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收稿日期:2014 － 10 － 24
基金项目:辽宁省教育厅项目(2009A498);校杏林青蓝工程杰出青年基
金(500213)
作者简介:王洪成(1989 －) ，男，辽宁大连人，硕士研究生，研究方向:中
药种质资源鉴定及品质评价。
通讯作者:尹海波(1973 －) ，男，辽宁沈阳人，教授，硕士研究生导师，博
士，研究方向:种质资源鉴定及中药品质评价，E － mail:
yhb0528@ sina． com。
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DOI∶10． 13192 / j． issn． 1000-1719． 2015． 04． 065
HPLC同时测定不同产地野老鹳草中
5 种活性成分含量
王洪成，尹海波，曹波，谷靖逸
(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
摘 要:目的:建立 HPLC法同时测定野老鹳草中没食子酸，原儿茶酸，柯里拉京，金丝桃苷，槲皮素的含量测定方
法。方法:采用 ＲP － HPLC法，Agilent TC － C18色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，0. 1%磷酸水溶液 －乙腈为流动相梯度
洗脱，流速 0. 8 mL /min，柱温 25 ℃。结果:没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、金丝桃苷和槲皮素的线性范围为 1. 158 ～
23. 160 g·L －1(r = 0. 9999) ;0. 039 ～ 0. 792 g·L －1(r = 0. 9998) ;1. 498 ～ 29. 960 g·L －1(r = 0. 9999) ;0. 423 ～ 8. 460 g·
L －1(r = 0. 9998) ;0. 021 ～ 0. 401 g·L －1(r = 0. 9997)。平均回收率为 99. 35% (ＲSD 1. 3%) ;98. 54% (ＲSD 1. 5%) ;
99. 17%(ＲSD 0. 8%) ;98. 97%(ＲSD 1. 6%) ;99. 49%(ＲSD 2. 1%)。结论:该含量测定的方法快速，准确，重复性好，可
为野老鹳草药材的质量控制提供依据。
关键词:野老鹳草;没食子酸;原儿茶酸;柯里拉京;金丝桃苷;槲皮素;HPLC
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标志码:A 文章编号:1000-1719(2015)04-0834-03
Determination of Five Active Compounds in Geranium
Carolinianum L． from Different Habitats by HPLC
WANG Hongcheng，YIN Haibo，CAO Bo，GU Jingyi
(School of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To determine five active compounds in Geranium carolinianum L．，namely Gallic acid，Protocatechuic
acid，Corilagin，hyperin and quercetin． Methods:The HPLC was applied and the separation was performed on an Agilent TC － C18
analytical column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)． The mobile phase was acetonitrile(A)－ water containing 0． 1% H3PO4(B)with
gradient elution mode at the flow rate of 0． 8 mL·min －1，and the column temperature was 25 ℃ ． Ｒesults:The average recoveries
were Gallic acid，Protocatechuic acid，Corilagin，hyperin and quercetin were 1． 158 － 23． 160 g·L －1(r = 0． 9999) ，0． 039 － 0．
792 g·L －1(r = 0． 9998) ，1． 498 － 29． 960 g·L －1(r = 0． 9999) ，0． 423 － 8． 460 g·L －1(r = 0． 9998)and 0． 021 － 0． 401 g·
L －1(r = 0． 9997) ，respectively． The average recoveries were 99． 35%(ＲSD 1． 3%) ，98． 54%(ＲSD 1． 5%) ，99． 17%(ＲSD 0．
8%) ，98． 97%(ＲSD 1． 6%)and 99． 49% (ＲSD 2． 1%) ，respectively． Conclusion:The method is simple and accurate with a
good reproducibility and can be used as a quality control method for Geranium carolinianum L．
Key words:Geranium carolinianum L．;Gallic acid;Protocatechuic acid;Corilagin;hyperin;quercetin;HPLC
野老鹳草为牻牛儿苗科植物野老鹳草 Geranium
carolinianum L. 的干燥地上部分，习称“短嘴老鹳草”，
2010 年版《中国药典》将其收录作为药材老鹳草的正
品来源之一，且为主流商品，主要分布在江西，江苏，浙
江等地。具有祛风湿，通经络的功效，主要用于风湿痹
痛，筋骨酸痛［1］。野老鹳草主要含有鞣质、酚酸、黄酮
及挥发油类化合物，其中酚酸类和黄酮类化合物表现
出了多种药理活性。野老鹳草中含有丰富的老鹳草
·438· 辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 4 期
素，老鹳草素属于可水解鞣质中的鞣花鞣质，加水可分
解为没食子酸、柯里拉京、鞣花酸、六羟基联苯二甲酸、
云实酸和云实素［2］，是药材中的主要有效成分属于活
性有效成分，其中所含的没食子酸具有抗炎、抗肿瘤的
作用，可作为潜在的阻止肿瘤发生的化学预防剂［3］，原
儿茶酸具有祛痰、平喘、抗血小板凝集的作用［4］，柯里
拉京具有抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬化、降血压、抑
制病毒等生物活性［5］，金丝桃苷则具有保肝作用、心脑
血管保护作用、调节免疫等药理活性，特别是对于肌缺
血再灌注，脑缺血再灌注，脑梗塞都显示良好的保护作
用［6］，槲皮素药理作用广泛，具有扩张冠状动脉、降血
脂、抗血小板凝集、抗糖尿病并发症等多方面作用［7］，
同时该药材在我国历版药典中均无明确的含量测定
项，为了更加全面、客观地评价药材的质量，开发利用
该药材资源，本实验建立了测定没食子酸、原儿茶酸、
柯里拉京、金丝桃苷、槲皮素 5 种活性成分的 HPLC 方
法，并对不同产地的野老鹳草药材进行了含量分析，为
全面控制其质量提供依据。
1 仪器与材料
Agilent1100 型高效液相色谱仪，Agilent TC － C18
色谱柱，SPD － 10A 紫外检测器，四元低压梯度泵，柱
温箱，KQ3200 超声波清洗(昆山市超声仪器有限公
司) ，CP225D电子天平(德国 Sartorius 公司)。没食子
酸(中国药品生物鉴定所) ，原儿茶酸(中国药品生物
鉴定所)，柯里拉京(中国药品生物鉴定所) ，金丝桃苷
(上海源叶)，槲皮素(中国药品生物制品检定所，
10081 － 200406)，乙腈和磷酸为色谱纯，水为重蒸水;
其他均为分析纯。
实验采集 8 份不同产地的野老鹳草药材，经本院
药用植物教研室尹海波教授鉴定为牻牛儿苗科植物野
老鹳草(G. carolinianum L. )的干燥地上部分，标本保
存于本院药用植物教研室。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Agilent TC － C18 色谱柱(250 mm × 4. 6 mm，5
μm);流动相 A 为乙腈，B 为 0. 1%磷酸水溶液;梯度
洗脱程序:0 ～ 10 min，4% ～ 5% A;10 ～ 20 min，5% ～
15% A;20 ～ 30 min，15% ～ 15% A;30 ～ 40 min，15%
～20% A;40 ～ 60 min，20% ～ 50% A，流速 0. 8 mL·
min －1;检测波长:0 ～ 30 min 检测波长为 274 nm，30 ～
60 min检测波长为 360 nm;柱温 25 ℃;进样量 10 μL。
在此色谱条件下没食子酸，原儿茶酸，柯里拉京，金丝
桃苷，槲皮素的分离均大于 1. 5，分离度良好。
1. 没食子酸 2. 原儿茶酸 3. 柯里拉京 4. 金丝桃苷 5. 槲皮素
图 1 5 种混合对照品(A)和样品(B)的 HPLC图
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别取没食子酸，原儿茶
酸，柯里拉京，金丝桃苷，槲皮素，适量，精密称定，用甲
醇溶解。制成每 1 mL 分别含没食子酸 1. 160 mg，原
儿茶酸 0. 039 mg，柯里拉京 1. 497 mg，金丝桃苷 0. 423
mg，槲皮素 0. 020 mg混合对照品溶液，摇匀，即得。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取粉末 2 g，石油
醚脱脂，用水回流提取 2 次，在用 60%乙醇回流提取 2
次，每次 60 min，合并滤液，定量转移至 10 mL容量瓶，
用甲醇稀释至刻度，备用。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶
液 1，5，10，15，20 μL 按 2. 1 项下方法连续进样，测得
峰面积，以进样量(μg)为横坐标(X) ，色谱峰面积为
纵坐标(Y) ，绘制标准曲线，得没食子酸、原儿茶酸、柯
里拉京、金丝桃苷和槲皮素的回归方程分别为:Y =
2496. 8 X － 0. 9329，r = 0. 9999;Y = 1360. 5 X + 9. 2475，
r = 0. 9998;Y = 1797. 0 X － 205. 45，r = 0. 9999;Y =
1932. 8 X － 1. 0641，r = 0. 9998;Y = 3749. 4 X － 14. 705，
r = 0. 9997。结果表明，没食子酸、原儿茶酸、柯里拉
京、金丝桃苷和槲皮素分别在 1. 158 ～ 23. 160;
0. 039 ～ 0. 792;1. 498 ～ 29. 960;0. 423 ～ 8. 460;
0. 021 ～ 0. 401 g·L －1线性关系良好。
2. 3. 2 精密度试验 取混合对照品溶液，按上述色谱
条件，连续重复进样 6 次，计算没食子酸、原儿茶酸、柯
里拉京、金丝桃苷、槲皮素峰面积的 ＲSD 分别为
1. 45%、1. 24%、0. 61%、1. 92%、0. 71%，表明仪器精
密度良好。
2. 3. 3 重复性试验 精密称取同一样品 6 份，各 2 g，
按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱
条件进行测定，测定没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、金
丝桃苷、槲皮素峰面积的 ＲSD 值分别为 0. 37%、
1. 80%、1. 06%、1. 68%、1. 15%表明该方法重复性良
好。
2. 3. 4 稳定性试验 取供试品溶液，分别于配置后
0、2、4、8、12、24 h 进样 10 μL，记录峰面积，结果没食
子酸、原儿茶酸、柯里拉京、金丝桃苷、槲皮素峰面积的
ＲSD分别为 0. 51%、2. 31%、0. 98%、1. 28%、2. 39%，
结果表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 3. 5 加样回收率试验 精密称定已测知含量的样
品粉末 6 份，每份约 2. 0 g，分别精密加入没食子酸、原
儿茶酸、柯里拉京、金丝桃苷、槲皮素对照品，按 2. 3 项
下制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件下进行测定。
平均回收率(n = 6)分别为 99. 35% (ＲSD1. 33%) ，
98. 54% (ＲSD1. 46%) ，99. 17% (ＲSD0. 79%) ，
98. 97%(ＲSD1. 61%) ，99. 49%(ＲSD2. 03%)。
2. 4 样品含量测定
分别精密吸取供试品溶液 10 μL，在上述色谱条
件下进样，记录峰面积并根据标准曲线计算含量，测定
结果见表 1。
3 讨论
野老鹳草中主要可水解鞣质为老鹳草素，在高温
下可以水解为没食子酸，柯里拉京和六羟基联苯二甲
酸等［8］，结果见图 2。为了使老鹳草素彻底水解称为
·538·辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 4 期
待测产物，我们考察了不同提取溶剂对结果的影响，其
中(A)为 80%乙醇提取 1 h(B)为 50%乙醇提取 1 h
(C)为水提取 1 h，结果显示老鹳草素(a)在以水提取
1 h完全水解。结果如图 3。
表 1 8 个产地野老鹳草中 5 种活性成分含量(g·L －1)
编号 产地 没食子酸 原儿茶酸 柯里拉京 金丝桃苷 槲皮素
1 江西庐山 1. 42 0. 08 0. 82 0. 11 0. 0109
2 江西九江 7. 36 0. 35 9. 02 0. 77 0. 0532
3 江苏扬州 4. 15 0. 27 8. 68 0. 53 0. 0514
4 上海 0. 36 0. 02 0. 22 0. 03 0. 0052
5 南京仙林区 6. 15 0. 39 12. 54 1. 19 0. 0778
6 江西 6. 51 0. 38 10. 46 1. 63 0. 0473
7 南京江宁区 1. 59 0. 13 0. 74 0. 26 0. 0120
8 江苏苏州 5. 12 0. 28 8. 95 2. 83 0. 0462
针对样品的提取方法进行了考察，野老鹳草中含
有老鹳草素，属可水解鞣质中的鞣花鞣质，高浓度醇可
抑制其水解;而黄酮类化合物一般难溶或不溶于水，可
溶于甲醇，乙醇等有机溶剂［9］，为了使老鹳草素充分水
解为待测产物，同时又可提取出黄酮类成分，本实验采
用先水回流在乙醇回流的提取方法。
本实验分别对 5 种待测成分对照品溶液在紫外
200 ～ 400 nm 进行全波长扫描，结果表明没食子酸、原
儿茶酸、柯里拉京在 274 nm 处有最大吸收，金丝桃苷、
槲皮素在 360 nm 处有最大吸收。因此 0 ～ 30 min 检
测波长为 274 nm，30 ～ 60 min检测波长为 360 nm。同
时在确定流动相系统时，分别比较了不同梯度的甲
醇 －水、乙腈 －水和乙腈 －磷酸盐缓冲体系，经多次试
验，最终确定了以乙腈 － 0. 1% 磷酸水为流动相进行
梯度洗脱，可使各待测成分得到理想的分离，其中
0. 1% 的磷酸可有效地抑制色谱峰的拖尾现象。
1. 没食子酸 2. 六羟基联苯二甲酸 3. 鞣花酸 4. 柯里拉京 5. 云实酸 6. 云实素
图 2 老鹳草素及其水解产物
图 3 不同提取溶剂对老鹳草素水解的影响
本实验首次采用 HPLC 测定了 8 个不同产地的野
老鹳草药材中 5 种活性成分的含量，结果表明没食子
酸、原儿茶酸、柯里拉京、金丝桃苷和槲皮素为不同产
地野老鹳草药材的共有成分，虽然不同产地野老鹳草
中 5 种成分的含量差异较大，但均以柯里拉京的含量
最高，没食子酸和金丝桃苷次之，而原儿茶酸和槲皮素
含量相对较低。本文采用 HPLC 同时对我国老鹳草药
材的主流品种野老鹳草中 5 种活性成分含量进行了测
定，为制定野老鹳草的质量标准和野老鹳草药材的进
一步开发利用提供了科学依据。
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