全 文 ：［收稿日期］ 20101028(001)
［基金项目］ 辽宁省教育厅项目(2009A498)
［第一作者］ 罗宏，硕士研究生，研究方向:种质资源鉴定及中
药的品质评价
［通讯作者］ * 尹海波，副教授，硕士生导师，研究方向:种质资
源鉴定及中药的品质评价，Tel:15998530628，
0411-87586003，E-mail:yhb0528@ sina. com
HPLC同时测定鼠掌老鹳草中 5 种活性成分的含量
罗宏，尹海波 *
(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:建立 HPLC 同时测定鼠掌老鹳草中没食子酸，原儿茶酸，槲皮素，山奈素，山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷的含
量测定方法。方法:采用 RP-HPLC，Agilent TC -C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，0. 4% 磷酸水溶液-甲醇为流动相梯度洗
脱，流速 0. 8 mL·min － 1，检测波长为切换波长，0 ～ 23 min，270 nm;23 ～ 55 min，370 nm，柱温 30 ℃。结果:没食子酸，原儿茶酸，
槲皮素，山奈素，山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷的线性范围 0. 192 ～ 1. 732 g·L － 1 (r = 0. 999 7)，0. 016 ～ 0. 256 g·L － 1 (r =
0. 999 9)，0. 004 ～ 0. 039 g·L － 1(r = 0. 999 9)，0. 004 ～ 0. 041 g·L － 1(r = 0. 999 9)，0. 200 4 ～ 1. 603 2 g·L － 1(r = 0. 999 8) ，平均回
收率(n = 3)分别为 99. 93%(RSD 1. 5%)，98. 27%(RSD 1. 7%) ，100. 07%(RSD 2. 2%)，99. 92%(RSD 1. 8%)，99. 63%(RSD
1. 0%)。结论:该含量测定的方法快速、准确、可靠、重复性好，可为药材的质量控制提供依据。
［关键词］ 鼠掌老鹳草;没食子酸;原儿茶酸;槲皮素;山奈素;HPLC
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)05-0083-04
Simultaneous Determination of Five Active Compounds
in Geranium sibiricum by HPLC
LUO Hong，YIN Hai-bo*
(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To determine 5 active compounds in Geranium sibiricum，namely gallic acid，protocat-
echuin acid，quercetin，kaempferol-7-O-rhamnoside and kaemferitrin. Method:The HPLC method was applied and
the separation was performed on an Agilent TC-C18 analytical column(4. 6 mm × 250 mm，5 μm). The mobile phase
was methanol(A)- water containing 0. 4% H3PO4(B)with gradient elution mode at the flow rate of 0. 9 mL·
min － 1 . The detection was set at 270 nm(0-23 min)，370 nm(23-55 min)，and the column temperature was 30 ℃ .
Result:The liner ranges of gallic acid，protocatechuin acid，quercetin，kaempferol-7-O-rhamnoside and kaemferitrin
were 0. 192-1. 732 g·L － 1(r = 0. 999 7)，0. 016-0. 256 g·L － 1(r = 0. 999 9)，0. 004-0. 039 g·L － 1(r = 0. 999 9)，
0. 004-0. 041 g·L － 1(r = 0. 999 9)，0. 200 4-1. 603 2 g·L － 1(r = 0. 999 8). The average recoveries(n = 3)were
99. 93%(RSD 1. 5%)，97. 27% (RSD 1. 7%)，100. 07% (RSD 2. 2%)，99. 92% (RSD 1. 8%)，99. 63% (RSD
1. 0%). Conclusion:The methord is simple and accurate with a good reproducibility and can be used as a quality
control methord for G. sibiricum of different sources.
［Key words］ Geranium sibiricum;gallic acid;protocatechuin acid;quercetin;kaempferol-7-O-rhamnoside;
HPLC
老鹳草为我国传统中药，来源于牻牛儿苗科植
物牻牛儿苗 Erodium stephanianum Willd.、老鹳草
Geranium wilfordii Maxim. 或野老鹳草 G. carolinia-
num L.的干燥地上部分，收载于我国 2010 年版《中
国药典》，前者习称”长嘴老鹳草”，后两者习称”短
嘴老鹳草”［1］。其性辛、苦、平，归肝、肾、脾经，祛风
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Vol. 17，No. 5
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DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.05.050
湿、通经络、主治筋骨酸痛、泄泻痢疾等［2］。我国老
鹳草药材资源丰富，老鹳草属多种植物在不同地区作
老鹳草药材使用。鼠掌老鹳草 G. sibiricum L.为正品
老鹳草的同科属植物，虽非药典收载品种，但资源分
布广泛，且以北方为多，前期研究发现在全国很多地
区均替代正品老鹳草使用，因此对其进行全面的质量
评价对于控制老鹳草药材的质量具有十分重要的意
义。
鼠掌老鹳草的活性成分包括鞣质、黄酮、有机酸
及挥发油等［3-4］，其中黄酮类化合物具有较好的降
脂、抗血栓、抗氧化、降糖等活性［5］;鞣质具有抗肿
瘤、抗过敏、抗衰老等［6］作用，有机酸类成分为鞣质
的水解产物，也具有明显的抗菌、抗炎的作用。因此
为了进一步开发利用该药材资源，全面控制和评价
药材的质量，本实验建立了 HPLC 同时测定该药材
中 3 种黄酮类和 2 种酚酸类活性成分———没食子
酸、原儿茶酸、槲皮素、山奈素、山奈素-3，7-O-α-二鼠
李糖苷含量的方法。
1 仪器与试药
Agilent1100 型高效液相色谱仪(Agilent TC-C18
色谱柱，SPD-10A 紫外检测器，四元低压梯度泵，柱
温箱)，KQ3200 超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司)，CP225D 电子天平(德国 Sartorius 公司)。
甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析
纯。没食子酸(批号 110831-200302);原儿茶酸(批
号 110809-200604);槲皮素(批号 100081-200406);
山奈素(批号 110809-200604)对照品均购自中国药
品生物制品检定所;山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷
(自制)，对照品纯度均≥98%。
试验用 30 批鼠掌老鹳草药材自采于 2009 年 7
月—2010 年 6 月，见表 1，经辽宁中医药大学药用植
物教研室尹海波副教授鉴定，凭证标本保存于本院
药用植物教研室。
表 1 鼠掌老鹳草样品来源信息
No. 产地 生境 No. 产地 生境 No. 产地 生境
S1 吉林通化集安 路边草丛 S11 黑龙江铁力 林场路旁 S21 辽宁海城 路边草丛
S2 吉林梅河口 路边草丛 S12 黑龙江哈尔滨 山坡林缘 S22 辽宁沈阳 山坡林下
S3 吉林磐石松川 路边草丛 S13 辽宁铁岭 稻田地边 S23 辽宁锦州 水沟边
S4 吉林省吉林市 公园绿地 S14 辽宁鞍山 山坡林缘 S24 北京香山 山坡路旁
S5 吉林敦化 山阴坡 S15 辽宁大连庄河 路边草丛 S25 山东泰山 山坡路旁
S6 吉林安图 路边草丛 S16 辽宁丹东凤城 山坡林缘 S26 河北成德 路边草丛
S7 黑龙江牡丹江 路边草丛 S17 辽宁葫芦岛 水沟边 S27 天津蓟县 山坡林下
S8 黑龙江鸡西 林场林下 S18 辽宁锦州 路边草丛 S28 青岛崂山 路边草丛
S9 黑龙江七台河 路边草丛 S19 辽宁本溪 山坡林缘 S29 河北易县 山坡林下
S10 黑龙江佳木斯 山坡路旁 S20 辽宁清源 路边草丛 S30 河北遵化 路边草丛
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent TC-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm);流动相 A-甲醇，B-0. 4% 磷酸水溶
液，梯度洗脱程序:0 ～ 23 min，14% ～ 16% A;23 ～
27 min，16% ～ 50% A;27 ～ 42 min，50% ～ 57% A;
42 ～ 55 min，57% A;流速 0. 8 mL·min － 1;检测波长采
用切换波长，0 ～ 23 min，270 nm;23 ～ 55 min，370
nm;柱温 30 ℃;进样量 10 μL。在此色谱条件下没
食子酸，原儿茶酸，槲皮素，山奈素，山奈素-3，7-O-α-
二鼠李糖苷的分离度均大于 1. 5，拖尾因子在
0. 95 ～ 1. 05，分离度良好(图 1)。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取各对照品没食
子酸，原儿茶酸，槲皮素，山奈素，山奈素-3，7-O-α-二
图 1 鼠掌老鹳草样品 HPLC
A.混合对照品;B.样品;1.没食子酸;2.原儿茶酸;
3.槲皮素;4.山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷;5.山奈素
鼠李糖苷各 4. 81，5. 01，4. 92，5. 1，5，5. 01 mg，分别
置于 50 mL 量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。再精
密量取没食子酸，原儿茶酸，槲皮素，山奈素，山奈
素-3，7-O-α-二鼠李糖苷各 2 mL 分别于 25 mL 量瓶
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Vol. 17，No. 5
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中，用甲醇定容，摇匀，制成没食子酸，原儿茶酸，槲
皮素，山奈素，山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷的每 1
mL 含 0. 096 20，0. 008 016，0. 007 878，0. 008 240，
0. 100 2 mg 的单一成分对照品溶液备用。精密称取
上述对照品溶液适量制成混合对照品，置 － 4 ℃冰
箱中待用。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称定鼠掌老鹳草药
材粉末 2 g，加石油醚脱脂 1 h，弃去石油醚，残渣加
30 倍 80%的乙醇，回流提取 3 次，每次 1 h，过滤，合
并滤液，浓缩并用甲醇定容至 25 mL 量瓶中，作为供
试品溶液备用。
2. 4 线性关系考察 精密量取不同质量浓度的混
合对照品溶液，进样分析，用外标法定量。将各对照
品的浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，进行线性
回归得标准曲线方程和线性范围，见表 2。
表 2 5 种成分的线性关系
对照品 线性方程 线性范围 / g·L － 1 r
没食子酸 Y = 2 640. 6X + 391. 35 0. 192 4 ～ 1. 731 6 0. 999 7
原儿茶酸 Y = 2 358X + 2. 664 7 0. 016 0 ～ 0. 256 1 0. 999 9
槲皮素 Y = 4 730X + 2. 045 1 0. 003 9 ～ 0. 039 3 0. 999 9
山奈素 Y = 4 354. 6X + 2. 367 9 0. 004 1 ～ 0. 041 2 0. 999 9
山奈素-3，7-O-α-
二鼠李糖苷
Y = 1 780. 7X － 146. 35 0. 200 4 ～ 1. 603 2 0. 999 8
2. 5 精密度试验 精密量取混合对照品溶液，在上
述色谱条件下，连续进样 6 次，分别测定峰面积。没
食子酸、原儿茶酸、槲皮素、山奈素、山奈素-3，7-O-α-
二鼠李糖苷峰面积的 RSD 分别为 1. 4%，2. 2%，
0. 8%，1. 7%，2. 1%;表明仪器精密度良好(n = 6)。
2. 6 重复性试验 精密称取混合均匀的药材粉末
6 份，按 2. 3 供试品溶液制备项下方法操作，在 2. 1
色谱条件下进行分析测定，计算没食子酸、原儿茶
酸、槲皮素、山奈素、山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷峰
含量的 RSD 分别为 1. 9%，2. 1%，1. 7%，1. 1%，
2. 4%。表明该方法重复性良好(n = 6)。
2. 7 稳定性考察 精密吸取供试品溶液，室温下放
置，分别于 0，2，4，6，8，10，12，24 h 测定，分别记录
峰面积，没食子酸、原儿茶酸、槲皮素、山奈素、山奈
素-3，7-O-α-二鼠李糖 苷 峰 面 积 的 RSD 分 别 为
1. 6%，0. 9%，1. 8%，1. 7%，2. 1%，2. 0%，结果表
明，供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
2. 8 回收率试验 精密称定已知准确含量的鼠掌
老鹳草药材粉末 0. 5 g 共 9 份，3 份为一组，每组按
低，中，高浓度分别精密加入没食子酸，原儿茶酸，槲
皮素，山奈素，山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷的对照
品，按 2. 3 供试品溶液制备项下方法操作，在上述色
谱条件下进行分析，计算回收率，结果见表 3。
表 3 5 种对照品加样回收率(n = 3)
成分
样品中含量
/μg
加入量
/μg
测得值
/μg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
没食子酸 1 586. 10 1 269. 44 2 854. 71 99. 930 99. 93 1. 5
1 586. 08 3 174. 26 100. 13
1 900. 10 3 491. 38 100. 27
原儿茶酸 130. 650 103. 62 232. 480 98. 270 98. 27 1. 7
130. 640 261. 840 100. 42
156. 140 286. 160 99. 590
槲皮素 105. 560 84. 460 190. 320 100. 35 100. 07 2. 2
105. 590 212. 060 100. 86
126. 670 230. 960 98. 990
山奈素 167. 650 134. 220 302. 150 100. 21 99. 92 1. 8
167. 640 335. 370 100. 05
201. 180 367. 850 99. 510
山奈素- 1 287. 62 1 030. 26 2 315. 66 99. 630 99. 63 1. 0
3，7-O-α- 1 287. 48 2 578. 32 100. 25
二鼠李糖苷 1 542. 22 2 825. 04 99. 680
2. 9 不同产地样品的含量测定 分别精密称取 30
个不同产地的药材粉末各 2 g，按照供试品溶液的制
备方法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各 10 μL，注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件
下进行分析测定，即得(表 4)。
3 讨论
3. 1 提取方法的选择 对超声、冷浸、热回流提取
的考察，发现超声与冷浸的提取效果相当，但所得色
谱图的总峰面积远小于热回流提取所得色谱图的总
峰面积，故选择乙醇加热回流的方法。
3. 2 提取工艺的优化 通过正交试验，确定了优化
提取工艺条件为 30 倍 80%的乙醇提取 3 次，每次 1
h。工艺验证性试验表明，其工艺的平均提取率较
高。因此所筛选出来的工艺合理可行，稳定可靠，节
省物料，具有很好的可操作性和重复性。
3. 3 色谱条件的选择 分别用甲醇-水、乙腈-水、甲
醇-磷酸盐缓冲体系为流动相，以不同梯度进行试
验，结果表明用甲醇-磷酸水线性梯度洗脱效果最
好。同时试验了不同的检测波长，发现前面两种有
机酸类成分的最大吸收波长在 270 nm 左右，而后面
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罗宏，等:HPLC 同时测定鼠掌老鹳草中 5 种活性成分的含量
表 4 不同产地鼠掌老鹳草 5 种成分的质量分数(n = 3)
mg·g － 1
No. 产地
没食
子酸
原儿
茶酸
槲皮素 山奈素
山奈素-3，7-O-
α-二鼠李糖苷
S1 吉林通化 1. 139 0. 052 0. 085 0. 131 0. 914
S2 吉林梅河口 1. 587 0. 130 0. 922 0. 157 1. 288
S3 吉林磐山 1. 438 0. 141 0. 118 0. 224 0. 797
S4 吉林市 0. 092 0. 057 0. 095 0. 135 0. 710
S5 吉林敦化 0. 813 0. 232 0. 233 0. 141 1. 062
S6 吉林安图 0. 983 0. 087 0. 147 0. 309 0. 706
S7 黑龙江穆棱 1. 147 0. 139 0. 128 0. 260 0. 764
S8 黑龙江鸡西 1. 231 0. 120 0. 225 0. 144 1. 101
S9 黑龙江七台河 1. 545 0. 064 0. 112 0. 253 1. 453
S10 黑龙江佳木斯 1. 963 0. 108 0. 120 0. 153 0. 972
S11 黑龙江伊春 2. 229 0. 261 0. 211 0. 335 0. 802
S12 黑龙江哈尔滨 1. 756 0. 132 0. 223 0. 148 0. 947
S13 辽宁铁岭 1. 594 0. 134 0. 112 0. 227 0. 584
S14 辽宁鞍山 0. 768 0. 115 0. 120 0. 212 0. 625
S15 辽宁大连 0. 825 0. 058 0. 210 0. 121 1. 185
S16 辽宁丹东 2. 134 0. 148 0. 117 0. 242 0. 355
S17 辽宁葫芦岛 0. 478 0. 146 0. 226 0. 119 0. 702
S18 辽宁锦州 0. 445 0. 042 0. 112 0. 131 0. 359
S19 辽宁本溪 1. 011 0. 124 0. 115 0. 147 0. 661
S20 辽宁清源 0. 309 0. 053 0. 067 0. 261 0. 585
S21 辽宁海城 0. 808 0. 155 0. 223 0. 136 0. 661
S22 辽宁沈阳 1. 323 0. 140 0. 226 0. 241 0. 794
S23 辽宁锦州 0. 773 0. 059 0. 138 0. 176 1. 498
S24 北京香山 0. 812 0. 158 0. 228 0. 288 1. 263
S25 天津蓟县 1. 815 0. 104 0. 127 0. 134 1. 200
S26 山东崂山 1. 813 0. 169 0. 212 0. 215 0. 381
S27 山东泰山 1. 139 0. 052 0. 125 0. 059 1. 481
S28 河北承德 1. 628 0. 135 0. 213 0. 156 0. 577
S29 河北易县 0. 678 0. 097 0. 122 0. 167 0. 828
S30 河北遵化 1. 714 0. 267 0. 136 0. 207 1. 736
3 种黄酮类成分的最大吸收波长在 370 nm 左右，无
法实现同一波长下 5 种成分的同时检测，故选择切
换波长的方法，使图谱所含的信息量最大，且各色谱
峰分离较好，峰面积较大。选择在 23 min 切换是因
为原儿茶酸和没食子酸已经出峰，而后面 3 种黄酮
类化合物还没有出峰;而且此时切换前后的基线仍
较平稳。实验证明所建立的 HPLC 含量测定的方法
操作性强，重现性好，可作为该药材含量测定的检测
方法。
4 结论
本实验采用高效液相色谱法对 30 个不同产地
鼠掌老鹳草中 5 种活性成分进行了定量分析，结果
表明 5 种活性成分的含量差异明显，因此在入药时，
应充分考虑产地因素;同时也表明控制药材质量的
重要性。
本研究对我国北方地区的野生鼠掌老鹳草资源
进行了较为全面的野外实地考察，首次进行了系统
的采集、分析，30 批样品基源、生境明确，5 种活性成
分的含量分析为本地区该药材资源的进一步开发利
用提供了一定的参考依据。
同时，本实验通过对色谱条件的优化，使药材中
5 种活性成分达到了良好的分离;测定结果表明所
建立的鼠掌老鹳草中没食子酸、原儿茶酸、槲皮素、
山奈素、山奈素-3，7-O-α-二鼠李糖苷 5 种活性成分
的 HPLC 含量测定方法，操作简便，结果准确、稳定、
重复性好。
［参考文献］
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［责任编辑 邹晓翠］
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第 17 卷第 5 期
2011 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 5
Mar.，2011