全 文 ：8 1 9 3年 林 产 化 学 与 工 业
Ch e m i s t r y a n d In d u s t r y o f F o r e s t P r o d u e t s
第 3期
化香果 〔 ` ’水解产物的研究
罗庆云 薛雨京 ’ 吴杏林 ’
( 南京林产工业学院林化系 )
摘 要
本文介绍用聚酞胺柱层析法 , 从化香果乙醇提取物的酸水解液中 , 分离出一种
无色针状结品体 。 根据该品体纸色谱图的 R ,值 、 紫外 、 红外光谱数据以 及 有 关 化
学特性反应 , 鉴定为没食子酸 , 用纸层析法检定出水解液中还存在 D 一 萄葡糖 、 靴
花酸等化合物 。 此外 , 介绍了用 C S 一 9 10 双波长薄层色谱扫描仪进行没 食子 酸 的
定量分析 , 该方法可靠 , 快速简便 , 样品用量少 , 适于测定含量较低的样 .钻。
根据一些已知水解类单宁 ( 如 , 中国五桔子单宁、 橡碗单宁 、 柯子单宁 ) 结构的共
同规律 , 水解类单宁分子均 以一个糖分子 ( 多 数是 D一葡萄糖 , 也有少数其 他糖或个尼
酸 ) 为整个分子的骨架 , 而与糖分子上经基酷化的则是没食子酸或间双没食 一子酸 、 多没
食子酸及靴花酸或与之有生源关系的其他酚按酸 〔“ 〕 。 水解类单宁在酸 、 碱或 酶 的存在
下发生水解作用 , 醋键被打断 , 产生构成单宁分子的简单组分 。 因此 , 对单宁水解产物
的研究是研究单宁结构及其用途的重要手段之一 。
一 、 用聚酞胺柱层析法分离没食子酸
( 一 ) 化香果乙醉提取物的制备
称取化香果试样 ( 粉碎 ) 约 30 0克 , 先用无水 乙 醚多次回流抽除叶绿素等极性小的
物质 , 待试样中乙醚挥发尽后 , 再分别用 95 % 、 60 % 乙醇 回流提取 3 一 4 次 , 合并乙醇
提取液 , 过滤 。 所得滤液经减压浓缩 , 放入冰箱 ( 3 ℃ ) 5 天后取 出 , 滤除沉淀 。 将滤
液减压蒸浓后 , 放入真空干燥箱中烘干 ( 70 ℃ , 75 0毫米汞柱 ) , 得固体物约 10 。克 ( 含
水 4 . 46 % ) 备用 。
( 二 ) 水解液的制备
分别称取上述制备的固体试样约 5 克 , 溶 f 少量热蒸馏水中 , 用 I N 盐酸和 8 % 硫
酸各 40 0寇升加热回流 8 小时 ( 甘油浴温度 1 10 ~ 1 20 ℃ ) , 冷却后用 5 号玻砂漏斗过滤 ,
再用少址热蒸馏水多次洗涤沉淀 , 合并滤液 , 经减压浓缩得到水解浓缩液 。
( 三 ) 用纸层析法查定水解产物
沐 薛雨京 、 吴 杏林为南京林产工业学院林化系 78 届毕业生 。
12 林 产 化 学 与 工 业 1 9 3 8年
1
.查定没食子酸 分别用单相 、 双相纸层析对水解
液进行层析分离 。 前者展开剂为 8% 醋酸 ; 后者展开齐 J弟
一相为 8% 醋酸 , 第二相为正丁醇 : 醋酸 : 水 ( 4 : 1 : 5 )
(简称 B A W ) 。 纸 色谱图在波长 25 4毫微米紫外灯照射
下检出萤光斑点 , 见 图 1 、 图 2 和表 1 。
2
. 查定糖 用来验证糖的方法很多 。 试验表明纸
层析法鉴定糖类要 比薄层层析法迅速简便 。 我们采用三
种 展 开 剂 〔 “ 〕 : ①正 丁 醇 : 毗咙 : 乙酸 :水 ( 10 : 6 : 1 : 3 ) ;
②乙酸乙醋 : 异丙醇 : 毗咙 : 水 ( 7 : 3 : 2 : 2 ) ; ③乙酸
乙醋 : 毗陡 : 乙酸 : 水 ( 5 : 5 : 1 : 3 ) , 均 用 苯胺 -
邻苯二甲酸 专显色 , 呈现出一个点的颜色及 R , 值与 D 一葡
萄糖标准品对照完全一致 , 见图 3 。
由纸层析法初步确定酸水解液中存在没 食 子 酸 、
D 一葡 萄糖 、 蹂花酸等化合物 。
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图 1 酸水解液一单相纸层析
I 一 I N H C I水解液
I 一 8 % H ZS O ; 水解液
I 一没食子酸标样
公
一第浦心 崩`
女 } }一 八、勺二 . 1 , Z 、 、止 /
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1 N H C I水解液 — 第一柑 召% c4H2 . 8 % H Z S O `水解液
图 2 酸水解液双相纸层析
表 1
主要萤光斑点
酸水解液纸层析特征
紫外光下颜色 (入 = 254 毫微米 ) 化 合 物 名 称
` … “ 紫 { , 花 酸“
1 亮 绿 } 待 鉴 定“ { 紫 { 没食子酸
4 ` 紫 红 !
苯胺 一邻苯二甲酸试剂 将 0 . 93 克苯胺和 1 . 6 克邻苯二甲酸溶于 10 0毫升用水饱 和的
正丁醉中 。 显色后于 85 ℃烘箱中烘 10分钟 , D 一葡萄糖呈淡黄一棕色。
第 3 期 化香果水解产物的研究 1 3
一
_
一
{。 。 }
O 0
I 兀 I 丁
展开剂 ①
图 3
展开剂 ⑧ 展开剂③
I 一 1 NC I H水解液
丁一 D一葡萄糖标样
用三种展开剂鉴定 1 C I N H水解液中的 D一葡萄糖
(四 )用聚酞胺柱层析法分离水解产物
1
。 上柱样品的处理 将 I N盐酸水解液制得的固体用乙酸乙醋多次热提取 , 过滤 ,
合并滤液 , 减压浓缩至干 , 把干固物溶于少量 1 。 % 乙醇中 (不溶部分弃去 ) , 待上柱 。
2
. 柱层析分离水解产物 将颗粒状聚酞胺 13 0毫升 〔 4〕用 10 % 乙醇 浸 泡 2 ~ 3 小
时 , 间歇搅拌排除空气后湿法装柱 ( 1 4 又 5 6 0毫米 ) , 样品上柱后 , 以 10 % 乙醇洗脱 ,
用 B S一10 0A 型 自动部分收集器收集洗脱液 , 流速每管 7 ~ 8 毫升 / 20 分 钟 , 用 75 1紫外
分光光度计测量每管的吸收值 (波长为 27 0毫微米 ) , 依此来控制洗脱情况 , 见 图 4 。
· 产一、
, 、军澳à划娜寻l
f心粗 任口 矛4口 I乙O 活口
— 管教图 4 聚酸胺柱层析 10 % 乙醇洗脱图谱
根据图 4 , 把 70 ~ 1 06 管的洗脱液合并 , 在减压浓缩过程中有灰 白色晶体 析 出 , 滤
出粗晶体 , 用热水重结晶 , 得无色针状晶体 A 。
( 五 ) 晶体 A 的鉴定
1
. 双相纸层析R f值的测定 对晶体A和没食子酸标样同时进行双相纸层析 , 方法
同 ( 三 ) 1 , 测得二者 R f一致 , 见表 2 。
林 产 化1 9 3 8
一
工一与一学一
表 2没食子酸双相纸层析 R :值 的比较
R :了改 相 别 第 一相 8%酷酸 第二相 B入W
没食子酸标样 0。 9 4 0 .9 6
品 体 A{ 。 · 9 4。 · 68
2
。 紫外吸收光谱的测定 用7 1 5 紫外分光光度计分别测量没食子 酸 标样和品体 A
的吸收曲线 , 结果二者完全一致 。 紫外光谱
,
E t O H
八
1l l a X
2 1 5 , 2 6 6毫微米 。
3
。 红外吸收光谱的测定
缝 N , 增益 2 . 5 , 扫描速度 6 分钊
用 日立 28 5光栅型红外分光光度计测量 , 测量条件 : 狭条
。 红外光谱 。 K B r
_ 1
C n l
1l l a X
3 5 0 0 , 3 3 0 0 , 1 3 8 0 , 1 3 2 0 ,
2 2 2 0 ( 羚 J.些) , 3 0 5 0 , 2 6 5 0 ( 按酸缔合经纂 ) , 1 6 5 0 ( C = O ) , 1 6 1 0 , 1 5 4 0 ( 芳环 ) ,
8 7 0 ( 1
, 3 , 4 , 5 一四取代 ) 。 IR 与没食子酸的 A l d r i e h E 7 3 1 标准图谱相吻合 〔 5 〕 。
4
. 熔点测定 用毛细管熔点测定仪 ( M E L 一T E M P A n I nt ge r at e d C a p il a r ,
M e l t i n g P o i n t A p p a r a t u s ) 测定熔点为
C O O H
\。l厂j
23 3士 2 ℃ , 棍合熔点不下降 ( 温度计未经
校正 ) 。
5
. 化学试剂特性反应 与三氯 化 铁 -
铁氰化钾反应及澳酚蓝反应皆为阳性 。
综合上述鉴定 , 可以确定晶体 A 为没食
子酸 , 其结构式为
H O / 、厂、 H
O H
二 、 用双波长薄层色谱扫描仪测定没食子酸含量
经上述试验确定化香果 乙醉提取物的酸水解液中存在没食子酸 , 而它在乙 醉抽出物
中所 占比例 , 无论从化香果 一单宁分子结构的推测 , 还是从工业的利用价值来说都是令人
瞩 目的 。 为此 , 我们用双波长薄层色谱扫描仪进行了定量测定 。
( 一 ) 色谱条件
新华层析纸 3 一号 ( 1 7 火 17 厘米 ) 或纤维素薄层板 , 展开剂为 8 %醋酸 , 展开后不显
色 , 直接对紫色萤光斑点进行扫描测定 。
( 二 ) 测定方法和结果
1
。 标准溶液的制备 准确称取没食子酸标准样品50 毫克 , 置于 10 毫升容 J云瓶中 ,
加入乙醇溶解并稀至刻度 , 此标准溶液浓度为 5微克 /微升 。
2
. 样品溶液的制备 分别称取化香果 乙醇 提 取 物 1 . 0 1 0 2克 、 1 . 0 0 0 4克 , 按一 、
( 二 ) 步骤制备 I N 盐酸水解液 25 毫升和 8 %硫酸水解液 1 0 毫升气 供分析用 。
, 硫酸水解液不宜燕得过浓 , 否 则会彩响纸层析的操作 。
第 3期 化香果水解产物的研究
3
.
L几作曲线的绘制 用微童
注射器依次吸取没食子酸标准溶液
1, 3 , 5 , 7 , 9 , 1 1和 1 3微升
点 一于层析纸上 , 各点之间距离为 2
厘米 , 按一 、 ( 三 ) 1 . 进行单相
层析 , 待纸气干后进行扫描测定 。
以没食子酸标样斑点的绝对量为横
座标 , 斑点的积分面积为纵座标作
图 。 根据图显示 点样量与积分值在
45 微克以下成线性关系 , 见图 5 。
4
. 测定结果 分别用微量注
射器吸取 I N 盐酸和 8 % 硫酸水解
液 10 微升以及没食子酸标准溶液 6
微升点在同一张层析纸上 ( 1 2 、 17 厘米
X的气
喇长 2凑
二舀- . - - ~ ` - ~ 一 - 占 . ~ . ~ . ~ 偏一~ - ~百 f歹 2 5 弓丁 4 夕
瑛食子酸含量(微卿
图 5 没食子酸工作曲线图
)
, 试样各点二点作为平行试验 ,按上述方法进行
单相层析 , 扫描测定结果 ( 以绝干乙醇提取物计 ) 见表 3 。
表 3 化香果 乙 醇提取物的水解液 中没食子 酸的含量
IN H C I水解液 8 % H : 5 0 `水解液
点 样 量 〔微升 )
没食子酸含量 ( 微克 )
没食子酸浓度 ( % )
按 乙醉提取物计 (绝干 )没食子酸得率 ( % )
平 均 得 率 ( % )
. A , I B …
i 。 { z。 { 1。 } : 。
3 0
。
7 1 } 3 3
.
3 3 } 6
.
4 1 1 5
.
77
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3 0 7 } 0
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3 3 3 { 0
.
0 6 4 1 1 0
.
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{ “
· “ 7
参 考 文 献
〔 1 〕 罗 庆云等 , 化香果化学成分的研究 《 南京林产工业学院学报 》 1 9 8 3 , ( 2 ) 。
〔 2 〕 南京林产工业学院等编 , 《 拷胶生产工艺学 》 1 9 8。 , ( 41 一 72 ) 。
〔 3 〕 中国医学科学院药物研究所编 , 《 薄层层离及其在中草药分析中的应用 》 科学出版社 、
2 9 7 5
,
( 4 2 5~ 4 3 0 )
。
〔 4 〕 _卜海药物研究所编 , 《 中草药有效成份的提取和 分 ,离 》 人 民 出版社 , 1 9了2 , ( 94 一
9 8 )
。
〔 5 〕 袁阿兴等 , 细叶野牡丹化学成分的研究 《 中草药杂志 》 1 9 8 2 , ( 5 ) , ( 12 一 1 4 ) 。
〔 6 〕 E . H a s l a m , 1 9 6 6 , C h e m i s t r y o f V e g e t a b l e T a n n i n s— T h e H y d r o l y s a b l e
T a n n i n s
。
1 6林 产 化 学 与 工 业9 1 3 8年
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,
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a r e a l s o p r e s e n t i n t h e h y d r o l y t王e s o l u t i o n .
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。
T h i s m e t h o d
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, q u i e k
, s笼m p l e , a n d s u i t a b l e f o r d e t e r m i n i n g
s a m p l e s i n s m a l l q u a n t i t i e s
.