全 文 ：·方药研究·
盒子草多糖成分的初步分析
朱　缨
(江苏省苏州卫生学校药学组·215002)
　　摘　要　盒子草水提醇沉后 ,用 Sevage方法去蛋白 ,透析 ,得粗多糖。采用硫酸水解多
糖 ,纸层析证明含有半乳糖 ,葡萄糖 ,阿拉伯糖 ,鼠李糖 ,木糖和一个未知成分。
游离糖纸层析得含有葡萄糖 ,半乳糖 ,低聚糖 。应用苯酚 —硫酸法对多糖含量
测定为 1.90%,游离糖含量为 5.06%。
关键词　盒子草　多糖　层析　含量测定
　　盒子草 ,为葫芦科植物盒子草 Actinos-
temma lobatum 的全草。《本草纲目》记载 ,
有小毒 ,主治水肿 ,疳积 , 蛇咬伤 ,至今对其
成分研究报道甚少 。本文对其多糖的成分
进行了初步分析 , 为开发利用提供实验资
料。
1　仪器及试剂
721型分光光度计　四川分析仪器厂
苯酚 ,苯胺 , 邻苯二甲酸 ,均为分析纯 。
新华滤纸 Ⅰ号。
L—木糖 , D—葡萄糖 , D—半乳糖 , D —
鼠李糖 ,D—阿拉伯糖 。由苏州药检所提供。
2　定性分析
2.1　游离单糖制备
称取盒子草粗粉约 5g ,用 80%乙醇提取
3次 ,过滤 ,合并滤液浓缩至 1ml供点样用。
2.2　水解多糖制备
取盒子草 200g ,80%乙醇渗滤。残渣干
燥得 190g ,加水提取 3次 ,合并滤液浓缩至
(1:2)放置 ,滤液加 4倍量 95%的乙醇沉淀 ,
静置 ,沉淀相继用无水乙醇 , 丙酮 , 乙醚洗
涤 ,真空干燥 ,得粗多糖。
取多糖粗品 0.3g ,加 1mol硫酸 50ml水
解 ,6h ,加碳酸钡中和 ,达 ph=7 ,过滤浓缩 ,
供点样用 。
2.3　标准溶液制备
取糖标准品溶于水 ,配成 1%(W/V)的
浓度。
2.4　纸层析
取游离单糖 ,水解多糖的制备液 ,层析 。
展开系统:A 、正丁醇:冰醋酸:水=4:1:
5(上层),展开 24h ,B 、乙酸乙酯吡啶:水=2:
1:2 ,展开 18h 。
显色方法:苯胺—邻苯二甲酸正丁醇饱
和水溶液 ,喷雾 , 105℃5 ～ 10 分钟。(见图 1 ,
2)
图 1　展开系统 A　　图 2　展开系统 B
1.未知　2.D—鼠李糖　3.L—木糖
4.D—阿拉伯糖　5.D—葡萄糖
6.D—半乳糖　7.水解多糖　8.游离糖
盒子草游离单糖 、水解多糖纸层析色谱
·51·2003 年第 1 期
3　定量分析
3.1　标准溶液配制
称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖 10.
5mg ,置 100ml容量瓶中 ,稀释至刻度。
样品溶液配制:取粗多糖 60mg ,加水定
容至 10ml。
3.2　最大吸收峰测定
取标准溶液和样品液各 0.5mg ,分别放
置具塞试管中至 2.0ml ,加苯酚液 1.0ml ,加
浓硫酸 5.0ml ,水浴加热 15分钟 ,冷至室温 ,
另取水作空白 ,于 400 —580nm 测定吸收度 ,
在 485nm 处有最大吸收峰 。
3.3　稳定性试验
取标准溶液 ,按分析方法操作 ,每隔 0.5
小时测定吸收值 , 连续 16 小时 , 结果在 0.
276—0.274。
3.4　标准曲线绘制
精取标准液 0.1 , 0.2 , 0.4 ,0.6 , 0.8 , 1.
0ml ,按分析方法操作 ,得回归方程:
A=2.648＊10-3C+1.046＊10-3 , R
=0.9993.
3.5　换算因子的测定
3.5.1　多糖的精制:取多糖 7.3259g , 溶于
250ml水中 , 加氯仿:正丁醇 =5:1 , 每次
100ml ,剧烈振摇 ,取上清液 ,重复 7次 ,透析 ,
浓缩 ,醇沉 ,沉淀用无水乙醇 ,丙酮 ,乙醚洗涤 ,
过DEAE纤维素 DE52柱 ,得灰白色多糖 。
3.5.2　换算因子测定:精取盒子草精制多
糖24.5mg ,定容至 25ml。取 0.1ml 测定吸
收度。计算换算因子:f=W/(c＊d)。W —
多糖重量(g), c—多糖稀释液中葡萄糖浓度 ,
d—稀释因素 , f=2.035。
3.6　样品测定
3.6.1　多糖含量测定:精取盒子草粉末 3
份 ,热水提取 3 次 ,浓缩 , 95%醇沉 ,抽滤 ,定
容至 100m l ,各取 0.1ml ,定容至 10ml ,测定 。
多糖含量(%)
=[(c＊d＊f)/w] ＊100%
=[((c/1000)＊100＊10＊2.035)/(w
＊1000)] ＊100%.
w =样品重(g).
3.6.2　游离糖含量测定:精取粗粉 4g , 80%
醇热提 3次 ,浓缩 ,定容至 100ml ,见表 1 。
3.7　回收率测定
取样品液 0.1ml , 加葡萄糖标准液 0.
2m l , 测定 , 得回收率为 97.9%, cv%=6.
34%.
4　结果与讨论
本文对盒子草粗多糖初步纯化 ,酸水解
证明含鼠李糖 , 木糖 , 阿拉伯糖 ,葡萄糖 ,半
乳糖和一个未知成分 。对含游离糖分析得
含葡萄糖 ,半乳糖 ,低聚糖 ,采用苯酚 —硫酸
法对多糖含量测定为 1.90%,游离糖为 5.
06%.
苯酚—硫酸法简便可靠 ,吸收稳定。
多糖生物活性复杂 ,对提高人体的免疫
机能 , 抗癌 ,抗衰老都有作用 , 对其药理作
用 ,有待开发研究 。
表 1　盒子草多糖和游离糖的含量测定结果:(n=3)
成分 编号 样品重(g) 吸收度 c(ug/ml) 百分含量(%)(g/ g) 均值(%)
多糖 1 6.0007 0.145 54.4 1.84
2 6.0009 0.150 56.2 1.91 1.90
3 5.9983 0.154 57.8 1.96
游离糖 1 4.0009 0.265 99.3 5.05
2 4.0036 0.271 101.9 5.18 5.06
3 3.9991 0.259 97.4 4.96
(2002—11—04　收稿)
·52· 黑龙江中医药