全 文 ：姜 3 9 、 甘草 5 9 , 上述生药置于 1 o 0 0m L 水
中 , 煎煮 65 而 n 约至 SOOm L , 减压浓缩得 ’ “
到棕色提取物 (得率为 3 0 % ) 。 其他方剂以
相同方法进行处理 , 得到提取物 。 用 iV ns on
和 H o w ar d 的方法检测 A G E 。 将溶于含 .0 02 %
叠氮钠的 5 0m M 磷酸盐缓冲液 ( pH .7 4) 中
的牛 血清 白蛋 白 ( 10 m g m/ L ) 加 入葡萄搪
( 2 5 In M ) 和果糖 ( 25 m M ) 溶液中 。 此 反
应混合物与不 同浓度的汉方 方剂 、 生药或
氨基孤混合 。 在 37 ℃下孵育 2 周后 , 用分
光荧光检测器以 350 lun 为激发波长 , 4 5Ount
为发射波长测定荧光反应产物 。 数据以 IC 50
表示 , I C 5。 可由对数一剂量抑制曲线得出 。
结果 : 4 种方剂 (温脾汤 、 桃核承气汤 、
桂枝获荃丸 、 大黄牡丹皮汤 ) 强烈抑制 A G E
的形成 。 5 种方剂 (真武汤 、 当归芍药散 、
八味地黄丸 、 济生 肾气丸 、 柴胡桂枝汤 )
具 有 中度的 抑 制作用 ( ICS 。 为 30 一 5
林g/ m L ) · 其余 3 种方剂具有微弱作用 。 氨
基呱具有中度的抑制作用 。 21 种生药中 ,
大黄的抑制活性最强 , 其他生药依次 为肉
桂 、 牡丹皮 、 芍药 。 干姜 、 蛇床子 、 生姜
具 有 微 弱抑 制作 用 ( I C S。 为 10 一 4 60
件g/ mL )
。 其余 14 种 生 药 的 I C S。 大 于
5 0 0乒留m L , 不具有抑制作用 。
上述结果表明 , 含有大黄的方剂 、 活
血祛癖剂及含有靴质的生药可抑制 A G E 生
成 , 其 作用强于对照 药氨基呱 。 提示可 从
汉方药 中开发治疗糖尿病性肾病 的药物 。
( 王 丹摘译 梁爱华校 )
3 5 2 培养条件对萝摩米宁生物合成的影响
〔英 〕 / L e e D … / B i o l Ph a mr B u l l一 2 0 0 1 ,
2 4 ( 12 ) 一 14 5 1一 14 5 3
萝摩米宁 ( g ag
~
ien ) 是一种有效的
抗氧化 剂 , 对醛氧化酶活性和脂质过氧化
具有抑 制作用 。 最近 首次从萝摩科植物隔
山消 ( yC n a n c h u m 、 i如 idr i ) 根中分离得到 。
此 活性成分为一种 幽类生物碱 , 其孕烷骨
架中在 C 一12 、 C 一2 0 位含有 2 个分别与肉桂
酸 、 烟酸功能性结 合的醋 , 化学合成较为
困难 。 本次通过不 同生长条件离体培养对
其进行生物合成 , 以寻找可能大量生产此
活性产物的方式 。
材料与方法 : ①隔山消从韩国勺 on gh uk
地区采集并经鉴定 。 萝摩米宁采用文献报
道方法分离 , 用高效液相分析测定 。 ②诱
导愈伤组织的培养基制备 : 以 M S 培养基
为 基本培养基 , 其中各加入 1 . 0 、 .2 Om g/ L
的 2, 4一二 氯苯氧 乙 酸 ( 2, 4一 D ) 、 蔡 乙 酸
( N A A )
、 玉米素 、 细胞分裂素 、 6一节氨基
嘿吟 ( B A P ) ; 或分别用 1 . om g几 的玉米素 、
细胞分裂素 、 B PA 与 .l0 、 .0 5m叭 的 2, 4一 D
混合制备 。 ③测 定萝摩米宁的含量 : 种子
表面经消毒处理 , 接种于 M S 培养基 , 在明
暗环境 中培养出芽 , 并在光照条件下切割
成 叶 、 茎 、 根 , 提取过滤蒸发 , 溶于 甲醇
中备用 。 外植体切割为叶 、 茎 、 根部分 分
别在加有植物生长调节因子的 M S 培养基中
条件培养 。 诱导的愈伤组织经传代培养 ,
干燥研末 , 浸泡在甲醇中冷提取 。 样品用
反相高效液相分析 。
结果 与结论 : 植物组 织 出芽再接种 于
无生长调节因子的 M S 培养基中时 , 根中萝
摩米宁含量 比茎中高 6倍 。 愈伤组织在不
同培养条件下诱导时 , 暗条件比光照条件
更适合萝摩米宁的生物合成 。 暗条件下 ,
在含有 .2 om g几 2, 4
一
D 的 M S 培养基中诱导
的 愈 伤 组 织 茎 中 萝 摩 米 宁 含 量 最 高
( .0 9 6 0% )
, 根中含量最少 , 这与接种培养
的结果相反 , 证实次生代谢物的产 生与种
子出芽组织和离体培养组织诱导的愈伤组
织无关 。 与 固体培 养基相 比 , 萝摩米宁含
量在含有 2, 4一 D 的液体培养基中无论光照 、
暗条件下均显著 升高 , 提示液体培养基有
利于萝摩米宁的生物合成 。 0 . l m叭 2 , 4 一D
和 B A p ( 1 . om g几 ) 比 0
.
5 m g/ L Z
,
4
一
D 和 B A p
的混合培养基更利于萝摩米宁的合成 ; 2 , 4一D
与玉米素的混合则显示相 反结果 ; 细胞分
裂素对萝摩米宁的合成无任何影响 。 以上
结果提示 , 可通过离体 培养方式利用茎组
织在暗条件和 2声D 的液体培养基进行大量
萝摩米宁生产 。
( 周素娟摘译 杜贵友校 )
35 3 紫杉醇生物合成 : 由红豆杉悬浮培养
细胞中细胞色素 P o . 轻化酶催化的紫杉二
烯 一a5 一醇及 其乙酸醋的差别转化 〔英 〕 /
W h e e l e r A … / A cr h i v e s o f B i o e h e而 s ytr a dn
B i o Ph y s i e s一 2 0 0 1 , 3 9 0 ( 2 ) ` 一2 6 5~ 2 7 8
研究表明 , 紫杉二烯 一 s a 一醇的酞化反应
可能是紫杉醇生物合成的第三步反 应 , 为
了明确紫杉二烯醇或其对应 的乙酸酷 是否
在随后的氧化反应中作为直接前体 , 本次
分别 以紫杉二烯一 s a 一醇及其乙酸酷为底物 ,
由细胞色素 P 4 5 0酶微粒体制剂催化 , 对其产
率和轻化效率进行了评价 。
方法 : ①细胞色素 几 5。酶的分离及活性
分析 : 红豆杉细胞传代后第 7d , 用 2 00林M
茉莉酸甲醋诱导 , 第 14 d 收获细胞 , 一 80 ℃
保存 。 取约 4 09 细胞研粉 , 于提取缓冲液
中提取分离 。 标准的酶活性分析在 l m L 分
析缓冲液中进行 。 该缓冲液中含 l m g 微粒
体蛋 白 、 2 5卜M FM N 、 2 . 5 “ M 队 n 、 Z m M
N A D P H 和 3 0抖M 溶于己烷的紫杉二烯醇或
其乙酸酷标记物 , 封 口 , 31 ℃黑暗振荡培
养 Zh 。 反应混合液用氯化钠饱和 , 并用 乙
醚提取 3 次 。 合并醚提取物 , 氮气干燥 ,
残余物混悬于 10 0 ” L 乙睛 , 采用放射性
H P L C 以及 G C 一M S 、 H P L C 一M S 、 N M R 等
方法分析 。 ②细胞色素 P 45 。 活性的时效分
析 : 用两瓶红豆衫样品进行悬浮培养实验 ,
其中一瓶作对照 , 另一瓶用 20 0林M 茉莉酸
甲酷处理 , 分别在诱导后 0 、 8 、 1 6 、 2 4 、 4 8 、
12 0 和 16 8h 时取 1 0 0m L ( 约 3 9 细胞 ) 进行
酶活性分析 。 ③采用 eP kr in 一E iln e r L a mb da ls
分光光度计对细胞色素 P45 。 酶特性进行 CO
示差光谱分析 。
结果与结论 : ①在以紫杉二烯醇为底
物的反应 中 , 其产物为二元醇和 多元醇 ,
其中二 元醇经鉴定为紫杉 一4 (2 0) , 1 l( 12) 一二
烯 一 s a , 13 a 一二醇 ; 在 以紫杉二烯 一SQ 一基 乙酸
酷为底物的反应中 , 其产物为多元醇单乙
酸酷 , 其中紫杉二烯醇单乙酸酷经鉴定其
产物为紫衫 一4 ( 20) , 1 1 ( 12) 一二烯 一 s a 一乙酸基 -
1 0p
一醇 。 ②细胞色素 P 45 。 酶对紫杉二烯醉
及其乙酸酷的 K m 值分别为 ( 14 士 3) 林M 、
〔24 士 3) 协M 。 ③紫杉二烯醇轻化酶的活