全 文 ： 国药鉴别
收稿日期:2006-01-31;　修订日期:2006-08-28
作者简介:王怀冲(1978-),男(汉族),上海人 ,现任中国人民解放军第二
军医大学长海医院药学部药师 ,学士学位 ,主要从事医院制剂研究工作.
贯叶连翘提取物中金丝桃苷的
分析鉴别与稳定性研究
王怀冲 1 , 范国荣 2
(1.中国人民解放军第二军医大学长海医院 ,上海　200433;
　2. 中国人民解放军第二军医大学药学院 ,上海　200433)
摘要:目的 探讨贯叶连翘提取物中金丝桃苷鉴别方法和稳定性 。方法 对贯叶连翘提取物进行化学 、薄层 、紫外鉴别。
通过加速实验从不同影响因素分析贯叶连翘提取物中金丝桃苷的稳定性。结果 贯叶连翘提取物的盐酸-镁粉反应显阳
性 , 薄层色谱斑点清晰 , 紫外光谱在 363 nm处有最大吸收峰。贯叶连翘提取物在酸 、碱 、热 、湿 、光 、氧化 、加速实验等条件
下金丝桃苷的含量均有不同程度的损失。结论 3种鉴别方法能很好地鉴别出黄酮苷类 (金丝桃苷)的存在 , 定性方法简
便 、准确 、专属性强。鉴于金丝桃苷的稳定性 ,在对贯叶连翘进行贮存时 , 应密闭 、闭光 、置阴凉干燥处保存。
关键词:贯叶连翘;　金丝桃苷;　微孔滤膜;　薄层鉴别;　稳定性
中图分类号:R284. 1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)12-2544-02
Research on the D istinction and Stab ility of Hyperin in Hyper icum perforatum L. Ex-
atracts
WANG H uai-chong1 , FAN Guo-rong2
(1. Department ofPharmacy , Changha iHospital, SecondM ilitaryMed ica lUn iversity, Shanghai 200433, Ch i-
na;2. Department of Pharmaceu tical Ana ly sis, School of Pharmacy, Second M ilitary Med ica l University,
Shanghai 200433, Ch ina)
Abstract:Object ive To inve stiga te the distinction and stability o f hyperin in Hypericum percora tum L. Exa tracts.
M ethods TLC , reac tions and UV w ere used for the de term ination ofHypericum perforatum L. Exa trac ts. T o observe the quality
change by using stre ss te sting, accelerated testing in the a rtic les. Resu lts TLCm e thod was reproduc ib le, sensitive and free from
outside interference. H avono l g lycosides w ere po sitive by the reaction of HC l-M g. The experiments of UV show ed the m ax im um
abso rption w aveleng th (λm ax) at 363 nm. The con tent o f hyperin g radua lly decreased a long w ith tim e and differen t affec tive fac-
tors. Conc lu sion H avono l g lycosides (hyperin) can be w e ll iden tified by the th ree de term inations, w hich a re simp le and accu-
ra te. Hypericum perforatum L. exa trac t shou ld be pre served in the ob turation and shady and coo l and d ryness.
Key words:Hypericum perforatum L. ;　H ype rin;　M icro scope;　TLC;　Stability
　　贯叶连翘为藤黄科金丝桃属 Hypericum L.植物贯叶连翘 Hy-
pericum perforatum L. 的全草 [ 1] 。含有多种具有生物活性的化学
成分 , 其中主要是苯并二蒽酮类化合物 、金丝桃素和伪金丝桃素 ,
多种黄酮类化合物 , 如芦丁 、槲皮素和金丝桃苷 ,间苯三酚类化合
物 , 如贯叶金丝桃素(拟)以及挥发油和 xanthone类化合物 [ 2]等。
贯叶连翘的提取物金丝桃苷(hyperin)又名槲皮素-3-O-β 半乳糖
吡喃苷(分子式 C21H20C12), 属黄酮类化合物。金丝桃苷具有凉
血止血 、活血祛淤 、清热解毒 、散郁结等功效 [ 3] 。将金丝桃苷 2
m g /kg给兔子注射 ,可使毛细血管抵抗力增强;给小鼠口服 ,可拮
抗皮下注射可卡因引起的兴奋 [ 4] 。金丝桃苷还主治吐血 、咯血 ,
外用可治创伤出血 、痈疖肿毒 、烧烫伤等。另外报道 ,金丝桃苷能
调节钙通道 [ 5] , 表现出抗衰老的作用 [ 6] 。据国外文献报道 , 金丝
桃苷对治疗肿瘤有特殊效果 ,并且还有较强镇痛作用 [ 7] 。
对贯叶连翘的质量分析多有报道 ,大多以金丝桃素为质量指
标 , 而金丝桃素含量很低 ,尚不能反映药材质量。本研究以黄酮
类化合物金丝桃苷为质量指标 ,对贯叶连翘提取物中金丝桃苷质
量进行研究 , 通过应用薄层 、紫外及化学反应等方法很好地鉴别
出贯叶连翘中黄酮苷类(金丝桃苷)的存在;通过考察温度 、光照
等因素对贯叶连翘中金丝桃苷的影响 ,为贯叶连翘药材的加工炮
制 、提取工艺考察及新型抗抑郁中药制剂研发提供了一定的理论
和实验依据。
1　试药与仪器
贯叶连翘药材提取物 (由合肥医药工业研究所提供 , 批号
200321-1, 200321-2, 200321-3);金丝桃苷对照品(由合肥医药工
业研究所提供 , 纯度 >96%);其他试剂均为分析纯。以羧甲基
纤维素纳为黏合剂的硅胶 GF254薄层板 (青岛海洋化工厂), 在
110℃活化 1 h, 贮干燥器中备用;CARY100型紫外分光光度仪
(瑞士布鲁克公司);SK5200H超声仪(上海精密仪器仪表有限公
司)。
2　方法与结果
2. 1　鉴别实验
2. 1. 1　色谱检识
溶液的制备:取贯叶连翘粉末 100 m g,加甲醇 10 m l定容 , 超
声处理 20 m in,经微孔滤膜(规格:25 mm;孔径:0. 45 U)滤过 , 作
为样品溶液。另取金丝桃苷对照品 ,加甲醇制成每毫升中约含 1
m g的溶液 , 作为对照品溶液。
薄层色谱:按照《中国药典》2000版 Ⅰ部附录 V IB薄层色谱
法实验 ,吸取以上 “溶液的制备”项下两种溶液 , 其中对照品溶液
2 μl和 5 μl;样品溶液 20 ～ 80 μl, 分别点于硅胶 G薄层板上 , 以
醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水(5∶3∶1∶1)为展开剂展开 [ 8] , 取出 , 晾
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 12期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M EDICA RESEARCH 2006 VOL. 17NO. 12　
干 , 置紫外灯(258 nm)下检视。样品色谱图与对照品色谱图在
相应位置上 , 显示相同的粉红色斑点;喷以三氯化铝试液后 ,再置
紫外灯(365 nm)下检视 , 均在对应位置上显示明显的粉红色斑
点。结果见图 1。
1.金丝桃苷对照品　2.贯叶连翘药材　 3.贯叶连翘批号 200321-1
4.贯叶连翘批号 200321-2　 5.贯叶连翘批号 200321-3　　　　
图 1　贯叶连翘薄层鉴别图谱
紫外分光光度法:金丝桃苷为黄酮苷类 ,具有紫外吸收。取
金丝桃苷对照品用甲醇制成每毫升中约含 20 μg的金丝桃苷溶
液 , 贯叶连翘 3批样品制成每毫升约含 100 μg的贯叶连翘提取
物 , 按照《中国药典》2000年版Ⅱ部附录 IVA紫外分光光度法测
定 , 用紫外分光光度仪从波长 200 ～ 500 nm进行扫描 , 并控制样
品溶液的浓度 , 使在波长 363 nm 处吸光度控制在 0. 5左右。测
定结果表明 3批样品溶液在波长 363 nm处均有最大吸收。结果
见图 2。
图 2　金丝桃苷紫外吸收光谱图
2. 1. 2　化学反应鉴别
盐酸-镁粉反应:样品的甲醇溶液 , 加入少许镁粉振摇 , 再滴
加几滴浓盐酸 1 ～ 2 m in后即由褐色变为棕红色。
A lC l3显色反应:样品的乙醇溶液和 1%A lC l3乙醇溶液反应
后 , 置紫外灯(365 nm)下检测显草绿色荧光 [ 9] 。
两种实验均表明金丝桃苷属于黄酮苷类 ,具有黄酮苷化合物
的通性。
2. 2　稳定性实验
2. 2. 1　热稳定性实验 考察温度对金丝桃苷的影响 , 取同一批样
品适量置扁形称量瓶内 ,摊成 3 mm厚 ,开口 , 在 40℃恒温烘箱内
放置 24 h,实验过程注意避光 ,放置室温后测定。结果见表 1。
2. 2. 2　高湿稳定性实验 考察湿度对金丝桃苷的影响 , 取同一批
样品适量置扁形称量瓶内 , 摊成 3 mm厚 ,开口 , 在 25℃、75%(氯
化钠过饱和溶液置干净的密封容器)[ 10]湿度条件下 , 实验过程中
注意避光 , 放置 24 h, 取样分析。结果见表 1。
2. 2. 3　光稳定性实验 实验中发现光照对样品中金丝桃苷含量
有一定的影响 , 因此将同一批样品适量置扁形称量瓶内 , 摊成 3
mm厚 , 开口 ,在 4 500 lx光照下照射 10 d, 于 5 ～ 10 d取样分析。
结果见表 1。
2. 2. 4　强酸稳定性实验 取样品适量加 1 mo l /m l盐酸溶液置于
试管中密封 , 在恒温烘箱 40℃条件下放置 24 h后取样分析 ,实验
过程注意避光。结果见表 1。
2. 2. 5　强碱稳定性实验 取样品适量加 1m o l /m l氢氧化钠溶液
置于试管中密封 ,在恒温烘箱 40℃条件下放置 24 h后取样分析 ,
实验过程注意避光。结果见表 1。
2. 2. 6　强氧化稳定性实验 取样品适量加 5%的 H
2
O
2
溶液置于
试管中封口 ,在恒温烘箱 40℃条件下放置 24 h后取样分析 , 实验
过程注意避光。结果见表 1。
表 1　贯叶连翘中金丝桃苷影响因素实验
实验条件 考核项目外观色泽 降解比率(%) 考察时间
　　　　40℃ 结成块状　 0. 50 24 h
75%湿度 , 25℃ 粉末潮解　 0. 46 24 h
1 m ol /m lHC l, 40℃　 橙黄色溶液 1. 51 24 h
　5%H
2
O
2
, 40℃ 土黄色溶液 1. 55 24 h
1 m ol /m lH aOH , 40℃　 酱红色溶液 无峰 24 h
光照 4 500 lx, 25℃　 墨褐色　　 0. 44 5 d
光照 4 500 lx, 25℃　 墨褐色　　 0. 73 10 d
结果表明在强碱破坏实验中金丝桃苷的主峰消失 ,在强酸 、
强氧化破坏条件下有很明显的降解;高温 、高湿破坏条件下产生
一定降解;贯叶连翘提取物中金丝桃苷的含量随着光照时间的推
移呈明显下降趋势。
2. 2. 7　加速实验 取同一批号样品适量 , 在温度 40℃、湿度 75%
条件下 ,放置 6个月 ,于 1, 2, 3, 6各月末取样分析 , 实验结果表明
样品外观色泽基本没有变化 , 而降解比率分别为 0. 07%,
0. 39%, 0. 72%, 1. 13%。
3　讨论
本研究化学反应鉴别 ,采用 A lC l3显色反应在 365 nm的紫外
灯下检测显示草绿色荧光 , 而不具有黄酮类的通性显示橙色荧
光 , 原因可能为贯叶连翘提取物中黄酮类成分相对含量较少 , 且
含有贯叶金丝桃素 、金丝桃素等多种成分的影响所致。采用薄层
鉴别金丝桃苷的展开 Rƒ在 0. 56样品的分离度较好。通过样品
的稳定性实验 ,样品在酸 、碱 、热 、湿 、光 、氧化 、加速实验条件下均
有不同程度的损失 , 因此在对贯叶连翘进行贮存时 , 应密闭 、闭
光 、置阴凉干燥处保存。
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