全 文 ：(pH =6 ～ 7),要求补铁剂必须是可溶的 ,并以此作
为判断补铁剂生物利用度高低的主要指标 。 JPC的
一般性质试验显示 , JPC无臭 、无味 , 易溶于水 ,在
pH值 3 ～ 12范围内不沉淀 ,说明可能有较好的生物
利用度 ,又因溶液中无游离的 Fe3+存在 ,所以应无
明显的消化道刺激作用 。
表 1　 吸收度与溶液 pH值及反应时间的关系
pH
吸光度值
(0. 5 h)
吸光度值
(1. 0 h)
吸光度值
(1. 5 h)
吸光度值
(2. 0 h)
吸光度值
(2. 5 h)
吸光度值
(3. 0 h)
吸光度值
(3. 5 h)
1 0. 512 0. 526 0. 528 0. 531 0. 534 0. 527 0. 524
2 0. 624 0. 752 0. 767 0. 781 0. 780 0. 779 0. 771
3 0. 637 0. 759 0. 774 0. 789 0. 786 0. 784 0. 785
4 0. 635 0. 749 0. 760 0. 771 0. 776 0. 776 0. 768
5 0. 648 0. 751 0. 769 0. 784 0. 772 0. 765 0. 758
6 0. 643 0. 749 0. 763 0. 773 0. 768 0. 764 0. 765
7 0. 652 0. 765 0. 773 0. 782 0. 787 0. 789 0. 776
8 0. 631 0. 744 0. 761 0. 770 0. 771 0. 768 0. 764
3. 4　用抗坏血酸作还原剂测定 JPC还原过程中铁
浓度的变化证实 , JPC中铁 (Ⅲ )在 pH =1 ～ 8范围
内能够较迅速的还原成铁 (Ⅱ )。说明 JPC若作为
补铁剂可被食物中的还原性物质 (抗坏血酸)将铁
(Ⅲ)还原成铁(Ⅱ )后被肌体吸收 。
3. 5　JPC在 pH值为 3 ～ 12范围内均以可溶状态存
在 ,而 pH小于 3时出现沉淀 ,说明在强酸条件下
JPC的结构被破坏 ,生成了不溶物。 JPC作为口服
补铁剂不应在空腹服用(空腹时 ,胃液 pH小于 3)。
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HPLC测定贯叶连翘及提取物中伪金丝桃素和金丝桃苷的含量
张俊松 1 , 　王晓利 1 , 　罗　谦1, 2 , 　刘金钏1, 2 , 　杨汝德2
(1.深圳职业技术学院 ,广东 深圳 518055;2.华南理工大学 ,广东 广州 510641)
收稿日期:2005-05-20
科研项目:深圳市科技局项目(03KJb019)
作者简介:张俊松(1958～ ),男 ,辽宁沈阳市人 ,副教授 ,研究方向药物分析及新药开发。
通讯作者:王晓利 , 副教授 ,电话:0755-26019267, E-m ail:x iao llw@ s ina. com
关键词:贯叶连翘;伪金丝桃素;金丝桃苷;
摘要:目的:建立贯叶连翘药材及提取物中伪金丝桃素和金丝桃苷的含量测定方法。方法:样品经甲醇超声波提取 ,采用
K romasil C18柱(4. 6mm ×200mm, 5μm)测定;测伪金丝桃素用流动相:甲醇-0. 006mo l /L磷酸氢二钠 (87. 5:12. 5, v /v,用
磷酸调 pH至 6. 5);测金丝桃苷用流动相:甲醇-0. 5%磷酸(45:55, v /v, 用三乙胺调 pH至 3. 0);流速均为 1. 0mL /m in;检
测波长分别为 590nm和 360nm。结果:伪金丝桃素在 0. 023 8 ～ 0. 476 0μg范围内呈良好的线性关系(r=0. 999 9),平均
回收率为 101. 1%, RSD =1. 7%。金丝桃苷在 0. 197 2 ～ 1. 97 2μg范围内呈良好的线性关系(r=0. 999 9),平均回收率为
100. 8%, RSD =1. 5%。结论:本方法快捷 、简便 ,结果准确 、可靠 ,可作为贯叶连翘药材及提取物中有效成分伪金丝桃素
和金丝桃苷的质量控制方法。
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2006)05-0709-03
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Chine se T raditiona l PatentM ed icine
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　　贯叶连翘 (Hypericum performatum L)为藤黄科
金丝桃属多年生草本植物 ,其味苦 、辛 、性平 ,可清心
明目 、调经活血 、止血生肌 、解毒消炎 ,近年来 ,贯叶
连翘成为世界新药研究最热门的草药之一 。其中金
丝桃素 (Hypericin)、伪金丝桃素 (Pseudohypericin)
和金丝桃苷 (Hype rin)是贯叶连翘主要的有效成分 ,
金丝桃素和伪金丝桃素为萘骈二蒽酮类化合物 ,伪
金丝桃素只是金丝桃素分子中一个甲基上的氢被羟
基所取代形成的衍生物 ,金丝桃苷为黄酮醇苷化合
物 。目前 ,对伪金丝桃素的研究逐渐引起人们的重
视 ,结果表明伪金丝桃素具有明显的抗病毒 、抗抑
郁 、抗肿瘤作用 [ 1 ～ 3] 。金丝桃苷具有较强的镇痛和
保护脑缺血损伤等作用[ 4] 。我国贯叶连翘资源十
分丰富 ,但研究和利用尚在起步阶段 ,仅是将金丝桃
素含量大于 0. 3%的贯叶连翘提取物出口。金丝桃
素含量很低 ,作为含量测定项目有一定难度 ,为了全
面反映药材的质量 ,本文采用高效液相色谱法对贯
叶连翘原药材以及提取物中伪金丝桃素和金丝桃苷
进行含量测定 ,建立了一种简便 、可靠 、准确的测定
方法 ,为原药材及提取物的质量控制提供了依据。
1　仪器与试药
美国 Ag ilent 1100型高效液相色谱仪 (含四元
梯度泵 、在线真空脱气机 、自动进样器 、柱温箱 、二极
管阵列检测器 、ChemSta tion色谱工作站 )。
伪金丝桃素对照品(美国 Ch romaDex公司 );金
丝桃苷对照品(中国药品生物制品检定所 );贯叶连
翘药材 (陕西嘉禾植物化工有限公司 ,深圳市药品
检验所熊英主任药师鉴定 );贯叶连翘提取物 (本实
验室提供);甲醇为色谱纯 (M erck公司 );水为超纯
水 (M illipore纯水仪制得 ,并过 0. 45μm水系微孔滤
膜 ),磷酸氢二钠 、磷酸 、三乙胺为分析纯。
2　伪金丝桃素的测定
2. 1　色谱条件
依利特 K romasil C18色谱柱 (4. 6mm ×200mm ,
5μm);流动相为甲醇-0. 006mol /L 磷酸氢二钠
(87. 5:12. 5, v /v,用磷酸调 pH 至 6. 5);检测波长
590nm;流速 1. 0mL /m in;柱温 30℃。
2. 2　溶液的配制
2. 2. 1　对照品溶液的制备　精密称取伪金丝桃素
对照品 1. 19mg,置 5mL棕色量瓶中 ,加甲醇超声溶
解并稀释至刻度 ,摇匀制得 0. 238mg /mL对照品贮
备液。从中精密量取 200μL加甲醇稀释至 2mL棕
色量瓶 ,制成 0. 023 8mg /mL对照品溶液 。
2. 2. 2　原药材供试品溶液的制备　取贯叶连翘药
材粉碎 ,过 80目筛 ,混匀 ,称取 200mg,精密称定 ,置
50mL量瓶中 ,加适量甲醇 ,超声处理 1h溶解 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,经 0. 20μm PTFE滤膜过滤 ,取
续滤液 ,即得原药材供试品溶液。
2. 2. 3　提取物供试品溶液的制备　称取贯叶连翘
提取物 12mg, 精密称定 ,置 10mL棕色量瓶中 ,加适
量甲醇 ,超声处理 1h溶解 ,加甲醇稀释至刻度 ,经
0. 20μm PTFE滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得提取物供
试品溶液 。
2. 3　线性关系考察　精密吸取 2. 2. 1项下浓度为
0. 023 8mg /mL伪金丝桃素对照品溶液 1, 2, 4 , 8,
12, 16, 20μL,自动进样注入高效液相色谱仪 ,测定
伪金丝桃素峰面积 ,以峰面积值(A)为纵坐标 ,伪金
丝桃素含量(C , μg)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算
得回归方程为:A = 1 610. 1C - 2. 046 8, r =
0. 999 9(n =7), 表明伪金丝桃素在 0. 023 8 ～
0. 476 0 μg范围内呈良好的线性关系。
2. 4　精密度试验　取 2. 2. 1项下浓度为 0. 023 8
mg /mL的伪金丝桃素对照品溶液 ,重复进样 5次 ,
每次进样 10μL,测定伪金丝桃素峰面积 ,计算 RSD
为 0. 2%(n=5)。
2. 5　重复性试验　称取贯叶连翘提取物样品 ,按照
2. 2. 3项下平行制备提取物供试品溶液 5份 ,每次
进样 10μL,测定伪金丝桃素峰面积 ,样品伪金丝桃
素平均含量为 15. 1mg /g, RSD为 1. 4%(n =5)。
2. 6　稳定性试验　将 2. 2. 3项下新制备的供试品
溶液 1份 ,棕色瓶装置于室温放置 ,于 0, 2. 5, 5,
7. 5, 10, 24h分别进样 10μL,计算 RSD =1. 5%(n =
6)。结果表明提取物供试品溶液中伪金丝桃素在
24h内基本稳定 。
2. 7　回收率试验　采用加样回收法 ,称取已知伪金
丝桃素含量的提取物样品 5份 ,每份 12mg,精密称
定 ,分别精密加入伪金丝桃素对照品贮备液 (浓度
为 0. 238mg /mL)500μL或 250μL,按 2. 2. 3项下方
法制备 ,进样 10μL,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　 伪金丝桃素回收率试验
样品
/m g
样品含量
/m g
加入量
/m g
测得量
/m g
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
12. 6 0. 190 3 0. 119 0 0. 308 98. 9
11. 8 0. 178 2 0. 119 0 0. 299 101. 5
12. 1 0. 182 7 0. 119 0 0. 302 100. 2 101. 1 1. 7
13. 1 0. 197 8 0. 059 5 0. 258 101. 2
12. 8 0. 193 3 0. 059 5 0. 255 103. 7
3　金丝桃苷的测定
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3. 1　色谱条件
依利特 K romasil C18色谱柱 (4. 6mm ×200mm ,
5μm);流动相为甲醇-0. 5%磷酸 (45:55, v /v,用三
乙胺调 pH至 3. 0);检测波长 360nm;流速 1. 0 mL /
m in;柱温 35℃。
3. 2　溶液配制
3. 2. 1　对照品溶液的制备　精密称取金丝桃苷对
照品 4. 93 mg,置 5 mL棕色量瓶中 ,加甲醇超声溶
解并稀释至刻度 ,摇匀制得 0. 986 mg /mL对照品贮
备液。从中精密量取 200μL加甲醇稀释至 1mL棕
色量瓶 ,制成 0. 197 2mg /mL对照品溶液 。
3. 2. 2　原药材供试品溶液的制备　取贯叶连翘药
材粉碎 ,过 80目筛 ,混匀 ,称取 28 mg,精密称定 ,置
5mL量瓶中 ,加适量甲醇 ,超声处理 30m in溶解 ,加
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,以 5000 r /m in离心 5m in ,取
上清液经 0. 20μm PTFE滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得
原药材供试品溶液。
3. 2. 3　提取物供试品溶液的制备　称取贯叶连翘
提取物 15mg, 精密称定 ,置 10mL棕色量瓶中 ,加适
量甲醇 ,超声处理 30m in溶解 ,加甲醇稀释至刻度 ,
经 0. 20μm PTFE滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得提取物
供试品溶液 。
3. 3　线性关系考察　精密吸取 3. 2. 1项下浓度为
0. 197 2mg /mL金丝桃苷对照品溶液 1, 2, 4 , 6, 8,
10μL,自动进样注入高效液相色谱仪 ,测定金丝桃
苷峰面积 ,以峰面积值 (A)为纵坐标 ,金丝桃苷含量
(C , μg)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得回归方程
为:A =1 901. 7C+11. 716, r =0. 999 9(n =6),表
明金丝桃苷在 0. 197 2 ～ 1. 972μg范围内呈良好的
线性关系。
3. 4　精密度试验 　取 3. 2. 1 项下浓度为
0. 197 2mg /mL的金丝桃苷对照品溶液 ,重复进样 5
次 ,每次进样 6μL,测定金丝桃苷峰面积 ,计算 RSD
为 0. 1%(n =5)。
3. 5　重复性试验　称取贯叶连翘原药材样品 ,按照
3. 2. 2项下平行制备原药材供试品溶液 5份 ,每次
进样 10μl,测定金丝桃苷峰面积 ,样品金丝桃苷平
均含量为 14. 6mg /g, RSD为 0. 9%(n =5)。
3. 6　稳定性试验 　取 3. 2. 1 项下浓度为
0. 197 2mg /mL的金丝桃苷对照品溶液 ,于 0, 2, 4, 6,
8h分别进样 6μL,计算 RSD =0. 8%(n =5)。结果
表明金丝桃苷对照品溶液在 8h内稳定。
3. 7　回收率试验　采用加样回收法 ,称取已知金丝
桃苷含量的原药材细粉 5份 ,每份 26mg,精密称定 ,
分别精密加入金丝桃苷对照品贮备液 (浓度为
0. 986mg /mL)100μL或 200μL,按 3. 2. 2项下方法
制备 ,进样 10μL,计算回收率 ,结果见表 2。
表 2　 金丝桃苷回收率试验
样品 /m g 样品含量
/m g
加入量
/m g
测得量
/m g
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
26. 7 0. 389 8 0. 098 6 0. 491 3 102. 9
26. 8 0. 391 3 0. 098 6 0. 489 6 99. 7
27. 3 0. 398 6 0. 098 6 0. 498 9 101. 7 100. 8 1. 5
26. 9 0. 392 7 0. 197 2 0. 588 6 99. 3
26. 4 0. 385 4 0. 197 2 0. 583 2 100. 3
4　样品测定
分别按 2. 1和 3. 1项下的色谱条件和 2. 2. 2、
2. 2. 3 ,以及 3. 2. 2和 3. 2. 3项下供试品制备方法 ,
每个样品平行制备 3份 ,测定原药材和提取物中伪
金丝桃素和金丝桃苷的含量 ,结果见表 3。对照品
与样品的色谱图见图 1。
表 3　 样品测定结果(n=3)
样品 伪金丝桃素含量 /m g RSD /%
金丝桃苷
含量 /m g RSD /%
原药材 1. 06 0. 9 14. 6 0. 5
提取物 15. 1 1. 7 126. 6 0. 4
5　讨论
5. 1　检测波长的选择　对照品溶液从 190 ～ 760nm
范围内进行扫描 ,发现伪金丝桃素在 590nm处有最
大吸收 ,金丝桃苷在 360nm 处有最大吸收 ,且杂质
干扰少 ,分离效果好 ,故选用 590nm和 360nm作为
检测波长 。
5. 2　提取方法与时间的选择　采用以甲醇为溶媒 ,
置于水浴回流提取与超声振荡提取 ,考察提取率 ,超
声振荡法简便且提取率较高 。发现伪金丝桃素在甲
醇中的溶解性较差 ,经过摸索将超声时间定为 1h提
取率最高 ,而金丝桃苷超声 30m in即可。
5. 3　滤膜的选择　在提取过滤中发现普通尼龙微
孔滤膜对伪金丝桃素有非常强的吸附作用 ,后改用
PTFE(Po ly tetrafluoroethy lene, 聚四氟乙烯 )0. 20μm
滤膜过滤 ,吸附极小 。
5. 4　层析柱的选择 　曾用 Ag ilent SB C18色谱柱
(4. 6mm ×150mm , 5μm)和 Phenomenex Luna C18色
谱柱 (4. 6mm ×250mm , 5μm)来进行分离 ,但分离效
果不佳。
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图 1　高效液相色谱图
A.伪金丝桃素对照品(P seudohypericin referen ce substance);B.贯叶连翘原药材(Hypericum performa tum L);C.金丝桃苷对照品(Hyperin referen ce
substance);D. 贯叶连翘原药材(Hypericum perform atum L);1.伪金丝桃素(Pseudohypericin);2.金丝桃素(Hypericin);3.金丝桃苷(H yperin)
5. 5　流动相及比例的选择　曾用甲醇-0. 2%磷酸
(40:60, v /v) 、磷酸盐缓冲液-甲醇 (35:65, v /v,
pH6. 0)作为流动相来分离伪金丝桃素 ,但分离效果
均不理想。经摸索确定甲醇-0. 006mo l /L磷酸氢二
钠 (用磷酸调 pH至 6. 5)作为流动相 ,峰形较好 。
但由于伪金丝桃素的保留时间较金丝桃素短 ,所以
流动相的体积比 ,对其保留时间会产生很大的影响 ,
选用 87. 5:12. 5能使伪金丝桃素峰与溶剂峰和金丝
桃素峰很好分离 。本文金丝桃苷的流动相不同于
《中国药典》2005年一部的流动相-乙腈-0. 1%磷酸
溶液(16:84),选用甲醇替换乙腈 ,方法简便 ,降低
了成本 ,分离效果好。
5. 6　影响因素　伪金丝桃素是一种良好的光敏剂 ,
因此在提取 、含量测定及保存中应注意避光 ,可用棕
色瓶或用纸包裹 ,另外由于所用的溶剂甲醇有较强
的挥发性 ,因此在操作中应注意避免由于溶剂挥发
而带来的影响 。
参考文献:
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学 , 2002, 14(2):14-16.
食品药品监管局行政受理服务中心正式运行
一个窗口受理 、一次性告知 、限时办结……,本着集中 、透明 、高效 、便民的原则 , 国家食品药品监督管理局行政受理服务
中心 3日正式运行 , 统一对外办理药品 、医疗器械 、保健食品 、安全监管等行政许可事项的受理 、制证与送达工作 。
以前 , 国家食品药品监管局行政许可事项的受理工作分散在不同地点 ,分别由相关业务司室自行办理。这一方面造成审
批部门自由裁量权较大 ,另一方面也给行政相对人带来诸多不便。
该中心实行行政审批一个窗口受理 、一次性告知 、一条龙服务 、一次性收费 、限时办结。从行政相对人拿到受理号码时
起 , 其等候时间 、办理时间就进入中心信息系统 ,技术审评 、行政审批工作如果超过法定时限 , 中心将给予提醒 、督促 、并要求
相关部门说明原因。
该中心的运行在方便行政相对人的同时 ,也使受理工作效率大大提高。目前 , 中心编制仅 15人 ,比以前分散受理时少了
50多人。今年 2月 20日中心试运行以来 ,共受理各类申请 1000多件 , 接待行政相对人 2000多人次 ,没有收到一起投诉。
(信息由新华社提供)
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