鼠的廓清指数(K), 减小吞噬系数(a), 与空白对照组相
比 , 2.5g/kg剂量组的廓清指数(K)差异有统计学意义(P<
0.05);10.0、 2.5 g/kg剂量组的吞噬系数(a)有统计学意义
(P<0.05)。阳性对照醋酸泼尼松组亦能明显降低正常小鼠
的廓清指数(K), 减小吞噬系数(a), 与空白对照组相比差异
有统计学意义(P<0.01), 表明海枫藤水煎液能抑制单核巨
噬细胞的吞噬功能(表 1)。
2.2　对 DNFB致小鼠迟发性超敏反应的影响　连续 7d给予
小鼠海枫藤水煎液 10.0、 5.0、 2.5 g/kg能明显减轻 DNFB所
致小鼠耳廓肿胀 , 与模型对照组相比 , 高 、中 、 低剂量组差异
700 ISSN1007-8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCelMolImmunol)2011, 27(6)
DOI :10.13423/j.cnki.cjcmi.005976
均有统计学意义(P<0.05);阳性对照醋酸泼尼松组亦能明
显减轻 DNFB所致小鼠的耳廓肿胀 , 与模型组相比差异有统
计学意义(P<0.01), 提示海枫藤水煎液具有一定的抑制二
硝基氟苯诱导的小鼠迟发型超敏反应(表 2)。
表 1　连续给药 7 d对小鼠碳粒廓清的影响 (x±s)　
组别 剂量 n 廓清指数(K) 吞噬系数(a)
空白 / 11 0.046±0.017 5.81±1.05
醋酸泼尼松 10mg/kg 11 0.028±0.008b 4.91±0.75a
海枫藤水煎液 10.0g/kg 11 0.040±0.021 5.25±1.32a
5.0g/kg 10 0.044±0.014 5.45±0.65
2.5g/kg 11 0.029±0.013a 4.86±0.65a
aP<0.05, bP<0.01vs空白组.
表 2　连续给药 7 d对 DNFB致小鼠迟发性超敏反应的影响
(n=11)　
组别 剂量 耳片肿胀度(x±s, mg)抑制率(%)
空白 / 1.4±1.0 /
模型 / 22.2±4.2d /
醋酸泼尼松 10mg/kg 10.2±2.7b 54.15
海枫藤水煎液 10.0g/kg 15.8±6.8a 29.02
5.0g/kg 17.7±4.1a 20.18
2.5g/kg 18.1±4.3a 18.67
aP<0.05, bP<0.01vs模型组;dP<0.01 vs空白组.
2.3　对小鼠免疫器官系数的影响　以 10.0、 5.0、 2.5 g/kg
剂量连续灌胃给药 7 d, 海枫藤水煎液 3个剂量对胸腺均有一
定的抑制趋势 , 而对脾脏仅有高剂量有抑制趋势 , 其余两剂
量组无明显变化 , 与空白组相比 , 差异均无统计学意义。而醋
酸泼尼松组对胸腺和脾均有明显抑制作用(P<0.01), 表明海
枫藤水煎液对正常小鼠免疫器官系数无明显影响(表 3)。
表 3　连续给药 7天对正常小鼠免疫器官的影响 (n=10)　
组别 剂量
胸腺
系数
(x±s, mg/10 g)
抑制率
(%)
脾
系数
(x±s, mg/10 g)
抑制率
(%)
空白 / 40.0±14.2 / 65.0±25.9 /
醋酸泼尼松 10mg/kg 13.7±11.2b 65.78 25.9 ± 8.2b 60.15
海枫藤水煎液 10.0 g/kg 37.0± 8.9 7.67 53.3±17.3 17.96
5.0 g/kg 36.8±13.0 8.19 62.9±20.4 3.28
2.5 g/kg 35.1± 8.7 12.27 70.6±18.0 -8.59
bP<0.01vs空白组.
3　讨论
单核细胞的吞噬功能是衡量机体非特异性免疫
功能的标志之一 , 它可迅速吞噬和清除进入机体的
细菌 、异物等抗原性物质 , 巨噬细胞廓清指数(K)的
多少可以反映其吞噬功能(a)的强弱[ 6] 。 DNFB诱导
的小鼠迟发型超敏反应反映了细胞免疫功能的强度 。
DNFB是一种半抗原 , 与皮肤蛋白形成抗原 , 能刺激
T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞 , 再次攻击后会诱发
迟发型超敏反应[ 4] 。迟发型超敏反应是 T细胞介导
的兼有巨噬细胞参与的特异性炎性反应 , 与机体细
胞一致 , 可根据肿胀率的大小 , 说明其细胞免疫力
强弱 。
海枫藤在彝药中常用于治疗风湿 、关节炎等病
症[ 2] 。而风湿类疾病是临床上常见的多发性疑难病 ,
其发病过程与自身免疫机制有关 。类风湿性关节炎
的病因为细胞免疫异常所致 , 局部风湿综合症是由
于机体感染乙型溶血性链球菌后机体发生变态反应
或免疫反应 , 二者属于免疫性疾病。海枫藤水煎液
具有一定的免疫抑制作用 , 它能降低碳粒廓清指数
K和吞噬系数 a, 抑制单核巨噬细胞的吞噬功能;抑
制 DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应 , 而对正常小
鼠的免疫器官系数无明显影响 。本实验只开展了海
枫藤水煎液对正常状态下小鼠免疫功能的影响 , 在
接下来的研究中 , 我们将观察其对免疫抑制状态下
小鼠免疫功能的影响 , 从而为进一步的深入研究提
供更充分 、更科学的依据。
参考文献:
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701ISSN1007-8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmunol)2011, 27(6)