全 文 ：瑞香狼毒水提物小鼠药物血清对人胃腺癌 SGC-7901细胞增殖的影响
焦效兰 , 　贾正平
(宁波大学医学院 ,浙江 宁波 315211)
收稿日期:2001-04-30
作者简介:焦效兰(1959～ ),女 ,教授 ,研究方向:抗肿瘤中药药理研究.电话:0574-87600761.
关键词:瑞香狼毒;血清药理学;胃腺癌 SGC-7901;培养细胞
摘要:目的:从整体水平探讨瑞香狼毒水提物(SCLA)的抗癌机理。方法:以不同剂量的 SCLA 灌胃给药后 ,在不同时间
采集小鼠血清 ,处理体外培养的人胃腺癌 SGC-7901 细胞 , 用 MTT 比色法和集落形成试验观察细胞增殖能力。结果:不
同剂量 、不同时间 SCLA 小鼠的药物血清处理肿瘤细胞后 ,其 M TT 转化率和克隆形成率均显著降低;给药 2h 后的药物
血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作用。结论:直接抑制癌细胞增殖是瑞香狼毒的主要抗癌机理。
中图分类号:R285　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2002)03-0196-03
Serum-pharmacological effects of Stellera chamaejasme L .abstract with water on
proliferation of gastric adnocacinoma SGC-7901 Cells
JIAO Xiao-lan , 　JIA Zheng-ping2
(Medical S chool of Ningbo U nivesity Ningbo 315211 , China)
Key words:stellera chamaejasme L.;serum-pharmacology;gast ric adnocacinoma SGC-7901 cultural cells
Abstract:Objective:To explore the anticancer mechanism of S tel lera chamaejasme L.abstracts with water
(SCLA).Methods:SCLA drug-serum was derived af ter different time from mice w hich w as orally per-adminis-
trated wi th different dose of SCLA.the ef fects of the serum on the roliferation of human gast ric adnocacinoma
SCG-7901 cells w ere observed with M T T assay and clone formation methods.Results:After t reatment w ith the
drug-serum derived at 1 ,2 ,3h from mice per-t reated w ith SCLA(5 ,10 and 20g·kg-1), the M TT formazan and
cone fo rmation of gastric adnocacinoma SGC-7901 cells w ere decreased significant ly.SCLA from the mice w hich
w ere given the drug-serum 2h later was more ef fective than o thers.Conclusions:SCLA had a remarkable in-
hibitory effects on proliferation of g ast ric adnocacinoma SGC-7901 cells , which may be the main anticancer
mechanisms of SCLA.
　　瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)为瑞香科
植物瑞香狼毒的根[ 1] 。我们以往的研究结果表明 ,
瑞香狼毒水提物(SCLA)对小鼠移植肿瘤 S180肉瘤 ,
肝癌 HePS 和 Lewis肺癌生长有显著抑制作用[ 2] 。
为了从整体水平探讨其抗癌机理 ,本文采用血清药
理学方法 , 研究了 SCLA 对体外培养的人胃腺癌
SGC-7901细胞 MTT 转化率及集落形成的影响 。
1　材料与方法
1.1　实验动物　BaLb/c 小鼠 ,体重 18 ～ 22g , SPF
级 ,由兰州生物制品研究所实验动物中心提供 ,标准
实验室喂养。
1.2　SCLA的制备　将瑞香狼毒(兰州市药材供应
站提供)200g 加水 400mL 煮沸 20min 2次 ,上清液
混合过滤 、浓缩 ,制成口服液 ,每毫升含生药 1.0g 。
1.3　主要试剂　RPM I-1640培养基为 Gibco产品。
胰蛋白酶 、MTT 为 Sigma产品。
1.4　细胞系　人胃腺癌 SGC-7901细胞引自中国
科学院上海细胞生物研究所细胞库 ,用 RPMI-1640
培养液(含 10%小牛血清 、100kU·L-1青霉素 、
100mg·L-1链霉素),37°C 、5%CO2 培养 , 25%胰蛋
白酶消化传代。
1.5　药物血清制备　Balb/c小鼠 56只 ,随机分成
7组 ,禁食 12h 后 ,分别灌胃给药 , 设 SCLA 5 , 10 ,
20g·kg -1 3个剂量组 ,对照组灌等量生理盐水;10g·
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2002 年 3 月
第 24 卷　第 3 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Mar., 2002
Vol.24　No.3
kg-1组设3个采血时相 ,即给药后 1 ,2 ,3h无菌条件
下 ,麻醉后下腔静脉采血;其余给药组给药 2h 后采
血。血样 1000g 离心 20min取血清 , 56°C30 min灭
活 ,用 RPM I-1640配制成 10%的小鼠血清培养液 。
用含 10%正常小鼠血清的 RPM I-1640培养液为对
照。
1.6　集落形成试验[ 3] 　将生长旺盛的 SGC-7901
细胞用含 10%小牛血清的 RPM1-1640 培养液制成
300·mL-1的细胞悬液 ,接种于 6 孔培养板(5mL/
孔),预培养 12h 后去除上清液 ,加入用不同剂量
SCLA处理不同时间所制备的小鼠血清的 RPM I-
1640培养液 ,继续培养 12d取出 ,甲醇固定 ,Giemsa
染色 ,解剖显微镜下计克隆数(30个细胞以上者为 1
克隆),每组 4皿 ,按均值据公式:克隆形成率=克隆
数/接种细胞数×100%,计算克隆形成率。
1.7　MT T 比色法[ 4] 　将生长旺盛的 SGC-7901细
胞用不同剂量 SCLA 处理不同时间所制备的小鼠血
清的 RPM I-1640培养液制成 2×105·mL-1的细胞
悬液 ,接种于 96孔培养板(200ul/孔),37°C ,饱和湿
度培养 48h 后 ,加入 5g·L-1 MTT(10μl/孔),继续
培养 4h后 ,弃上清 ,加入二甲基亚砜(DMSO),每孔
200μl ,溶解 MTT formazan ,于酶标仪 540nm 测定吸
光度值(A540)。
细胞增殖抑制率(%)=A对照-A药物/A对照×100。
2　结果
2.1　不同剂量药物血清对人胃腺癌 SGC-7901 细
胞的影响
SCLA 5-20g·kg -1处理小鼠 2h后的药物血清 ,
对SGC-7901细胞集落形成及 MTT formazan 的产
生均有显著抑制的作用;随着给药剂量的增加 ,药物
血清的细胞增殖抑制作用增强(表 1)。
表 1　不同剂量的 SCLA 药物血清对人胃腺癌 SGC-7901 细
胞增殖的影响
剂量
(g·kg -1) 集落数 吸光度 A540
抑制率(%)
集落形成 M TT 比色
0 153±21 0.881±0.121
5 118±171) 0.672±0.1021) 22.8 23.7
10 56±101) 0.472±0.0651) 63.4 46.4
20 21±81) 0.210±0.0401) 86.3 76.2
　　n=4 , x ±s;与对照组比较 , 1)P <0.01。小鼠给药 2h后取血。
2.2　不同时相药物血清的作用
以10g·kg-1处理小鼠不同时间的药物血清处
理SGC-7901细胞发现 ,给药 2h后的药物血清表现
出更强的抑制效果 ,而 1h , 3h 的血清抑制作用较弱
(表 2)。
表 2　不同处理时间的 SCLA 药物血清对人胃腺癌 SGC-
7901细胞增殖的影响
处理时间
(h) 集落数 吸光度A 540
抑制率(%)
集落形成 MT T 比色
对照组 135±21 0.881±0.121
1 89±91) 0.683±0.0661) 34.1 22.5
2 56±101) 0.472±0.0651) 63.4 46.4
3 77±51) 0.657±0.0811) 43.0 25.4
　　n=4,与对照组比较 , 1)P <0.01。小鼠给药剂量为 10g·kg -1。
3　讨论
近年来中草药治疗肿瘤越来越受到国内外医药
界的重视;它们不仅可改善患者生存质量 ,而且在延
长患者生存期等方面也确有疗效[ 5] 。然而中草药
所含化学成份复杂 ,故其抗癌机理难以探讨清楚。
由于人和动物属不同种属 ,人肿瘤与动物肿瘤株也
有差异 ,单一的小鼠体内实验难以确切阐明药物的
抗癌效果与抗癌机理。有人借助中草药提取物直接
实验 ,以探讨其抗癌作用机理 ,常以粗提物直接加于
体外培养的人癌细胞 ,这就存在着几个难以解决的
问题:①非生理环境的影响:中药粗制剂的杂质 、电
解质或鞣质引起细胞培养液渗透压 、pH 等的改变 ,
影响细胞生存环境;无效成分的作用也影响细胞生
长 。②有时体外实验与体内实验结果的不一致性。
③无法客观的揭示中药和复方在体内活性成分的转
化和改变 ,这些都会影响药物的实际效果 。
本研究结果表明 , SCLA 药物血清对人胃腺癌
SGC-7901细胞增殖的抑制作用与药物剂量呈正相
关 ,与我们所做的体内抑瘤实验结果一致 。给药后
2h的药物血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作
用 ,而给药后 1 、3h血清抑制作用较弱 ,这可能与机
体吸收和代谢造成血清中的药物浓度不同有关 。瑞
香狼毒对人胃腺癌 SGC-7901 细胞增殖的抑制作
用 ,可能是该药抗肝癌的重要机理之一。
参考文献:
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中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Mar., 2002
Vol.24　No.3