全 文 ：书表 1 β-actin，CTLA-4，Foxp3 引物序列
primers Sequences Size
β-actin S:5’-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC-3’
AS:5’-AAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3’ 360bp
CTLA-4 S:5’-CAGTGGTTCCAAAGGTTGTAG-3’
AS:5’-GTTCATACAAACACTGCCAGC-3’ 342bp
Foxp3 S:5’-GAATCCTGTGGCATCCATGAC-3’
AS:5’-AACGCAGCTCAGTAACAGCG-3’ 382bp
表 2 各组 CD4 + CD25 + Tr /CD4 + T的变化
对照组 未治疗组 治疗组
胸腺(%) 8. 62 ± 7. 8 6. 89 ± 4. 6＊ 7. 78 ± 2. 1△
脾脏(%) 18. 38 ± 9. 6 15. 13 ± 7. 9＊ 16. 84 ± 6. 7△
注:＊与对照组相比 P ＞ 0. 05，△与未治疗组相比 P ＞ 0. 05
表 3 各组小鼠 CD4 + CD25 + Tr功能基因的变化
胸腺 脾脏
Foxp3 CTLA-4 Foxp3 CTLA-4
对照组 0. 97 ± 0. 15 0. 78 ± 0. 09 0. 46 ± 0. 09 0. 44 ± 0. 17
未治疗组 0. 71 ± 0. 11＊ 1. 32 ± 0. 24＊ 0. 28 ± 0. 08＊ 0. 67 ± 0. 11＊
治疗组 0. 93 ± 0. 18△ 0. 71 ± 0. 18△ 0. 41 ± 0. 13△ 0. 39 ± 0. 15△
注:＊与对照组相比 P ＜ 0. 05，△与未治疗组相比 P ＜ 0. 05
3 讨论
系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见多因性自身免疫病，
病因和发病机制尚未完全阐明。我们采用亲代 BALB / c 小
鼠淋巴细胞输入(C57BL /6 × BALB /c)F1 代小鼠产生了
cGVHD，表现为脱毛，蛋白尿等症状，免疫学异常表现为血清
中高滴度的抗核抗体，肾脏可见免疫复合物沉积。我们实验
结果和文献报道一致，表明本实验所用的 cGVHD 诱导狼疮
样小鼠的方法是可行的，并且狼疮样小鼠全部处于发病
状态。
近年来发现的 Treg具有免疫抑制作用，能抑制多种自身
免疫病的发生，包括Ⅰ型糖尿病［2］、实验性过敏性脑脊髓炎、
炎性肠病等。但 Treg在炎症性自身免疫病(包括 SLE等)中
的作用还存在争议。本研究的结果显示 cGVHD 小鼠胸腺、
脾脏中的 Treg在数量上无明显差别。
Foxp3 是 CD4 + CD25 + Tr［3］发育和行使功能的必需转
录因子，除 Foxp3 外，Treg表面表达一种重要的膜分子:细胞
毒性 T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA-4，CD152)。CTLA-4 是
淋巴细胞表面的一种与免疫信号传递有关的配体蛋白分
子［4］，它属于免疫球蛋白超家族成员，为Ⅰ型膜蛋白分子。
CTLA-4 与 B7 结合后，负调节 T 细胞的活化，可减缓细胞周
期的进程，降低 IL-2 的产生，使 T细胞活化增殖受到抑制，从
而使免疫达到平衡状态，保持外周的免疫平衡。我们的实验
结果显示 cGVHD小鼠糖皮质激素治疗后 SLE模型鼠中枢外
周耐受异常有明显的恢复，胸腺和脾脏 Treg产生数量虽无增
加但功能基因 Foxp3 增强可能为 SLE 全身症状和脏器损伤
恢复(肾脏好转)的原因之一。激素治疗后 Treg 的功能增
强，而 T细胞活化基因 CTLA-4 明显受抑制，由此可见提升
Treg功能而抑制 T 细胞活化，可能为狼疮性肾炎新的治疗
靶点。
参考文献
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去马兜铃朱砂莲提取物对小鼠伤害性疼痛的影响
张金芝 高晓红 张敏 陈冬雪 范新田
作者单位:132013 吉林市人民医院(张金芝) ;北华大学药学院
(高晓红 张敏 陈冬雪 范新田)
朱砂莲为马兜铃科马兜铃属植物，性味苦、辛、寒。其主
要功能清热解毒，消肿止痛［1］。但其化学成分马兜铃酸可直
接损伤肾小管及间质，致近端肾小管刷状缘脱落、坏死［2］。
有报道广西朱砂莲药材水提物和醇提物均能明显的抑制小
鼠巴豆油致耳廓肿胀、腹腔毛细血管通透性亢进;且能明显
减少醋酸致小鼠扭体次数及延长热板致病的潜伏期有镇痛
作用［3］。本课题旨在利用现代工艺技术进行提取、萃取、去
除朱砂莲中有害成分马兜铃酸，并观察其对光热疼痛模型小
鼠的影响，以期开发安全有效的中药镇痛剂。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 实验动物:昆明种小鼠(♀♂兼用，由长春
高新医学动物实验研究中心提供)。药品与试剂:朱砂莲(购
于长春中药材批发市场) ;哌替啶(沈阳第一制药厂，
011108) ;阿司匹林(华北制药厂，990208)。实验仪器:光热
尾痛仪(SW-200，成都泰盟科技有限公司)。
1. 2 实验方法 本实验应用小鼠光热尾痛仪。将小鼠固定
在特制的塑料筒中，令其尾部暴露在外并自然下垂，待动物
安静 20 min后再予测定。辐射热源照射相当于尾部中、下三
分之一交界处的皮肤，当照射开始同时启动秒表，待动物尾
部出现明显逃避反应时，关闭光源并同时停止计时［4］。预选
痛阈 4 ～ 6 s昆明种小鼠 50 只，♀♂各半，体重 18 ～ 22 g，随
机分 5 组，分别为对照组(NS，生理盐水 0. 1 ml·10 g-1)、阿
司匹林组(ASP，0. 3 g /kg)、哌替啶组(Pethidine，50 mg /kg)、
·811· 中国现代药物应用 2012 年 12 月第 6 卷第 23 期 Chin J Mod Drug Appl，Dec 2012，Vol． 6，No． 23
DOI:10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2012.23.016
书去马兜铃酸朱砂莲醇提物低剂量组(ZhSL-L，50 mg /kg)、朱
砂莲醇提物中剂量组(ZhSL-M，100 mg /kg)、朱砂莲醇提物高
剂量组(ZhSL-H，200 mg /kg) ，各组均 ig 给药，分别测定 30
min、60 min、90 min、120 min、180 min、240 min 小鼠痛阈值。
甩尾反应潜伏期(Tail-Flick Latency，TFL)。每 5 min测定一
次，取三次测定的平均值作为基础伤害性感受阈。若动物在
镇痛作用下 TFL延长至超过 15s，则停止照射并以 15 s 作为
甩尾潜伏期的上限，以免照射过久灼伤皮肤。
1. 3 统计学方法 本文中数据均以均数 ±标准差(x ± s)表
示，经 SPSS软件单因素方差分析处理。
2 实验结果
实验结果如表 1 所示。
表 1 去马兜铃朱砂莲提取物对小鼠光热刺激甩尾实验的影响(x ± s)
剂量(mg /kg) 基础痛阈(s)
给药后痛阈(s)
30 min 60 min 90 min 120 min 180 min 240 min
NS 0. 1 ml·10 g-1 3. 29 ± 0. 79 3. 49 ± 0. 75 3. 98 ± 0. 88 3. 74 ± 1. 15 3. 63 ± 0. 82 3. 73 ± 0. 80 3. 58 ± 0. 87
ASP 200 3. 51 ± 0. 75 4. 30 ± 1. 05* 5. 45 ± 1. 20* 5. 21 ± 1. 14* 4. 56 ± 0. 84* 4. 25 ± 0. 58 4. 13 ± 1. 08
Pethidine 25 3. 32 ± 0. 66 6. 37 ± 1. 25＊＊＊ 5. 99 ± 1. 35＊＊ 4. 87 ± 1. 15* 4. 61 ± 1. 15* 3. 87 ± 0. 70 3. 70 ± 1. 05
ZhSL-L 50 3. 38 ± 0. 83 3. 99 ± 0. 71 5. 42 ± 0. 89＊＊ 4. 29 ± 0. 95 4. 28 ± 0. 53 3. 87 ± 0. 77 3. 75 ± 0. 78
ZhSL-M 100 3. 20 ± 0. 59 4. 04 ± 0. 67 5. 64 ± 1. 36＊＊ 5. 52 ± 1. 01＊＊ 4. 48 ± 0. 60* 4. 10 ± 0. 58 4. 09 ± 0. 72
ZhSL-H 200 3. 21 ± 0. 85 4. 26 ± 0. 78 5. 83 ± 1. 32＊＊＊ 5. 79 ± 1. 08＊＊ 4. 28 ± 0. 66* 4. 07 ± 1. 06 4. 70 ± 1. 54
注:与 NS组比较:* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001;与基础痛阈比较:P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01，P ＜ 0. 001
3 讨论
目前国家食品药品管理机构已经决定加强对一些有含
马兜铃酸的中药材及其制剂的监督管理，因为服用含马兜铃
酸的中药可引起肾脏损害给患者带来生命危险。含有马兜
铃酸的中草药种类很多包括青木香、朱砂莲等等，由含有马
兜铃酸药材的中成药也有很多。有报道引起马兜铃酸肾病
的药物为冠心苏合丸、龙胆泻肝丸，其中女性占 69. 49%，平
均年龄为 64. 4 岁，平均服用药物史为 8 年，通常认为临床滥
用中药及对中药毒性认识不足而是引起的肾损害的主要原
因［5］。利用现代工艺技术进行提取、萃取、去除朱砂莲中有
害成分马兜铃酸是使朱砂莲更大的发挥镇痛治疗作用而对
人体危害减少的重要方法。本研究结果表明，与给药前和对
照组比较，小鼠一次性灌胃给去马兜铃朱砂莲提取物 50、
100、200 mg /kg 后与基础痛阈值比较，明显延长缩尾反应潜
伏期;与阴性对照组比较也明显延长缩尾反应潜伏期。给药
后 60 min开始显效，60、90、120 min时较明显，提示去马兜铃
朱砂莲提取物具有显著的镇痛作用，且其中、高剂量组的作
用强度与阿司匹林相似。
参考文献
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HPLC法测定盐酸莫西沙星含量及其有关物质
马好
【摘要】 通过 HPLC法检测盐酸莫西沙星的含量与和它有关的物质，色谱柱是 Sepax BＲ-C18 (250
mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流动相是甲醇-四丁基硫酸氢铵磷酸缓冲液(28 ∶ 72) ，检测流速是 1. 3 ml /min，
波长是 293 nm，柱温是 45℃。在已建立的色谱状况中，盐酸莫西沙星能很好的和各杂质分离开来，当盐
酸莫西沙星的浓度处在 38. 55 ～ 57. 82μg /ml的范围里时，其和峰面积可以保持一个良好的线性关系(r
= 0. 9998) ，检测的最低限是 0. 006 25μg /ml，定量限是 0. 025 μg /ml。经研究发现，建立起的方法有较好
的专属性，极易操作，能够在测定盐酸莫西沙星的含量和相关物质含量时使用。
【关键词】 HPLC法测定;盐酸莫西沙星;物质
作者单位:454000 焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院
莫西沙星(moxifloxacin)是德国的拜耳公司研发出来的
第四代的氟喹诺酮类超广谱抗生素，第三代的抗革兰阴性菌
的活性被它保留了下来，它的 8-甲氧基部分使抗革兰阳性菌
的活性得到了显著提高，尤其是使对厌氧菌的抗菌活性得到
了改善［1］。在 1999 年的时候德国首次上市，在 2002 年的时
候在我国得以上市，拜复乐是其商品名［2］。因为其能快速吸
收，且在体内的分布非常的广，较之于 β-内酰胺类抗生素，在
临床上治疗相当一部分的致病菌时莫西沙星的的疗效要更
好一些［3］。2009 年被英国药典收载的关于莫西沙星的质量
标准里需要逐一的控制多个相关物质，结构图详见下图 1，一
般使用的是 HPLC的分析方法，然而根据其标准借助于苯基
硅烷键合硅胶柱来测定，在对峰定位对照品里的五个杂质进
行分离时，分离度并不理想，所以笔者构建了通过常用的十
八烷基硅烷键合硅胶作填充剂的 HPLC 的分析方法，该方法
有较好的专属性，极易操作，能够在测定盐酸莫西沙星的含
量和相关物质含量时使用［4］。
·911·中国现代药物应用 2012 年 12 月第 6 卷第 23 期 Chin J Mod Drug Appl，Dec 2012，Vol． 6，No． 23