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啤酒花对朱砂莲所致马兜铃酸肾病的拮抗作用



全 文 :2013年 第14卷 第3期013 5
[作者简介]庞俊伟,助教,在读硕士
[收稿日期]2013-04-11
啤酒花对朱砂莲所致马兜铃酸肾病的拮抗作用
庞俊伟
(山西中医学院,山西 太原 030024)
摘要 目的:观察啤酒花对朱砂莲所致肾毒性的拮抗作用。方法:将 120只 SD大鼠随机分为空白组,朱砂莲大、中、小剂
量组,干啤酒花合朱砂莲高、中、低剂量组以及鲜啤酒花合朱砂莲高、中、低剂量组 10组,除空白对照组灌服等量生理盐
水,其余全部灌服相应药液,每日 1次,连续 60 d,观察各组大鼠碱性磷酸酶(AKP)、血肌酐(Scr)、溶菌酶(LYS)、β2-微
球蛋白(β2-MG)含量等生化指标水平的变化。结果:干啤酒花配伍朱砂莲各剂量组 AKP、Scr、β2-MG、LYS含量与朱砂莲
高剂量组比较均明显下降。鲜啤酒花配伍朱砂莲各剂量组与朱砂莲高剂量组比较 AKP含量明显下降。鲜啤酒花配伍朱
砂莲高、中剂量组与朱砂莲高剂量组 β2-MG含量比较明显下降(P<0.05)。与鲜啤酒花配伍朱砂莲相应的各剂量组比较,
干啤酒花配伍朱砂莲相对应的各剂量组 AKP、Scr、β2-MG、LYS含量均有不同程度的降低。结论:啤酒花在一定程度上能
够缓解朱砂莲的肾毒性。
关键词 啤酒花;朱砂莲;肾毒性;拮抗
中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1671-0258(2013)05-0019-03
朱砂莲辛、寒,味苦,为马兜铃科马兜铃属植物
朱砂莲的根茎,具有清热解毒、消肿止痛之功效[1]。
朱砂莲中含有毒性成分是马兜铃酸,可以引起肾功
能损伤。马兜铃酸引起的肾脏损伤主要是由于引起
肾小管-间质的损伤导致溶菌酶(LYS)、血肌肝(Scr)、
β2-微球蛋白(β2-MG)含量明显增高。啤酒花性平,
味苦,为荨麻目大麻科葎草属植物啤酒花的花序,具
有能健胃消食、利尿安神之功效。《食物中药与便方》
中记载饮用啤酒花球果泡制成的茶汁能辅助治疗肾
脏疾病[2]。本研究通过中医理论指导下的方药配伍
减毒方法,测定尿中极微量的蛋白和酶的变化,观察
朱砂莲与啤酒花不同配比对马兜铃酸肾毒性的拮抗
作用,以探讨其药理作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 近交系 SD大鼠,雌雄各半,170
g~230 g,由中国中医科学院实验动物研究所提供,
合格证号:SCXK(京)2011-0002。饲养环境通风良
好,饲养温度 25 ℃~28 ℃,湿度为 70%,自由饮水、
进食。
1.1.2 药物与试剂 朱砂莲购自新疆阿合奇县人民
医院药剂科,由山西药科职业技术学院通过薄层鉴
别和性状鉴别确认系马兜铃科植物朱砂莲,啤酒花
购自新疆阿合奇县人民医院药剂科,经鉴定为正品。
血清肌酐测定试剂盒(上海生物制品研究所提供,批
号:20120423),β2-微球蛋白(宁波瑞源生物科技有
限公司提供,批号:20120711),碱性磷酸酶(郑州兰森
生物技术有限公司提供,批号:20120206),溶菌酶(上
海西唐生物科技有限公司提供,批号:20120522)。
1.1.3 实验仪器 MS4002SDR 精密天平(梅特勒-
托利多仪器公司生产),TDL-5-A离心机(深圳市三
利化学仪器生产),7170A型全自动生化分析仪(日
本 Hitachi公司)。
1.2 实验方法
1.2.1 朱砂莲药液制备 朱砂莲加冷水浸泡 30
min,初用强火加热煮沸,沸后用小火保持 30 min,
过滤,药渣复煎,合并滤液,60 ℃~100 ℃水浴浓缩至
1 g/mL,120 ℃湿热灭菌后装瓶冷藏备用,使用前适
当加热。
1.2.2 朱砂莲配伍啤酒花药液制备 制备方法同朱
砂莲药液的制备,二者按照如下比例配伍后煎熬浓
缩至 1 g/mL,120 ℃湿热灭菌后装瓶冷藏备用,使用
前适当加热。干啤酒花与朱砂莲:高剂量为 10∶1,中
剂量为 5∶1,低剂量为 2∶1;鲜啤酒花与朱砂莲:高剂
量为 100∶1;中剂量为 50∶1;低剂量为 20∶1。
1.2.3 分组及给药 SD大鼠适应性饲养(实验室)1
w后,按照体重、雌雄各半随机分为朱砂莲高剂量组
(A组)、朱砂莲中剂量组(B组)、朱砂莲低剂量组(C
组)、干啤酒花配朱砂莲高剂量组(D组)、干啤酒花
配朱砂莲中剂量组(E组)、干啤酒花配朱砂莲低剂
量组(F组)、鲜啤酒花配朱砂莲高剂量组(G组)、鲜
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表 1 各组大鼠体重、生化指标比较 (x±s)
注:与 A组比较,1)P<0.05;与 G组比较,2)P<0.05;与 H组比较,3)P<0.05;与 I组比较,4)P<0.05
组别 n 体重(g)
A 9 210.735±75.973
B 8 299.658±67.5321)
C 7 296.847±37.5471)
D 7 301.210±45.2141)
E 7 294.245±47.2571)
F 7 284.125±53.2111)
G 7 308.521±50.2031)
H 7 288.451±59.4121)
I 8 289.532±64.2541)
J 7 295.300±62.3091)
AKP含量(μ/L) β2-MG含量(μg/L)
20.578±7.173 0.22±0.11
15.647±7.325 0.20±0.08
10.478±3.4751) 0.19±0.031)
11.102±2.1421)2) 0.18±0.051)2)
14.452±3.5711)3) 0.19±0.011)3)
13.252±3.1211) 0.16±0.031)4)
9.521±1.0311) 0.18±0.011)
10.510±2.1421) 0.19±0.041)
12.936±4.5451) 0.21±0.01
10.002±2.0921) 0.15±0.031)
Scr含量(μmol/L) LYS含量(μg/L)
105.84±4.17 0.24±0.07
103.12±7.02 0.16±0.121)
100.20±8.45 0.15±0.111)
94.24±4.781)2) 0.14±0.101)2)
97.48±13.511)3) 0.13±0.051)3)
71.02±11.211)4) 0.11±0.131)4)
100.51±13.32 0.11±0.131)
110.15±8.472) 0.21±0.07
102.34±9.872) 0.23±0.08
100.50±8.23 0.17±0.061)
啤酒花配朱砂莲中剂量组(H组)、鲜啤酒花配朱砂
莲低剂量组(I组)、空白组(J组)10组,每组 12只。
各组均精饲料喂养、自由饮水。根据现在药物的一
般用量,以古人用量的 1/3作为现在成人的常用剂
量,并根据成人 1 d用量按大鼠的体重体表面积换算
所得剂量,A、B、C组分别按 10 g/(kg·d)、5 g/(kg·d)、
1 g/(kg·d)给药,其余各组均按照 10 g/(kg·d)给药,
每天灌胃 1次,每次 5 mL,连续 60 d。空白组以等量
生理盐水灌胃。
1.2.4 标本采集与指标测定 实验开始时对各组大
鼠称重,并定期称定体重。60 d后,以上 10组大鼠
均在空腹时用代谢笼称重。取尿液,股动脉取血后处
死,留取标本作血尿检测。碱性磷酸酶(AKP)、血肌
酐(SCr)、溶菌酶(LYS)、β2微球蛋白(β2-MG)的测
定依照试剂盒说明进行。
1.3 统计学方法
结果采用 SPSS17.0统计软件分析,数据采用均
数±标准差(x±s)来表示,组间差异采用方差分析检
验,若 P<0.05则认为差异具有统计学意义。
2 结 果
与朱砂莲高剂量组比较,其余各组大鼠体重明
显升高(P<0.05),AKP含量明显降低,LSY 和 β2-
MG 含量均有不同程度的降低(P<0.05),除鲜啤酒
花配朱砂莲中剂量组升高外其余各组均有不同程度
的降低。与空白组比较,朱砂莲高剂量组、朱砂莲中
剂量组 Scr、β2-MG含量显著升高,LYS含量虽然升
高,但差异无统计学意义。然而朱砂莲低剂量组与
空白组 Scr、β2-MG、LYS 含量比较差异无统计学意
义。说明朱砂莲中高剂量组能引起大鼠肾脏损伤。
经配伍啤酒花后,干啤酒花配伍朱砂莲各剂量组
AKP、Scr、β2-MG、LYS含量与朱砂莲高剂量组比较
均明显下降。鲜啤酒花配伍朱砂莲各剂量组与朱砂
莲高剂量组比较 AKP含量明显下降。而鲜啤酒花配
伍朱砂莲高、低剂量组 Scr含量较朱砂莲高剂量组
有所降低,鲜啤酒花配伍朱砂莲中剂量组 Scr含量
较朱砂莲高剂量组有所升高,但差异比较无统计学
意义;鲜啤酒花配伍朱砂莲各剂量组与朱砂莲高剂量
组 LSY含量比较有所下降,但差异无统计学意义;鲜
啤酒花配伍朱砂莲高、中剂量组与朱砂莲高剂量组
β2-MG含量比较明显下降(P<0.05),但鲜啤酒花配伍
朱砂莲低剂量组与朱砂莲高剂量组 β2-MG含量比较
有所下降,但差异无统计学意义。说明啤酒花在一定
程度上可以缓解马兜铃酸肾病导致的津液代谢障碍,
达到预防和延缓马兜铃酸肾病的发生以及减轻肾脏
功能损害的作用。与鲜啤酒花配伍朱砂莲相应的各剂
量组比较,干啤酒花配伍朱砂莲相对应的各剂量组
AKP、Scr、β2-MG、LYS含量均有不同程度的降低。说
明干啤酒花在一定程度上能够减轻朱砂莲所致肾脏
的毒性,而且效果优于鲜啤酒花。结果见表 1。
3 讨 论
中医学认为,津液在体内的代谢主要依靠肺、
脾、肾三脏的功能。《素问经脉别篇》曰:“饮入于胃,
游溢精气,上输于脾;脾气散精,上归于肺,通调水道,
下输膀胱;水精四布,五经并行。”肺、脾、肾相互协调,
共同维持人体水液的生成、输布与排泄,对于津液的
清浊升降运动起着主导作用。肺的宣发肃降、脾的健
运,肾的蒸腾气化之功能协调,则津液代谢正常,马兜
铃酸就能及时排出体外,不在肾脏蓄积,对肾脏的损
害,对马兜铃酸所致肾病具有一定的防治作用。
参考文献
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[2]叶桔泉. 食物中药与便方[M]. 南京:江苏科学出版社,1971:118-
119.
(下转第 23页)
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热休克蛋白(HSPs)是保护细胞的物质基础 [6],
广泛存在于所有原核和真核细胞内,一般分为 4个
家族,其中 HSP70 是重要的一族。在应激状态下
HSP70 大量表达,它能恢复或清除细胞内变性的蛋
白质,从而稳定细胞结构,增强细胞对损害的耐受程
度,维持细胞的功能,提高细胞生存率,其机制主要
包括分子伴侣作用、抗细胞凋亡以及抗氧化作用等。
常小荣等[7]观察艾灸足三里和梁门穴预处理对应激
性溃疡大鼠胃黏膜 HSP70表达的影响,结果显示艾
灸组大鼠胃黏膜 HSP70 表达较模型组和艾灸非穴
组明显增强,证实了艾灸保护胃黏膜与 HSP70 的诱
导有关。诱导合成的 HSP70 促进细胞内蛋白质的合
成、折叠和装配,使细胞从损伤中恢复[8]。本实验研
究显示,电针腧穴“胃病方”诱导 HSP70表达上调,
减轻胃黏膜损伤,有明显的保护胃黏膜作用。
胃黏膜损伤时,白细胞被趋化、激活,局部组织
炎细胞浸润,中性粒细胞在吞噬过程中释放溶酶体
酶、氧自由基(OFR)等,这些物质介导组织损伤。
OFR作用于细胞膜,形成过氧化脂质(LPO),LPO降
解后产生丙二醛(MDA),MDA的含量反映组织过氧
化的程度[9],是组织细胞损伤的指标。Liu M等[10]发
现,艾灸足三里等穴可使应激性溃疡大鼠胃黏膜损
伤指数明显下降、MDA含量降低,从而保护胃黏膜。
本研究结果,与模型组比较,治疗组胃黏膜损伤减
轻、黏膜组织中炎细胞浸润明显减少,提示电针腧穴
“胃病方”可通过抑制炎症反应、减少自由基产生而
发挥抗胃黏膜氧化损伤作用。
针刺通过经络腧穴的作用,诱导 HSP70表达,
控制氧化损伤,对防治胃黏膜病变将产生重要影响。
参考文献
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(上接第 20页)
Antagonism of Hops to Renal Toxicity Induced by Radix
Aristolochiae Kaempferi
Pang Junwei
(Shanxi College of TCM,Taiyuan Shanxi 030024)
Abstract Objective:To observe antagonism of hops to the renal toxicity induced by Radix aristolochiae kaempferi.
Method:120 SD rats were randomly divided into blank group;large,medium and small dosage of Radix aristolochiae
kaempferi groups;large,medium and small dosage of Radix aristolochiae kaempferi combined with dry hops groups and
large,medium and small dosage of Radix aristolochiae kaempferi combined with fresh beer groups.The rats in blank group
were taken isometric physiological saline,the rats in other groups were administrated by corresponding medicine,for 60
days successively. AKP,Scr,LYS,β2 -microglobulin biochemical indexes were examined. Result:Compared with high
dosage of Radix aristolochiae kaempferi group,contents of AKP、Scr、β2-MG、LYS were decreased in Radix aristolochiae
kaempferi combined with dry hops groups;β2-microglobulin biochemical was decreased in large,medium dosage of Radix
aristolochiae kaempferi combined with fresh beer groups(P<0.05). AKP was lower in large,medium,small dosage of Radix
aristolochiae kaempferi combined with fresh beer groups than that in high dosage of Radix aristolochiae kaempferi group.
Conclusion:Hops can alleviate the renal toxicity of Radix aristolochiae kaempferi in a certain extent.
Key words hops;Radix aristolochiae kaempferi;renal toxicity;antagonism
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