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白花败酱草总黄酮的提取及功能活性研究



全 文 :第 34卷 第 5期
2016年 10月
龙 岩 学 院 学 报
JOURNAL OF LONGYAN UNIVERSITY
Vol.34 No.5
October 2016
白花败酱草总黄酮的提取及功能活性研究
黄素华,林标声,邱丰艳,庄文敏,廖少芬
(龙岩学院 福建龙岩 364000)
摘要:使用乙醇结合超声波提取法做正交实验选取白花败酱草总黄酮最佳提取工艺,并对黄
酮进行活性研究。结果表明:四个因素对黄酮含量影响的为提取时间>料液比>提取温度>乙醇体
积分数;最佳提取工艺是提取时间 2 h、提取温度 70 ℃、料液比(m ∶V)1 ∶20、乙醇体积分数 50%,最
佳提取工艺下黄酮提取率为 9. 98%。白花败酱草黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有明显的抑
菌效果,并具有较强的抗氧化活性。
关键词:白花败酱草;黄酮;提取工艺;抑菌;体外抗氧化
中图分类号:TQ929. 2 文献标识码:A 文章编号:1673-4629(2016)05-0117-03
败酱草始载于《神农本草经》,为败酱科多年生草本植物黄花败酱、白花败酱的带根全草。白花败酱
草(Patrina villosa Juss,PVJ )又名苦菜、苦斋,因其具有的独特陈酱气和清苦味而得名,分布于我国华东、
华中、华南及西南各地,福建为主产区之一。白花败酱草因含有多种氨基酸、维生素和矿物质等有益成分
而被广泛食用,是我国的传统野菜;白花败酱草具有清热利湿、解毒排脓、促进肝细胞再生、改善肝功能、增
强抑菌、抗氧化和抗病毒等作用,是我国传统中药,临床上可用于治疗阑尾炎、痢疾、肝炎、扁桃体炎、流行
性腮腺炎等[1]。
败酱草含有较高的黄酮、皂苷、多糖等活性物质,已引起人们的重视。白花败酱草中含有较多的黄酮
类化合物,具有独特的药理作用。目前,对白花败酱草活性物质的提取和研究主要有:李娜等对白花败酱
草的总皂苷的提取及抗炎活性功能研究[2];徐洁昕等对白花败酱草总皂苷、总黄酮、总糖的提取工艺进行
了研究,但并未做进一步的相关功能研究[3-4];白花败酱草水提取液对小鼠有镇静作用[5-6];白花败酱草乙
醇提取液的抑菌作用[7];白花败酱草黄酮对小鼠有体内抗氧化作用[8];白花败酱草叶挥发物具有明显的自
由基清除活性[9]。本论文对白花败酱草进行了乙醇结合超声波提取黄酮,研究了总黄酮提取的最佳工艺,
计算在最佳提取工艺下总黄酮的提取率,并将所获得的总黄酮进行抑菌活性及体外抗氧化研究,这为白花
败酱草主产区—福建,进一步开发败酱草资源,促进败酱草在农业、食品、医药等领域中的应用具有积极
的意义。
1 实验材料
福建龙岩产的野生白花败酱草全草干草,用微型植物粉碎机粉碎,过 40目筛,密封保存。
2 实验方法
2.1 白花败酱草中总黄酮提取
2.1.1 白花败酱草中总黄酮的提取工艺流程
参照文献[10]。精确称取白花败酱草粉末,按设定的料液比加入不同体积分数的乙醇进行超声波试
验。选择料液比(m/v)、乙醇的体积分数、超声波时间、超声波温度四因素,进行 L9(3
4)正交表试验(见表
711
收稿日期:2016-06-23 Doi:10.16813 / j.cnki.cn35-1286 /g4.2016.05.024
作者简介:黄素华,女,福建龙岩人,龙岩学院生命科学学院副教授,主要研究方向:天然产物提取与开发、植物生物技术。
基金项目:福建省中青年教师教育科研项目(JA14303)。
白花败酱草总黄酮的提取及功能活性研究
1)。以总黄酮得率为指标进行考察,确定白花败酱草黄酮最佳提取工艺。
表 1 提取白花败酱草中总黄酮正交试验因素水平表
水平
因素
A
提取时间
(h)
B
提取温度
(℃)
C
料液比
(g /mL)
D乙醇
体积分数
(%)
1 1 60 1:15 50
2 2 70 1:20 60
3 3 80 1:25 70
2.1.2 白花败酱草中总黄酮样品的制备
依据正交设计表,安排试验、进行提样。准确称
取白花败酱草粉末 5 g,加 100 mL 体积分数为 50%乙
醇溶液,于 70 ℃恒温水浴中加热 2 h,离心(4000 r /
min)10 min,浸提重复 2 次,合并上清液,抽滤后定容
在 100 mL容量瓶中备用。
2.2 提取样品中总黄酮含量测定
采用 NaNO2—Al(NO3)3比色法。在波长 510 nm
处测吸光值并记录数据。根据芦丁标准曲线计算提取物总黄酮的含量,计算黄酮得率。
黄酮得率(%)=提取液中总黄酮质量 /白花败酱草质量×100%
2.3 白花败酱草黄酮的抑菌研究
将保存的菌种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基活化后制成菌悬液,吸取 0. 1
mL菌悬液均匀涂布于平板上。将经 121 ℃ 、20 min 高压蒸汽灭菌,浸泡在浓度依次为 50. 00 、25. 00、
12. 50、6. 25、3. 13 mg /mL白花败酱草的黄酮提取液 24 h后的圆形纸片(直径为 6 mm)贴于培养基表面,每
个平板等距离贴 4片。以无菌水浸泡的滤纸作为空白对照,提取物及对照组均设 3 个重复,置 37 ℃恒温
培养箱,根据抑菌圈的大小判断抑菌效果。
表 2 总黄酮提取正交实验结果
序号 A B C D 提取率(%)
1 1 1 1 1 7. 63
2 1 2 2 2 8. 01
3 1 3 3 3 7. 72
4 2 1 2 3 9. 89
5 2 2 3 1 9. 19
6 2 3 1 2 8. 90
7 3 1 3 2 8. 75
8 3 2 1 3 7. 50
9 3 3 2 1 8. 26
k1 7. 78 8. 75 8. 01 8. 36
k2 9. 32 8. 23 8. 72 8. 55
k3 8. 17 8. 29 8. 55 8. 37
极差 1. 54 0. 52 0. 71 0. 19
2.4 白花败酱草黄酮的抗氧化活性研究
研究白花败酱草对羟自由基、超氧阴离子自由基、亚硝
酸盐清除作用,方法参考文献[10]。
3 实验结果与分析
3.1 芦丁标准曲线:Y= 10. 331X+0. 00715,R2 = 0. 99727。
3.2 提取黄酮正交实验分析
由表 2可知,由以上四个影响因素中,对白花败酱草黄
酮含量影响的顺序为:A>C>B>D,即提取时间>料液比>提取
温度>乙醇体积分数。得较优因素水平组合为 A2B1C2D2,即
提取时间 2 h、提取温度 70 ℃、料液比(m ∶V)1 ∶20、乙醇体积
分数 50%。在较优提取工艺下重复 3 次,黄酮提取率
为 9. 89%。
表 3 不同黄酮浓度(mg /mL)抑菌圈直径 mm
50 25 12. 5 6. 25 3. 13
金黄色葡萄球菌 15. 88 13. 66 10. 87 7. 71 5. 35
大肠杆菌 13. 12 11. 65 9. 73 6. 56 4. 67
3.3 白花败酱草黄酮抑菌实验
由表 3可知,本实验用游标卡尺测定白花败酱草
中黄酮的抑菌圈直径,白花败酱草干草中黄酮对金
黄色葡萄球菌、大肠杆菌都有较好的抑菌效果,当黄
酮质量浓度为 50 mg /mL时,对金黄色葡萄球菌及大
肠杆菌抑菌圈分别达到 15. 88、13. 12 mm;对金黄色
葡萄球菌的抑菌效果比较明显。且在一定范围内,随着黄酮浓度的升高,抑菌的效果也逐渐增强。
3.4 白花败酱草黄酮抗氧化活性结果
3.4.1 白花败酱草黄酮提取物对羟自由基清除作用的测定
由图 1可以看出,随着白花败酱草黄酮质量浓度的增加,对羟自由基的清除作用也在加强,当质量浓
度为 0. 010 mg /mL时,清除率可以达 84. 07%,而在同样质量浓度的条件下,对照物 VC对羟自由基的清除
率可以达 50. 07%。由此可见白花败酱草提取物与 Vc对比,其具有较强的清除羟自由基的活性功能。
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白花败酱草总黄酮的提取及功能活性研究
图 1 白花败酱草黄酮提取物对羟自由基的清除效果
3.4.2 白花败酱草黄酮对超氧阴离子自由基清除
作用
由图 2可知,随着白花败酱草黄酮质量浓度的逐
渐升高,对邻苯三酚超氧化速率的抑制作用也越强。
当白花败酱草黄酮溶液质量浓度为 0. 010 mg /mL时,
对超氧阴离子自由基的清除率为 77. 66%,而此浓度
下 Vc 的清除率为 46. 36%。可见白花败酱草黄酮对
图 2 白花败酱草黄酮提取物
对超氧阴离子自由基的清除效果
超氧阴离子自由基有较强的清除作用,且清除作用明
显优于对照组 Vc。
3.4.3 白花败酱草黄酮提取物对亚硝酸盐清除作用
由图 3可以看出,白花败酱草黄酮对亚硝酸盐具
有较强的清除率,随着白花败酱草黄酮质量浓度的增
大,对亚硝酸盐的清除作用增强。当溶液质量浓度为
0. 010 mg /mL时,清除率为 36. 98%,而在此质量浓度
下,VC的清除率为 15. 21%。可见在同等条件下白花
图 3 白花败酱草黄酮提取物对亚硝酸盐的清除效果
败酱草黄酮对亚硝酸盐的清除率明显比 Vc高。
4 结论
白花败酱草总黄酮提取的最佳条件是:乙醇体积
分数 50%、提取时间 2 h、温度 70 ℃、料液比(m ∶V)为
1 ∶20,在此最佳提取条件下,黄酮的提取率为 9. 98%。
白花败酱草总黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有较
好的抑菌效果,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比
较明显。白花败酱草总黄酮在各抗氧化体系中均表现出较强的抗氧化活性,在 0. 002 ~ 0. 01 mg /mL 范围
内,随着白花败酱草总黄酮添加溶液浓度的升高而各清除效果变强,且其抗氧化活性明显强于同一浓度的
VC。本研究为白花败酱草的药用和作为保健野菜的开发利用提供科学依据。
参考文献:
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-217.
〔责任编辑:巫永萍〕
(下转第 136页)
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瑜伽在大学生心理健康教育中的作用探析
Role of Yoga in College Students' Mental Health Education
CHEN Xiaomei
(Fujian Commercial College,Fuzhou,Fujian 350012,China)
Abstract:Through two experiments of yoga music’s influence on memory and yoga training’s influence on depression tendency,
using control group experimental method,and using long memory test in the free recall method and related psychological table before
and after the experiments test comparison,the paper suggests that yoga music helps to improve students' memory and yoga training to
reduce and ultimately eliminate the depression tendency. The experimental results show that yoga training is beneficial to mental
health education and to psychological consultation. Moreover,yoga can improve mental health education and psychological counseling
level,which has important theoretical and practical significance.
Key words:yoga;mental health education;function
檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸
(上接第 119页)
Extraction of Flavone from Patrina Villosa Juss and Its Functions
HUANG Suhua,LIN Biaosheng,QIU Fengyan,ZHUANG Wenmin,LIAO Shaofen
(Longyan University,Longyan,Fujian 364000,China)
Abstract:By using extracting method of ethyl alcohol combining with ultrasonic wave to carry out orthogonal experiments,an
optimal flavone extracting process from patrina villosa juss was selected and an activity study on flavone was made. The results show
that four factors have an effect on the content of flavone in the following order:the extracting time,ratio of solid to liquid,extracting
temperature and the volume fraction of ethyl alcohol. The optimal extracting process is as follows:extracting time 2 h,extracting
temperature 70 ℃,ratio of solid to liquid 1 ∶20 and 50% of the volume fraction of ethyl alcohol. The flavone extracting rate under the
optimal extracting process is 9. 98%. The flavone extracted from patrina villosa juss has an obvious antibacterial effect on
staphylococcus aureus and escherichia coli and has a good anti-oxidation effect.
Key words:patrina villosa juss;flavone;extracting process;bacteriostat;in vitro anti-oxidation
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