全 文 ：第４３卷第３期 东 北 师 大 学 报 （自 然 科 学 版 ） Ｖｏｌ．４３Ｎｏ．３
２０１１年９月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１１
［文章编号］１０００－１８３２（２０１１）０３－０１２２－０４
［收稿日期］ ２０１１－０４－１２
［基金项目］ 吉林省科技发展计划项目（２００７０９０２－０２）．
［作者简介］ 赵丽辉（１９６６—），女，博士，教授，主要从事生物化学和分子生物研究．
毛节缬草抗抑郁和抗肿瘤活性组分的研究
赵丽辉１，张一折２，杜 娟１，韩德明１，田 坚１，孙秀平１
（１．长春理工大学国际纳米光子学与生物光子学联合研究中心，吉林 长春１３００２２；
２．郑州大学生物工程系，河南 郑州４５０００１）
［摘 要］ 对毛节缬草乙醇渗漉提取的浓缩物和药材蒸馏获得的水提液中的活性组分进行了
分析．分别加水混悬后，通过小鼠体内实验检测了抗抑郁活性组分；醇提浓缩物加水混悬后用
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取、浓缩，各萃取组分通过 ＭＴＴ比色法测定了体外培养的
Ｈｅｌａ细胞、骨髓瘤细胞的增殖抑制率．实验结果表明：缬草水提取物具有抗抑郁的活性，缬草
乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及萃取后水相对细胞增殖抑制作用均不明显；而提
取物的氯仿萃取相抗肿瘤作用明显，且表现出一定的剂量相关性．
［关键词］ 缬草；抗肿瘤；抗抑郁；活性组分
［中图分类号］ Ｒ ２８４ ［学科代码］ ３６０·４０１０ ［文献标志码］ Ａ
缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．）为败酱科缬草属多年生野生草本植物，多数可作药用，根及根茎是
主要入药部位．在中国和欧洲，该属植物具有悠久的药用历史，其成分多种多样，且随着气候及生态环境
的不同而有所不同．缬草主要含环烯醚萜、倍半萜、生物碱和黄酮４大类型化学成分［１－２］，其中一种新类
型天然产物环烯醚酯类物质，经药理研究表明具有镇静作用，同时还具有细胞毒性和抗肿瘤等多种生物
活性［３－４］．本文对缬草的化学组分进行了抗抑郁和抗肿瘤活性组分活性研究，以为制备毒副作用小甚至
无毒副作用的新型抗抑郁、抗肿瘤药物提供理论支持．
目前治疗抑郁症、肿瘤的药物服后不仅有不良的反应，还可产生多种危害，长期服用，可引起依赖性
和耐受性，有的还具有成瘾性．这就迫切需要尽快开发研制出疗效确切，既能抑郁症、杀伤肿瘤细胞，且
毒副作用又小的国产抗抑郁症、抗肿瘤植物药［５］．中药抗抑郁症、抗肿瘤作用具有多靶点、多环节、多效
应的特点，可作用于治疗抑郁症、肿瘤发生、发展的多个环节；同时其毒副作用低，能提高机体免疫力，不
易产生耐药性，为近年来研究的热点［６－７］．缬草的活性成分也正是我们要筛选的抗抑郁症、抗肿瘤药物
之一．
１ 实验部分
１．１ 材料和试剂
乙醇溶液（９５％）购于北京化工厂；ＰＢＳ液（无钙、镁离子），０．５％ 胰蛋白酶，３％谷氨酰胺，培养液
（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％小牛血清），ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ，５ｍｇ／ｍＬ），甲瓒溶解液（１０％十二烷基硫酸钠），吐温８０等
试剂均购于鼎国生物技术有限公司；安乐片由四川琦云药业有限责任公司出品；Ｈｅｌａ细胞、骨髓瘤细胞，
本实验室保存．ＩＣＲ小鼠８０只（雌雄各半，体重１８～２２ｇ），由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供．
１．２ 缬草的提取
首先将缬草根粗粉，用１５倍 （质量）９５％乙醇渗漉提取，收集渗漉液，在７８℃以下减压回收乙醇，
得膏状物；另取缬草根加水蒸馏５ｈ，将药渣水相过滤、减压浓缩，得水提浓缩液［８］．
DOI:10.16163/j.cnki.22-1123/n.2011.03.018
第３期 赵丽辉，等：毛节缬草抗抑郁和抗肿瘤活性组分的研究
１．３ 动物实验
实验选取自主活动次数相近的小鼠８０只，随机分为８组，每组１０只，雌雄各半，分笼饲养．其中：
Ⅰ组为阴性对照组，每日以生理盐水０．０２ｍＬ／ｇ灌胃；
Ⅱ组为阳性对照组，每日以抗抑郁药安乐片２０ｍｇ／ｋｇ灌胃给药；
Ⅲ，Ⅳ组分别以缬草醇提取物１００ｍｇ／ｋｇ以及２００ｍｇ／ｋｇ灌胃给药；
Ⅴ，Ⅵ组分别以缬草水提取物１００ｍｇ／ｋｇ以及２００ｍｇ／ｋｇ灌胃给药；
Ⅶ组以缬草挥发油０．５μＬ／ｇ灌胃给药．
每个对照组均需另加剂量为１０ｍＬ／Ｌ的乳化剂吐温８０，以利于溶解．连续给药１０ｄ．
１．４ 缬草乙醇提取物的萃取
称取缬草乙醇提取物５００ｇ，分３份分别混悬于５００ｍＬ水中，分别用适量的氯仿、乙酸乙酯、正丁
醇进行萃取，各萃取３次．合并萃取液，用旋转蒸发仪依次回收萃取液，得氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物
和萃取后剩余水相．
１．５ ＭＴＴ法
将传代肿瘤细胞悬液离心后，用含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０重悬配成单个细胞悬液，调整细胞
悬液浓度，收集对数期细胞，每孔加入１００μＬ，铺板使待测细胞密度为１ ０００～１０ ０００个／孔，随即加入
不同浓度的待试药液．阳性对照组加入５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），溶剂组加０．９％ ＮａＣｌ溶液，容积均为２０μＬ．
培养液中药物终浓度分别为０．０５，０．１，０．１５，０．０２ｇ／Ｌ．３７℃，５％ ＣＯ２ 及饱和湿度条件下培养５ｄ后，
每孔加入 ＭＴＴ溶液２０μＬ，孵育４ｈ后每孔加入ＤＭＳＯ １５０μＬ，在酶联免疫检测仪５７０ｎｍ（６３０ｎｍ校
准）处测量各孔的吸光值（Ｄ（５７０）值）．
配制浓度为５ｍｇ／ｍＬ的 ＭＴＴ：称取 ＭＴＴ ０．５ｇ，溶于１００ｍＬ的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）或无酚红的培
养基中，用０．２２μｍ滤膜过滤以除去溶液里的细菌，４℃避光保存．用酶标仪检测结果，为了保证实验结
果的线性，ＭＴＴ的吸光度最好在０～０．７范围内，用酶联免疫检测仪在４９０ｎｍ波长处测定其光吸收
值，可间接反映活细胞数量［９］．
２ 结果与分析
２．１ 缬草提取物对小鼠强迫游泳不动时间的影响
动物持续灌胃给药１１ｄ，至第１１天时，给药３０ｍｉｎ后，将小鼠放入水深为１０ｃｍ、高２０ｃｍ、直径
１０ｃｍ的圆柱形玻璃缸中，每缸一只，水温２５℃，小鼠游泳２ｍｉｎ后，立即开始观察，观察持续５ｍｉｎ，记
录此５ｍｉｎ内小鼠在水中停止挣扎、或呈漂浮状态、或仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面的持续
时间（不动时间），结果见表１．
表１ 提取物对小鼠游泳不动时间的影响
组别 给药量 例数 ５ｍｉｎ内计数／秒
Ⅰ 生理盐水０．０２ｍＬ／ｇ １０ ２０７．２０±１６．６２
Ⅱ 抗抑郁药安乐片２０ｍｇ／ｋｇ １０ １８２．１０±１８．０８＊
Ⅲ 缬草醇提取物１００ｍｇ／ｋｇ １０ ２０８．４０±１８．８５
Ⅳ 缬草醇提取物２００ｍｇ／ｋｇ １０ １８９．４０±２１．３８＊
Ⅴ 缬草水提取物１００ｍｇ／ｋｇ １０ ２０４．８０±１７．４０
Ⅵ 缬草水提取物２００ｍｇ／ｋｇ １０ １８６．４０±１９．１３＊
注：Ⅲ，Ⅴ与Ⅰ相比，Ｐ＞０．０５；Ⅱ，Ⅳ，Ⅵ，Ⅶ与Ⅰ相比，Ｐ＜０．０５．
表１显示，Ⅲ，Ⅴ与Ⅰ（阴性对照组）比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；Ⅱ，Ⅳ，Ⅵ，Ⅶ与Ⅰ比较有显著性
差异（Ｐ＜０．０５）．由此可见，缬草醇提物低剂量组、水提物低剂量组对小鼠强迫游泳不动时间无显著影
响；缬草醇提物高剂量组、水提物高剂量组均能缩短小鼠强迫游泳不动时间．
２．２ 缬草提取物对小鼠悬尾不动时间的影响
动物灌胃给药１２ｄ，至第１２天给药３０ｍｉｎ后，测悬尾不动时间：将小鼠尾部后１／３处用铁夹固定，
悬吊于铁架台上，使其头部向下悬挂，出现不动时用秒表计时，累计６ｍｉｎ内不动时间，结果见表２．
表２显示，Ⅲ，Ⅴ与Ⅰ（阴性对照组）比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；Ⅱ，Ⅳ，Ⅵ，Ⅶ与Ⅰ比较有显著性
差异（Ｐ＜０．０５）．由此可见，缬草醇提物低剂量组、水提物低剂量组对小鼠悬尾不动时间无显著影响；缬
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东 北 师 大 学 报 （自 然 科 学 版 ） 第４３卷
草醇提物高剂量组、水提物高剂量组均能缩短小鼠悬尾不动时间．
表２ 提取物对小鼠悬尾不动时间的影响
组别 给药量 例数 ６ｍｉｎ内计数／秒
Ⅰ 生理盐水０．０２ｍＬ／ｇ １０ １１６．５０±２０．１０
Ⅱ 抗抑郁药安乐片２０ｍｇ／ｋｇ １０ ７５．４０±２０．３６＊
Ⅲ 缬草醇提取物１００ｍｇ／ｋｇ １０ １０４．７０±２１．７８
Ⅳ 缬草醇提取物２００ｍｇ／ｋｇ １０ ８２．１０±２４．１８＊
Ⅴ 缬草水提取物１００ｍｇ／ｋｇ １０ １０５．４０±２５．８０
Ⅵ 缬草水提取物２００ｍｇ／ｋｇ １０ ８０．２０±２２．７６＊
注：Ⅲ，Ⅴ与Ⅰ相比，Ｐ＞０．０５；Ⅱ，Ⅳ，Ⅵ，Ⅶ与Ⅰ相比，Ｐ＜０．０５．
综合表１、表２可知，缬草醇提物高剂量组、水提物高剂量组能缩短小鼠强迫游泳及悬尾不动时间，
有抗抑郁作用，具有较大的研究价值．
２．３ 缬草乙醇提取物抗肿瘤实验
显微镜下观察，培养后期溶剂组肿瘤细胞活跃增殖，全视野密集均匀分布，５－Ｆｕ和醇提氯仿层萃取
物的肿瘤细胞明显稀疏，部分细胞破碎坏死，尤以大剂量组为甚．加入 ＭＴＴ后，溶剂组镜下可见大量放
射丛状结晶，５－Ｆｕ和醇提氯仿层萃取物组的结晶随浓度加大肿瘤细胞明显减少．各试剂组在不同浓度
下的光密度值见表３及表４．
表３ ＭＴＴ比色法测定缬草提取物对Ｈｅｌａ细胞的增殖影响
样品
提取物
质量浓度／（ｇ／Ｌ）
Ｄ（５７０）
Ⅰ（溶剂组） ０．０５ ２．４９０±０．２８５
０．１０ ２．６５０±０．２７８
０．１５ ２．４６９±０．１６７
０．２０ ２．３４６±０．２０８
Ⅱ（５－Ｆｕ组） ０．０５ １．５５０±０．２０１＊
０．１０ １．３９６±０．１１５＊
０．１５ １．０９１±０．１２１＊
０．２０ ０．９１９±０．０８９＊
Ⅲ（氯仿萃取相） ０．０５ １．６９４±０．１４０＊
０．１０ １．４５５±０．２９２＊
０．１５ １．２３６±０．１９５＊
０．２０ １．００７±０．１３７＊
Ⅳ（乙酸乙酯相） ０．０５ １．９０５±０．１１０
０．１０ ２．０９３±０．２３１
０．１５ １．９９７±０．１７７
０．２０ ２．０１９±０．１２６
Ⅴ（正丁醇相） ０．０５ ２．１９２±０．２９８
０．１０ ２．３２３±０．２２４
０．１５ ２．１２８±０．２０５
０．２０ ２．２３７±０．１６７
Ⅵ（萃取后水相） ０．０５ ２．４６１±０．２３３
０．１０ ２．２７９±０．２８５
０．１５ ２．２９８±０．１９１
０．２０ ２．１１１±０．１８１
注：Ⅱ，Ⅲ与Ⅰ相比，Ｐ＜０．０５；Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ与Ⅰ相比，Ｐ＞０．０５；
Ⅲ与Ⅱ相比，Ｐ＞０．０５．
表４ ＭＴＴ比色法测定缬草提取物对骨髓瘤细胞的增殖影响
样品
提取物
质量浓度／（ｇ／Ｌ）
Ｄ（５７０）
Ⅰ（溶剂组） ０．０５ ２．１７５±０．１１８
０．１０ ２．０６３±０．１００
０．１５ １．９４９±０．０８５
０．２０ １．８６２±０．０５２
Ⅱ（５－Ｆｕ组） ０．０５ １．３１７±０．１００＊
０．１０ １．０５５±０．１１２＊
０．１５ ０．９１６±０．０９９＊
０．２０ ０．７９８±０．０６６＊
Ⅲ（氯仿萃取相） ０．０５ １．４４７±０．０６１＊
０．１０ １．４５５±０．２９２＊
０．１５ ０．９２７±０．１２７＊
０．２０ ０．８５５±０．０９４＊
Ⅳ（乙酸乙酯相） ０．０５ １．９０５±０．１１０
０．１０ １．９９０±０．０８７
０．１５ １．９２１±０．０９８
０．２０ １．８８６±０．１３０
Ⅴ（正丁醇相） ０．０５ ２．０４０±０．０６７
０．１０ ２．００５±０．０６３
０．１５ ２．０１４±０．０７０
０．２０ １．９４４±０．０９０
Ⅵ（萃取后水相） ０．０５ ２．１２１±０．１０７
０．１０ ２．０４９±０．０７８
０．１５ ２．０１０±０．１１３
０．２０ １．９９４±０．１１９
注：Ⅱ，Ⅲ与Ⅰ相比，Ｐ＜０．０５；Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ与Ⅰ相比，Ｐ＞０．０５；
Ⅲ与Ⅱ相比，Ｐ＞０．０５．
从表３可以看出，缬草乙醇提取物氯仿萃取相与溶剂组（阴性对照组）比较有显著性差异（Ｐ＜
０．０５）；缬草乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及萃取后水相与溶剂组比较无显著性差异（Ｐ＞
０．０５）；缬草乙醇提取物氯仿萃取相与５－Ｆｕ组（阳性对照组）比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）．可见缬草乙
醇提取物氯仿萃取相具有抗 Ｈｅｌａ细胞活性．
从表４可以看出，缬草乙醇提取物氯仿萃取相与溶剂组（阴性对照组）比较有显著性差异（Ｐ＜
０．０５）；缬草乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及萃取后水相与溶剂组比较无显著性差异（Ｐ＞
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第３期 赵丽辉，等：毛节缬草抗抑郁和抗肿瘤活性组分的研究
０．０５）；缬草乙醇提取物氯仿萃取相与５－Ｆｕ组（阳性对照组）比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）．可见缬草乙
醇提取物氯仿萃取相具有抗骨髓瘤细胞活性．
３ 讨论
小鼠强迫游泳不动实验和小鼠尾悬吊实验属于行为绝望实验，被广泛用于抗抑郁药的筛选和评
价［１０－１１］．本研究采用了这两种抗抑郁动物模型，以观察缬草乙醇提取物、缬草水提取物对小鼠抑郁状态
行为的影响，结果显示缬草醇提物、水提物均不同程度地缩短了小鼠不动时间，其中缬草水提物抗抑郁
作用显著．缬草醇提物高剂量组、水提物高剂量组能缩短小鼠强迫游泳及悬尾不动时间，有抗抑郁作用，
具有极大的研究价值．
采用 ＭＴＴ比色法［１２－１３］，以人体宫颈癌细胞、骨髓瘤细胞为靶细胞，对缬草乙醇提取物各萃取相的
抑制肿瘤细胞增殖的作用进行了检测，结果显示缬草乙醇提取物的乙酸乙酯萃取层、正丁醇萃取层和剩
余水层对体外培养的宫颈癌细胞、骨髓瘤细胞增殖抑制作用均不明显；氯仿萃取相抗肿瘤作用显著，剂
量在０．０５～０．２０ｇ／Ｌ之间抑制作用明显．
［参 考 文 献］
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［２］ 陈磊，秦路平，郑汉臣．缬草的化学成分、植物资源和药理活性［Ｊ］．药学实践杂志，２０００，１８（５）：２７７－２７９．
［３］ 张书勤，薛存宽，何学斌，等．缬草环烯醚萜酯体外抗肿瘤作用的实验研究［Ｊ］．医药导报，２００８，２７（１）：２７－２９．
［４］ 张振学，姚新生．药用植物缬草的生物活性物质研究进展与开发［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２０００，１７（３）：２２２－２２５．
［５］ 吴敏．中医药防治抑郁症的研究进展［Ｊ］．中医药导报，２００６，１２（５）：８２．
［６］ 梁红，钟振国．中药抗肿瘤作用的途径和作用靶位点的研究进展［Ｊ］．中医中药，２００６，２４（１１）：２０８６－２０８８．
［７］ 豆长明．中药抗肿瘤作用机制研究态势评析［Ｊ］．中医药学刊，２００３，２１（３）：３６１．
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［Ｊ］．Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ，２００３，２３（３）：１８６－１９２．
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Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓｉｅ
ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｏｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．
ＺＨＡＯ Ｌｉ－ｈｕｉ １，ＺＨＡＮＧ Ｙｉ－ｚｈｅ２，ＤＵ Ｊｕａｎ１，ＨＡＮ Ｄｅ－ｍｉｎｇ１，ＴＩＡＮ Ｊｉａｎ１，ＳＵＮ Ｘｉｕ－ｐｉｎｇ１
（１．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｉｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｎａｎｏｐｈｏｔｏｎｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎｉｃｓ，
Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２２，Ｃｈｉｎａ；
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ｓｕｒｐｌｕｓ ｗａｔｅｒ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ ｈａｓ ｎｏｔ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．
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（责任编辑：方 林）
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