全 文 ：收稿日期: 2000-06-05;　修订日期: 2000-07-10
作者简介:张　敏 ( 1968-) ,女 (汉族 ) ,辽宁大连人 ,现任大连市中
医医院中医研究所主管中药师 .
高效液相色谱法测定贯叶连翘中槲皮素含量
张　敏 , 张　荣 , 李晨燕
(辽宁省大连市中医医院中医研究所　 116013)
摘要: 用反相 HPLC法测定了贯叶连翘中槲皮素的含量。HYPERSIL ODS2 C18 ( 4. 6 mm× 250 mm)色谱柱 ,流动相甲
醇 -水-磷酸 ( 55∶ 44. 8∶ 0. 2) ,检测波长 360 nm,回收率为 97. 89% , RSD为 1. 33%。
关键词:贯叶连翘 ;　槲皮素 ;　高效液相法 ;　含量测定
中图分类号: R284. 2　　文献标识码: A　　文章编号: 1008-0805( 2000) -0981-01
Determination of Quercetin in Hypericum periforatum by RP-HPLC
ZHAN G M in, ZHANG Rong , L I Chen-yan
( Institute of Dalian Hospital of TCM , Liaoning Province 116013, China )
Abstract: A RP-HPLC m ethod w as es tablis hed for the determination of quercet in in Hypericum peri foratum. Th e con
tent wa s dete rmined on a HYPERSIL ODS2 C18 ( 4 . 6 mm× 2 5 0 mm ) co lumn , using methanol -w ater -pho sphate
( 55∶ 44. 8∶ 0. 2) as the mobile phase, and detected at UV 360 nm. The r ecove ry w as 97. 89% , RSD 1. 33% .
Key words: Hypericum perifor atum;　 Querce tin;　 HPLC;　 Determina tion
　　我国贯叶连翘 Hypericum per for atum L.地理分布广 ,应用历
史悠久 ,但长期以来临床应用单一。当前国内外对贯叶连翘的研究
多集中在金丝桃素等主要成分上 [1, 2 ] ,而对其活性成分较高的槲皮
素的研究未见报道。近年来 ,含槲皮素成分的中药材广泛应用于抗
自由基 ,抗氧化 ,抗糖尿病并发症等方面的治疗 [3]。 为了开发传统
中药材 ,我们对贯叶连翘中的槲皮素做了含量测定。
1　仪器、试剂与样品
仪器: Wa ters 600高效液相色谱仪及 Wate rs 2487双波长吸
收检测器 ,超声机 (天鹏电子新技术北京有限公司 )。 试剂: 甲醇为
色谱纯 ,水为纯水 ,磷酸为分析醇。对照品: 槲皮素 (美国 Sigma公
司 )。 样品:贯叶连翘 (威海绿色有限公司提供 )。
2　实验方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱 HYPERSIL ODS 2( 4. 6 mm× 250 mm) ,
大连依利特公司 ,流动相甲醇 -水 -磷酸 ( 55∶ 44. 8∶ 0. 2) ,柱温为
室温 ,流速为 1. 0 ml /min,检测波长 360 nm ,灵敏度 0. 2 AUFS,
进样量为 10μl。
2. 2　标准曲线: 精密称取干燥至恒重的槲皮素对照品适量 (约 10
mg ) ,用甲醇定容至 10 ml容量瓶中 ,作为对照品贮备液 ,再用微
量注射器准确吸取上述贮备液 50, 100, 200, 400, 600μl置 5 ml容
量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,依次进样 ,按色谱条件进行测定 ,得回
归方程为 Y= 247 447 X - 130 745, V= 0. 999 9,线形范围为 5. 46
～ 87. 36μg /ml。 见图 1。
槲皮素对照品　　　　　　　　样品
图 1　 HPLC图谱　　　　 a-槲皮素
2. 3　样品测定: 取贯叶连翘粉末约 2 g ,精密称定于 100 ml圆底
烧瓶内 ,加 30 m l甲醇溶解 ,加 1 mol /L盐酸 15 ml,置水浴中加热
回流 30 min,冷却后 ,离心分离 ,将上清液置于 100 ml容量瓶中 ,
残渣再加甲醇超声提取 2次 ,加 20 ml /次 ,超声 10 min,离心分离
后 ,所得的上清液并入上述容量瓶中 ,最后加甲醇至刻度 ,作样品
溶液备用。测定时经 0. 45μm滤膜过滤 ,分别吸取此液和对照品溶
液进样测定 ,计算结果为:
表 1　样品测定结果
序号 样品中槲皮素的含量 C /mg· g-1 平均含量 C /mg· g-1 R SD (% )
1 0. 714
2 0. 727
3 0. 711 0. 722 5 0. 923
4 0. 732
5 0. 723
6 0. 728
2. 4　回收率试验: 精密称取已知含量的贯叶连翘粉末约 3 g ,共称
取 6份 ,分别加入槲皮素对照品 0. 269 mg ,按照样品测定项下进
行处理 ,测定 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 97. 89% , R SD=
1. 33%。
2. 5　重现性测定:按样品测定方法 ,对同一批号样品进行 6次平
行试验 ,贯叶连翘中槲皮素的含量 RSD为 1. 12%。
2. 6　精密度试验: 取同一浓度的对照品溶液 ,在上述色谱条件下
测定 ,求出槲皮素的峰面积 , RSD为 0. 938%。
2. 7　稳定性试验: 取样品溶液在 0, 4, 6, 12, 24 h分别进样 10μl,
记录峰面积 ,结果 4次进样峰面积的 RSD为 0. 33% ,说明样品溶
液在 24 h内稳定。
3　讨论
3. 1　槲皮素在贯叶连翘体内以槲皮素苷的形式存在 ,所以需经酸
水解后才能测定 ,我们用薄层色谱法鉴别水解是否完全。
3. 2　波长的选择: 文献报道槲皮素的检测波长有 254, 336, 360
nm不等。我们作了一系列试验 ,最后选定波长在 360 nm时 ,槲皮
素吸收峰的峰形最好 ,而且吸收值较大。
3. 3　流动相的选择:实验选用甲醇 -水 -磷酸作流动相 ,甲醇增加
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　 L ISHIZHEN M EDICIN E AND M ATERIAM EDICA RESEARCH2000 V OL. 11 NO. 11 时珍国医国药 2000年第 11卷第 11期
可改善峰形 ,减少拖尾 ,但甲纯比例过高 ,分离效果下降。磷酸的比
例在 0. 1% ～ 0. 4%之间 ,都能保证样品很好的分离 ,考虑到磷酸
对柱子的影响及出峰时间的早晚 ,我们选定磷酸的含量在 0. 2%。
参考文献:
[ 1 ]　梁巧丽 ,高宏成 .金丝桃素的研究进展 [ J ] .中草药 , 1999, 30 ( 9)∶
705.
[2 ]　蒋尊成 .贯叶连翘研究进展 [ J] .中成药 , 1999, 21( 6)∶ 328.
[3 ]　刘诗平 ,陈尚猛 ,朱卫东 ,等 .槲皮素及其衍生物的生物活性研究进展
[ J ].中草药 , 1991, 22( 4)∶ 182.
●炮制与制剂●
中药口服液生产有关问题探讨
林向前1 , 高晓筝 2
( 1.福建省漳州市中医院　 363000;　 2.福建省漳州市皮肤病防治院　 363000)
　　中药口服液系指中药复方的水煎浓缩液或中药提取物以为水
溶媒配制而成的内服澄清液体制剂。 其用途较广泛既可用于治疗
疾病亦为营养、保健、滋补品。服用进入胃肠后 ,直接吸收呈现作用
较快。 因此生产的品种由起初的数种发展到现在近千种且有继续
增加的趋势。笔者长期从事中药制剂生产和研究 ,对中药口服液生
产略有心得 ,现就口服液生产的有关问题试述如下 ,仅供同仁参
考。
1　中药材的加工和煎器选择
1. 1　中药材的加工: 为了使药材的有效成分易于煮煎出 ,一般选
用经过切制的中药饮片或粗末。饮片具有“细而不续”的特点 ,也易
于辨认煎煮时不易粘住锅底烧焦且药液易于滤出 ,但有效成分的
煎出率一般较粗粉少 ,但在实际操作时应视药材的特性、质地选择
粗末或饮片。
1. 2　煎器的选择:现在中药材的煎煮用器 ,多为金属搪瓷或不锈
钢夹层锅 ,采用蒸气或高压蒸气进行加热提取药材中的有效成分。
由于中药提取液某些成分易与 Al+ , Fe3+ , Fe2+ 等发生化学反应 ,
改变药液的性质 ,影响口服液的临床治疗保健的效应 ,在实际生产
中严禁使用铝制品或铁制品。
2　溶媒的选择
2. 1　中药口服液生产所使用溶媒主要为水 ,但如果中药材中有效
成分明确应根据该成分性质采用与之相应的其他溶媒。例如乙醇、
醋、丙酮、乙醚等溶媒来提取中药材。 煎煮中药材用的水应为蒸馏
水或去离子水。应选用少含矿物质或其他杂质的水 ,必要时须煮沸
放冷静置 ,除去其中的部分矿物质沉淀、 CO2气体。
煎煮用水量应视药材质地及吸水量 、煎煮时的蒸发量而定。一
般用水量为药材 3～ 10倍。 传统经验加水至超过药材表面 3～ 5
cm为度。这是一种比较切合实际方法。第 2次用水量可适当减少 ,
但仍以加水量超过药材表面为度。
3　口服液中药材有效成分提取
提取中药材中有效成分是直接影响口服液质量的关键步骤 ,
常有以下几种方法:
3. 1　含挥发性成分中药材 ,一般只能用水蒸气蒸馏法提取其中挥
发性芳香成分 ,药渣再用水或其他溶剂提取 2～ 3次。
3. 2　处方中其余中药材应根据有效成分性质选用适当的溶媒和
提取方法提取 ,常有以下几种方法:
3. 2. 1　取药材加水浸泡 30 min,然后加热提取 ,提取液过滤浓缩
至规定体积。
3. 2. 2　取药材加水提取 ,提取液浓缩至稠膏状 (相对密度在 1. 2
～ 1. 25)时加入适量的 95%乙醇 ,充分搅拌静置沉淀 ,然后滤除醇
不溶性成分 ,滤液用减压蒸馏法回收乙醇 ,必要时可重复操作 ,滤
液浓缩至规定体积。
3. 2. 3　取中药材以乙醇为溶媒用渗漉法或回流提取法 ,提取液回
收乙醇浓缩至规定体积或将浓缩液转溶于适量的水中 ,静置 (必要
时冷藏 24 h )过滤以除去水不溶性成分而后滤液再浓缩至规定体
积。
4　中药口服液矫味
由于中药材精制提取液大多口感较差病人难于接受。 因此在
实际生产中往往需要加入适当的矫味剂。 常用矫味剂有蔗糖、蜂
蜜、甜蜜素、甜菊糖等。临床证明蔗糖能抑制或掩盖药效 ,影响制剂
稳定性 ,并会导致血糖浓度增加 ,发胖 ,糖尿病及肥胖症患者病情
加重 ,龋齿等副作用。 因此在实际生产中可用甜菊糖代替蔗糖矫
味。
5　口服液防腐
由于中药口服液中常有糖类、蛋白质、氨基酸等成分 ,久贮易
引起发霉变质 ,故需注意防腐 ,采取必要措施。
5. 1　口服液制备过程应注意用具及环境卫生 ,切勿使用长霉菌原
料。
5. 2　贮液瓶及瓶塞一定要洗净后彻底灭菌。
5. 3　装口服液用的瓶塞最好用胶塞或塑料塞 ;如果用木塞可垫上
一张玻璃纸 ,因木塞易长霉。
5. 4　口服液灌装前需煮沸 15 min且趁热灌装或灌装后采用流通
蒸气或其他方法灭菌。
5. 5　口服液在生产实际中可视实际情况加入适宜防腐剂。
总之 ,中药口服液的生产和研究方兴未艾 ,还有许多问题需共
同探讨。
收稿日期: 2000-06-01;　修订日期: 2000-07-10
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时珍国医国药 2000年第 11卷第 11期 L ISHIZHEN M EDICIN E AND M ATERIAM EDICA RESEARCH 2000 V OL. 11 NO. 11