全 文 ：董蒙蒙，喻 樊，刘 佳，等． 中华补血草 5 种黄酮类化合物抗氧化和抗肿瘤活性的比较［J］． 江苏农业科学，2015，43(2):297 － 299．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2015． 02． 097
中华补血草 5 种黄酮类化合物抗氧化
和抗肿瘤活性的比较
董蒙蒙1，喻 樊1，刘 佳2，汤新慧1，高 静2，徐永新1
(1．盐城师范学院生命科学与技术学院，江苏盐城 224002;2．江苏大学药学院，江苏镇江 212013)
摘要:比较研究 5 种中华补血草黄酮类化合物———异鼠李素、槲皮素、异槲皮苷、木樨草素、芹菜素的体外抗氧化
和抗肿瘤活性。运用 MTT试验，检测 5 种中华补血草黄酮类化合物对 HepG2 和 Hela肿瘤细胞体外增殖的影响;运用
DPPH自由基清除试验，检测中华补血草黄酮的体外抗氧化活性。研究结果可知，5 种中华补血草黄酮类化合物均显
示一定抗氧化和抗肿瘤活性，但其活性强弱存在差异。本试验条件下其抗肿瘤活性由强到弱的顺序为:木樨草素 ＞槲
皮素 ＞异鼠李素、芹菜素 ＞异槲皮苷;体外抗氧化能力由强到弱的顺序为:槲皮素 ＞木樨草素 ＞异鼠李素 ＞芹菜素 ＞
异槲皮苷。结果表明，中华补血草黄酮类化合物木樨草素、槲皮素、异鼠李素、芹菜素等为中华补血草抗肿瘤作用的重
要活性成分，抗肿瘤作用与其抗氧化活性有关。
关键词:中华补血草;黄酮;抗肿瘤;抗氧化
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2015)02 － 0297 － 03
收稿日期:2014 － 10 － 22
基金项目:国家自然科学基金(编号:81102817);国家级大学生创新
创业训练计划(编号:201210324004);江苏省高等学校大学生实践
创新训练计划(编号:2012JSSPITP2373);江苏省滩涂生物资源与
环境保护重点建设实验室开放项目(编号:JLCBE10006)。
作者简介:董蒙蒙(1991—)，女，江苏连云港人，主要从事植物药药理
药化学习和研究。E － mail:1249050523@ qq． com。
通信作者:汤新慧，博士，教授，主要从事植物药药理药化研究。Tel:
(0515)88233191;E － mail:xinhuitang@ sina． com。
白丹花科补血草属植物中华补血草［Limonium sinense
(Girard)Kuntze］，别称匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等，为
多年生泌盐草本植物，喜生于盐渍化的低洼湿地上，主要分布
于我国东北、华北、华东等滨海地区［1 － 2］。据记载，中华补血
草各部位均可入药，有清热解毒、止血散瘀、祛风消炎、抗癌、
抗衰老的功效。民间常用其根治疗肝癌，用叶治疗胃溃疡和
胃癌，用花治疗宫颈癌及各种出血［3 － 4］。现代药理学研究发
现，该植物具有抗氧化、护肝、抗病毒、抑制肿瘤细胞体外增殖
等多种药理活性［5 － 11］。笔者研究显示，该植物根醇提物安全
低毒，能增强机体免疫力，对抗化疗药物 5 － Fu的免疫抑制作
用，且其本身也具有显著抗肿瘤活性［12 － 13］。
中华补血草化学成分十分丰富，含有鞣质、黄酮类、生物
碱、多糖、萜类、脂肪族化合物、氨基酸、矿物质、维生素
等［5，14 － 16］。特别是中华补血草总酚含量很高，占根提取物的
55． 55%，主要包括黄酮类、鞣质和酚酸等，其中黄酮类含量高
达 24． 60%［8］，目前，已在中华补血草提取物中发现槲皮素、
异槲皮苷、木樨草素、芹菜素、北美圣草素、高北美圣草素、杨
梅树皮素及其苷类等 20 多种黄酮类化合物［15，17 － 18］。已有研
究证实，黄酮类化合物具有广泛的生物活性和多种药理作用，
如抗氧化、抗炎、抗诱变、抑制肿瘤形成与生长等。近年来，关
于黄酮类化合物在肿瘤、心脑血管疾病等方面的应用研究已
经比较深入，加上其低毒性的特点，已成为天然药物和功能性
食品研发的热点之一。近期有学者研究发现，中华补血草总
黄酮类化合物具有显著抑制肿瘤细胞体外增殖作用［19］，其同
属植物二色补血草中分离得到的黄酮类化合物也具有显著抗
肿瘤活性［20］，黄酮类化合物可能是该属植物抗肿瘤作用的活
性成分。
本研究采用 MTT(四甲基噻唑蓝)法，研究中华补血草中
5 种含量丰富的黄酮类化合物———异鼠李素、槲皮素、异槲皮
苷、木樨草素、芹菜素［15，18］对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用，
并运用自由基清除试验比较其体外抗氧化活性，以期为中华
补血草抗肿瘤作用的物质基础研究和该植物的进一步开发利
用提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 主要仪器 Spectra Max190 酶标仪，美国 Molecular
Devices公司生产;Thermo Form 311 型 CO2 培养箱，美国 Ther-
mo Scientific 公司生产;TS100 型倒置光学显微镜，日本 Nikon
公司生产;Ｒ205B型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂生产;
MIS － 3020 全自动高压灭菌器，日本三洋电机公司生产。
1． 1． 2 试剂 MTT(四甲基噻唑蓝)，德国 Sigma 公司生产;
胎牛血清、胰蛋白酶，美国 Hyclone 公司产品;DMEM 培养基，
美国 Gibco公司产品;其他试剂均为国产分析纯。
1． 1． 3 细胞株 人肝癌 HepG2 细胞株、人宫颈癌 Hela 细胞
株，均购自中国科学院上海细胞生物学研究所。
1． 2 方法
1． 2． 1 细胞培养及分组 取处于对数生长期 、状态良好的
HepG2 或 Hela细胞，加入适量胰蛋白酶消化液，使贴壁细胞
脱落，用含 10%胎牛血清的 DMEM 培养液配制细胞悬液，计
数，并将细胞密度调整至 4． 0 × 104 个 /mL。取细胞悬液接种
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于 96 孔板，100 μL /孔，置恒温 CO2 培养箱中，在 37 ℃、5%
CO2 及饱和湿度条件下培养。24 h 后，将上述 96 孔板中的
HepG2 或 Hela细胞分组，吸弃各孔内培养液，分别加入 6． 25、
12． 50、25． 00、50． 00、100． 00 μmol /L 异鼠李素、槲皮素、异槲
皮苷、木樨草素、芹菜素，20 μmol /L 5 － Fu(阳性对照)，每组
设 4 个平行孔，并设阴性对照组(细胞培养液)、空白组
(DMEM细胞悬液)，给药后继续培养。
1． 2． 2 MTT试验 按“1． 2． 1”节中方法在肿瘤细胞中加入 5
种中华补血草黄酮类化合物孵育 48 h 后，吸弃孔内培养液，
加入无血清培养基 100 μL，MTT(5． 0 g /L)，20 μL /孔，37 ℃
孵育 4 h。吸弃孔内培养液，加入 MTT(1 g /L)，100 μL /孔，继
续培养 4 h，终止培养。吸弃孔内培养液，加入 DMSO ，
100 μL /孔，振荡使蓝紫色结晶物充分溶解，用空白组调零，置
酶标仪 570 nm波长处测定各孔吸光度(D570 nm)，记录结果并
计算样品的抑制率:抑制率 =(1 － D1 /D0)× 100%。式中:D1
为供试样品的吸光度;D0 为阴性对照的吸光度。
1． 2． 3 DPPH 自由基清除试验 向 96 孔板中分别加入
100 μL 含不同浓度异鼠李素、槲皮素、异槲皮苷、木樨草素、芹
菜素、维生素 C(阳性对照)的甲醇溶液，再分别加入 100 μL
0． 2 mmol /L DPPH 甲醇溶液，各化合物实际终浓度分别为
6. 25、12． 50、25． 00、50． 00、100． 00、200． 00 μmol /L，混合均
匀，室温下避光反应 30 min，于 517 nm 波长处测定吸光度，记
为 Di;同时测定不加 DPPH 的样品空白吸光度(Dj)和加 DP-
PH 但不加样品(以样品溶解液替代)的吸光度(Dk)。自由基
清除率计算公式如下:清除率 =［1 －(Di － Dj)/Dk］× 100%。
1． 2． 4 统计分析 所有试验均进行 3 次平行试验(n = 3)，
使用 SPSS 11． 0 统计软件进行数据分析，组间比较采用 t 检
验，P ＜ 0． 05 为有统计学意义。
2 结果与分析
2． 1 中华补血草 5 种黄酮类化合物对离体培养的 HepG2 细
胞增殖的影响
中华补血草黄酮类化合物对离体培养的 HepG2 细胞增
殖的影响见图 1。5 种补血草黄酮类化合物中异鼠李素、槲皮
素、木樨草素、芹菜素在 6． 25 ～ 100． 00 μmol /L 浓度范围内，
对 HepG2 肿瘤细胞体外增殖均显示不同程度的抑制活性，抑
制作用随着浓度的增高而增强，随着浓度升高至 50 μmol /L
时，化合物对肿瘤细胞增殖的抑制程度趋于平缓。对 HepG2
肿瘤细胞抑制活性由强到弱的顺序为:木樨草素 ＞槲皮素 ＞
异鼠李素 ＞芹菜素 ＞异槲皮苷。其中 100 μmol /L 木樨草素、
槲皮素、异鼠李素对 HepG2细胞的增殖抑制作用与 20 μmol /L
5 － Fu(抑制率 54. 3%，图中未显示)没有明显差异。异槲皮
苷对 HepG2 细胞体外增殖的抑制作用较弱，100 μmol /L异槲
皮苷的 HepG2 增殖抑制率仅为 20． 3%。
2． 2 中华补血草 5 种黄酮类化合物对离体培养的 Hela 细胞
增殖的影响
5 种中华补血草黄酮类化合物作用 48 h 对 Hela 肿瘤细
胞生长的抑制作用见图 2。可见 6． 25 ～ 100． 00 μmol /L 异鼠
李素、槲皮素、木樨草素、芹菜素可显著抑制 Hela 肿瘤细胞体
外增殖活性，抑制作用亦随着浓度的增高而增强，100 μmol /L
4 种化合物对Hela肿瘤细胞抑制活性由强到弱的顺序为:木
樨草素 ＞槲皮素 ＞异鼠李素 ＞芹菜素。木樨草素和槲皮素对
HepG2 细胞的增殖抑制作用与 20 μmol /L 5 － Fu(抑制率
40. 2%)没有明显差异。6． 25 ～ 100． 00 μmol /L 异槲皮苷对
Hela肿瘤细胞体外增殖无明显影响。
2． 3 中华补血草 5 种黄酮类化合物对 DPPH 自由基的清除
作用
5种化合物在 6． 25 ～ 200． 00 μmol /L 浓度范围内均具有
良好的 DPPH自由基清除活性，并随浓度的增加，清除作用增
强(图 3)。其中，槲皮素对 DPPH 自由基清除作用最强，
200 μmol /L 槲皮素的 DPPH 自由基清除率最高，达 87． 3%，
高于阳性对照维生素 C 组，5 种黄酮化合物自由基清除活性
强弱顺序为:槲皮素 ＞木樨草素 ＞异鼠李素 ＞芹菜素 ＞异槲
皮苷。
3 讨论与结论
黄酮类化合物，别称生物类黄酮，是以色酮环和苯环为基
本结构的一类化合物的总称，为植物的次级代谢产物，广泛分
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布于自然界。目前已发现的黄酮类单体化合物达 9 000 多
种，研究证明，黄酮类化合物具有多种生物活性。近年来研究
发现，黄酮类化合物可通过提高抗氧化物酶的活性、清除自由
基、诱导肿瘤细胞凋亡等多种渠道发挥抗肿瘤作用［21］，相关
抗肿瘤活性引起了广泛关注。目前已有多个黄酮类化合物作
为抗肿瘤药物进入临床。黄酮类化合物已成为今后新药开发
研究中值得重视的资源，具有良好的开发利用前景。
中华补血草中黄酮类化合物含量丰富，已有研究显示，补
血草属植物黄酮类化合物具有显著抗肿瘤活性，黄酮类化合
物可能是中华补血草抗肿瘤作用的有效成分。本研究比较了
中华补血草 5 种含量丰富的黄酮化合物———异鼠李素、槲皮
素、异槲皮苷、木樨草素、芹菜素对肿瘤细胞体外增殖的抑制
作用。MTT试验结果表明，中华补血草中 5 种黄酮类化合物
均具有一定的体外抗肿瘤活性，但活性强弱存在差异。木樨
草素、槲皮素、异鼠李素抗肿瘤活性较强，芹菜素次之，而异槲
皮苷对 HepG2 细胞体外增殖显示较弱抑制作用，对 Hela 肿
瘤细胞体外增殖则无明显影响。比较结构类似的 2 种化合物
槲皮素与异槲皮苷发现，二者抗肿瘤活性存在明显差异，可能
是因为分子中 C3位的羟基被糖基取代，而 C2 － C3位双键是黄
酮化合物抗肿瘤活性的一个关键因素，因此异槲皮苷抗肿瘤
活性显著下降［22］。
为进一步明确中华补血草黄酮类化合物的抗肿瘤机制，
本研究运用 DPPH自由基清除试验，比较 5 种黄酮类化合物
的体外抗氧化活性，发现 5 种化合物在本试验浓度范围内均
具有良好的 DPPH自由基清除活性，并随浓度的增加清除作
用增强。其中槲皮素、木樨草素、异鼠李素抗氧化活性较强，
异槲皮苷、芹菜素较弱。进一步研究发现，5 种黄酮的抗肿瘤
活性与抗氧化活性强弱比较接近，但并不完全一致，表明中华
补血草黄酮类化合物抗氧化活性是其发挥抗肿瘤作用的重要
因素，其他抗肿瘤机制还有待于进一步研究阐明。
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