全 文 ：·中药及天然药物 ·
HPLC法测定假奓包叶叶中没食子酸的含量
陈　晟 ,张元媛 ,赵　敏 ,张　璐 ,王军宪＊(西安交通大学医学院药学系 ,陕西 西安 710061)
摘要:目的　测定假奓包叶叶中没食子酸的含量。方法　采用 Dikma Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm), 以甲醇-0.1%
磷酸水溶液(5∶95)为流动相 , 流速 1.0 m L·min -1 ,柱温 25 ℃,检测波长为 269 nm , 以外标法测定假奓包叶叶中没食子酸的含
量。结果　没食子酸在 0.004 4 ～ 0.218 0 g· L-1质量浓度范围内呈线性关系(r =0.999 6),平均回收率为 100.6%(n =5)。
结论　该方法简便 、准确 , 重现性好 ,可用于假奓包叶中没食子酸的含量测定。
关键词:假奓包叶;没食子酸;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1004-2407(2009)03-0176-02
HPLC determination of gallic acid in the leaves of Discocleidion ruf escens
CHEN Sheng , ZH ANG Yuanyuan , ZH AO Min , ZHANG Lu , WANG Junxian＊(Department of Pharmacy , School o f Medi-
cine , X ian J iaotong University , X ian 710061 , China)
Abstract:Objective To assay gallic acid in the leaves of Discocleidion ruf escens by HPLC.Method A Dikma Diamonsil C18 column(250
mm×4.6 mm , 5μm)was used with a mobile phase of methanol-water(0.1%phospho ric acid)(5:95)at a flow rate of 1.0 mL·min-1 .
In this method , the column temperature w as 25 ℃, and UV detector waveleng th w as 269 nm.Results The linear range of g allic acid was
0.004 4～ 0.218 0 g· L-1(r =0.999 6).The average recovery was 100.6%(n =5).Conclusion A simple and accurate quantitative
method with good reproducibility to assay gallic acid in the leaves of Discocleidion ruf escens has been established.
Key words:Discocleidion ruf escens ;gallic acid;quantitative determina tion;H PLC
作者简介:陈晟 ,男 ,硕士研究生
＊通讯作者:王军宪 ,男 , 教授
　　假奓包叶又名金沙叶 、艾桐 、老虎麻 ,原植物为大
戟科假 奓包叶 属植物假 奓包叶 Discocleidion
ruf escens(Franch.)Pax et Hof fm.,主产于陕西 、甘
肃 、湖北 、湖南 、川贵等地[ 1] 。民间以根皮入药 ,具有
清热解毒 、泄水消积的功效 ,用于治疗水肿 、食积 、毒
疮 、鹅掌风等症[ 2] 。在成分研究的基础上 ,发现该植
物的抗菌活性成分主要是有机酸和蒽醌类化合物。
本实验建立了 HPLC 法测定假奓包叶叶片中没食子
酸的含量 ,方法简便 、准确 ,重复性好 ,适用于假奓包
叶中没食子酸的含量测定 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　LC-2010A 型高效液相色谱仪(日本岛津
公司);AE240S 型电子分析天平(瑞士 METTLER公
司);HS6150D超声振荡仪(天津市恒奥科技发展有限
责任公司);RE-52型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂);HH-4型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);
SHZ-D循环水真空泵(河南巩义市英峪予华仪器厂)。
1.2　试药　甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂
开发中心);水为三蒸水;其余试剂为分析纯(西安试
剂厂);没食子酸对照品由本实验室制备 ,通过波谱法
鉴定结构 , HPLC归一法确定其纯度达98%以上;实验
用假奓包叶(采于陕西汉中地区),经西安交通大学医
学院药学系天然药物化学研究室王军宪教授鉴定为大
戟植物假奓包叶 Discocleid ion ru f escens(Franch.)
Pax et Hof fm .的叶 。
2　方法和结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:Dikma Diamonsi l C18柱
(250 mm ×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷
酸水溶液(5∶95);流速:1.0 mL · min-1 ;柱温:25
℃;检测波长:269 nm;进样量 10 μL。
2.2　对照品储备液的制备　精密称取干燥至恒重的
没食子酸对照品 21.8 mg ,置于 50 mL 量瓶中 ,加甲
醇使溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 0.436 g ·L-1的
对照品储备液 ,备用。
2.3　供试品溶液的制备　取干燥假奓包叶叶粗粉 1
g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入蒸馏水 20
mL , 50 ℃以下温浸提取 8 h ,放冷 ,摇匀 ,滤过 ,精密
吸取续滤液 5 mL 至蒸发皿中 ,蒸干 ,残渣用甲醇转
移并定容至 5 mL 量瓶内 ,摇匀 ,经 0.45 μm 微孔滤
膜过滤 ,即得供试品溶液。
2.4　标准曲线及线性关系考察　精密吸取对照品储
备液 0.10 ,0.80 , 1.60 , 2.50 , 3.75和 5.00 mL ,分别
置 10mL 量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,分别精密
吸取上述溶液各 10 μL ,注入高效液相色谱仪 ,测定
峰面积 ,以没食子酸对照品质量浓度(g · L-1)为横
坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归
方程:Y =3×107X +50 865(r =0.999 6),表明没
食子酸的质量浓度在 0.004 4 ～ 0.218 0 g ·L -1范围
内与峰面积呈良好的线性关系 。
2.5　稳定性试验　取没食子酸对照品溶液 ,分别在 0 ,
2 ,4 ,6 ,8 ,12和24 h进样1次 ,依法测定 ,平均峰面积为
3 105 072 ,RSD为0.60%,说明没食子酸稳定性较好。
176 西北药学杂志　2009 年 6 月　第 24 卷　第 3 期
2.6　精密度试验　精密吸取 2.4 项下质量浓度为
0.109 0 g ·L -1的对照品溶液 ,重复进样 5 次 ,每次
10 μL ,平均峰面积为 386 573 , RSD为 0.44%,说明
仪器精密度良好 。
2.7　重现性试验　取同批号的假奓包叶叶样品 5
份 ,依法制备供试品溶液 ,按拟定的色谱条件进行测
定 ,并用面积外标法计算 ,结果没食子酸的平均含量
为 0.427%, RSD为 2.17%。
2.8　加样回收率试验　精密称取假奓包叶叶粗粉 1
g(相当于没食子酸约 0.2 mg),准确加入 0.2 mg 没
食子酸对照品 ,按 2.2 项下方法制备供试品 5 份 ,分
别进样 10 μL ,测定峰面积 ,计算加样回收率 。结果
平均回收率为 100.6%,RSD为 1.68%。
2.9　样品含量测定　精密吸取上述对照品溶液及假
奓包叶供试品溶液各 10 μL ,注入高效液相色谱仪 ,
测定没食子酸的含量 。结果表明 ,假奓包叶叶中没食
子酸的含量为 0.429%,见图 1。
图 1　HPLC图
A-没食子酸对照品;B-假奓包叶供试品;a-没食子酸
3　讨论
本实验建立了假奓包叶叶中没食子酸含量测定
的样品处理方法 ,通过比较以水 、甲醇作为溶剂和超
声提取 、温浸提取的测定结果 ,最终选择以水作为溶
剂 、采用温浸法制备假奓包叶供试品。
据相关文献报道 ,流动相系统比较多[ 3-5] ,如乙腈-
磷酸水溶液 、水-二甲基甲酰胺-冰醋酸 、乙腈-水等。通
过实验比较 ,以甲醇-0.1%磷酸水溶液(5∶95)为流动
相测定假奓包叶叶中的没食子酸的含量 ,分离效果较
好 ,保留时间适宜。本方法操作简便 、快速 ,重现性好 ,
适用于假奓包叶叶中没食子酸含量的测定。
参考文献:
[ 1] 　中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志四十
四卷[ M] .第三分册.北京:科学出版社 , 1979:64-66.
[ 2] 　中国药材公司.中国中药资源志要[ S] .北京:科学技术
出版社 , 1994:625.
[ 3] 　尹海波 , 何静 ,王冰 , 等.东北八种老鹤草没食子酸含量
比较[ J] .中药材 , 2007 , 30(6):637-638.
[ 4] 　何依玲 , 李晓誉.高效液相色谱法测定铁苋菜中没食子
酸含量[ J] .中国药业 , 2007 , 16(11):18-19.
[ 5] 　张兰珍 , 王晓强 ,宣辉 , 等.高效液相色谱法测定叶下珠
中没食子酸的含量[ J] .北京中医药大学学报 , 2000 , 23
(6):46.
(收稿日期:2008-11-18)
鱼腥草中总黄酮的含量测定及抗氧
化性研究
李利华(陕西理工学院化学与环境科学学院 , 陕西 汉中
723000)
摘要:目的　测定鱼腥草中总黄酮含量并对其抗氧化性进行
研究。方法　采用体积分数为 70 %的乙醇提取鱼腥草中的
总黄酮 , 分光光度法测定鱼腥草中的总黄酮含量 ,研究了鱼腥
草中黄酮类化合物对超氧自由基 、羟基自由基的清除作用。
结果与结论　鱼腥草中总黄酮含量为 5.59%, 鱼腥草中黄酮
类化合物对清除自由基有明显的作用 , 且黄酮类化合物的添
加量在试验范围内与其抗氧化性呈正相关。
关键词:鱼腥草;黄酮类物质;含量测定;抗氧化性
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2009)03-0177-04
鱼腥草(Hout tuynia cordata Thunb)又名蕺
菜 、侧耳根 ,为三白草科蕺菜属多年生草本植物。鱼
腥草是一种适应性广 、生产周期灵活的野生植物 ,含
人体所需蛋白质 、脂肪 、钙 、磷 、铁 、及维生素 C 、维生
素 E等多种营养成分[ 1-3] ,广泛分布在长江以南的各
地区 ,是人们经常食用的野生蔬菜。同时鱼腥草还含
有多糖 、黄酮类等药用成分 , 具有清热解毒 、消肿排
脓 、利尿通淋作用 ,全草入药主治气管炎 、肺炎 、乳腺
炎 、肠炎等疾病 , 是一种药食兼用型野生植物[ 4-6] 。
黄酮是广泛存在于植物界的一类黄色素 、次级代
谢产物 ,是人体必需的营养素之一 ,人体内不能合成 ,
只能从食物中摄取。药理实验表明 ,总黄酮为治疗心
血管疾病的有效成分 ,并能消除体内自由基 ,具有与
超氧化物歧化酶(SOD)同样的活性 ,且毒性较低[ 7] ,
因此还可用作食品 、化妆品的天然添加剂 ,如甜味剂 、
抗氧化剂 、食用色素。
自由基是一类上层轨道含有未配对电子的原子
团或特殊状态分子 ,其中与人体关系最为密切的是氧
自由基 ,其中以 O -·2 形成最早 , OH·作用最强 。食
用油脂和富脂食品的酸败就是由自由基引发的 , 它
不仅使油脂本身受破坏失去营养 ,更重要的是其氧化
产物和中间产物会伤害生物膜 、酶 、维生素 、蛋白质以
及活细胞功能 ,其中一些是公认的致癌物[ 7] 。因此 ,
有关抗氧化剂清除自由基的研究得到普遍关注 。
本研究对当地鱼腥草中总黄酮含量进行测定 ,并
对其在体外对自由基的清除作用进行了初步研究 ,
以其为鱼腥草的利用和综合开发提供参考 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　电热鼓风干燥箱 101 型(北京科伟永兴
仪器有限公司);HH-2电热恒温水浴锅(北京科伟永
兴仪器有限公司);旋转蒸发器 RE-52A(上海亚荣生
化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华
177西北药学杂志　2009 年 6 月　第 24 卷　第 3 期